Método ex vivo para avaliar a motilidade espontânea do trato reprodutivo do mouse e um algoritmo de rastreamento de movimento do útero baseado em MATLAB para análise de dados

Summary

As contrações uterinas são importantes para o bem-estar das fêmeas. No entanto, a contratilidade patologicamente aumentada pode resultar em dismenorreia, especialmente em fêmeas mais jovens. Aqui, nós descrevemos uma preparação ex vivo simples permitindo a avaliação rápida da eficácia de afrouxamento do músculo liso que podem ser usados tratando o dysmenorrhea.

Abstract

A dismenorreia, ou cãibras dolorosas, é o sintoma mais comum associado à menstruação em fêmeas e sua gravidade pode dificultar a vida cotidiana das mulheres. Aqui, apresentamos um método fácil e barato que seria instrumental para testar novas drogas diminuindo a contratilidade uterina. Este método utiliza a habilidade original do intervalo reprodutivo do rato inteiro para expor a motilidade espontânea quando mantido ex vivo em um prato de Petri que contem o amortecedor oxigenado de Krebs. Esta motilidade espontânea assemelha-se à atividade myometrial onda-como do útero humano, referido como ondas endometrial. Para demonstrar a eficácia do método, empregamos um bem conhecido medicamento relaxante uterino, epinefrina. Nós demonstramos que a motilidade espontânea do intervalo reprodutivo do rato inteiro pode ser rapidamente e reversivelmente inibida pela epinefrina de 1 μM neste modelo do prato de Petri. Documentar as mudanças da motilidade uterina pode ser facilmente feito usando um telefone inteligente comum ou uma câmera digital sofisticada. Nós desenvolvemos um algoritmo MATLAB-baseado permitindo o seguimento do movimento para quantificar mudanças uterine espontâneas da motilidade medindo a taxa de movimentos uterine do chifre. Uma grande vantagem dessa abordagem ex vivo é que o trato reprodutivo permanece intacto durante todo o experimento, preservando todas as interações celulares intrauterinas intrínsecas. A principal limitação dessa abordagem é que até 10-20% dos úteros podem não apresentar motilidade espontânea. Até o momento, este é o primeiro método quantitativo ex vivo para avaliar a motilidade uterina espontânea em um modelo de prato de Petri.

Introduction

Como um órgão fêmea principal, o útero é crucial para a reprodução e essencial para a nutrição do feto¹. O útero consiste em três camadas: o perimetrium, o miométrio e o endométrio. O miométrio é a camada contrátil principal do útero e joga um papel chave na entrega do feto. O endométrio é a camada mais interna que reveste a cavidade uterina e é essencial para a implantação do embrião. Em fêmeas não gestantes em idade reprodutiva, a camada endometrial é vertida mensalmente no início do ciclo menstrual. O miométrio auxilia neste processo de derramamento, mantendo as contrações miometrial espontâneas necessárias para limpar o tecido endometrial n....

Protocol

Todos os procedimentos com animais foram aprovados pelo Comitê institucional de cuidados e uso de animais da faculdade de medicina da Universidade de Indiana (Indianapolis, IN). 2-5 mês-velho F2-129S-C57BL/6 ratos fêmeas sexualmente maduros foram utilizados no estudo.

Atenção: Assegure a segurança desgastando um revestimento, uma máscara, e umas luvas do laboratório ao trabalhar com animais e materiais bioperigosos.

1. preparação da solução

1. Prepare o tampão Krebs, que contém: 130 mM NaCl, 5 mM KCl, 2 mM CaCl₂, 1,2 mm NaH₂po₄, 0,56 mM MgCl₂, 25....

Results

A Figura 1 mostra imagens representativas tiradas durante todo o procedimento de isolamento do trato reprodutivo descrito neste protocolo. Para evitar contaminar o tampão com pêlo, o que diminuiria a qualidade do vídeo, umedecido o corpo do mouse com 70% de etanol. A principal referência para a seção de dissecção do protocolo é encontrar a bexiga urinária. O útero ea vagina será localizado inferior à bexiga urinária.

Para testar o protocolo, tratamos todo o trato .......

Discussion

Aqui, descrevemos um método para avaliar a contratilidade espontânea de todo o trato reprodutivo de roedores, que inclui os ovários, ovidutos, chifres uterinos e a vagina. Utilizou-se um método semelhante para demonstrar o efeito relaxante da fenilefrina na motilidade uterina espontânea¹³, porém, no passado não pudemos fornecer análise quantitativa dos dados. Neste trabalho, desenvolvemos um algoritmo para análise quantitativa de dados de motilidade utilizando o módulo de rastreamento de movimento.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cloridrato de epinefrina	Sigma-Aldrich	E4642
PBS	Fisher Sceintific de Dulbecco	17-512Q
Etanol 200 PROOF	Decon Laboratories	2701
NaCl	Sigma-Aldrich	S7653
Glicose	Sigma-Aldrich	G7528
KCl	Sigma-Aldrich	P9333
CaCl2 · 2H2O	Sigma-Aldrich	C5080
NaH2PO4	Sigma-Aldrich	S0751
MgCl2  · 6H2O	Sigma-Aldrich	M9272
NaHCO3	Sigma-Aldrich	S6297
Isoflurano, USP	Patterson Veterinary	07-893-2374
Dissecando Pinça de Precisão Extra-Fina	Fisher Sceintific	13-812-42
Tesoura de Íris Fina Endurecida Curvada	Ferramentas de Ciência Fina	14091-09
Dissecção Estereomicroscópio Modular de Alto Desempenho	Leica	MZ6
Câmera de Microscópio Digital Colorida de 5 Megapixel com sistema de resfriamento ativo	Leica	DFC425 C
Stereomaster Microscópio Fibra Óptica Fontes de Luz	Fisher Sceintific	12-562-21
Pesa Barco	Fisher Sceintific
Convertors Astound Bata Cirúrgica Padrão	Cardinal Health	9515	Luvas Pequenas, Médias ou Grandes
	McKesson Corporation	20-1080	Pequeno, Médio ou Grande; luvas cirúrgicas de látex ou nitrilo estéreis sem pó
Placa de Petri	Corning Falcon	351029	100 mm
Placa de Petri	Corning Falcon	353001	35 mm
95% O2- 5% CO2 mistura gasosa	Praxair	MM OXCD5-K
Máscaras de laço de orelha	Valumax International	5430E-PP
DSLR 24,2 MP Câmera	Canon	EOS Rebel T6i
MATLAB	MathWorks	N/A	versão 2019 ou posterior