Her presenterer vi protokoller av dyrking menneskelige periodontal leddbånd (PDL) celle spheroids av Chitosan filmer. Kulturen i tre-dimensjonale (3D) Cellular spheroids gir et alternativ til konvensjonell vev kultur polystyren (TCPS) kultur system.
Periodontal leddbånd (PDL) cellene holder store løftet for periodontal vev gjenfødelse. Konvensjonelt, er PDL celler kultivert på to-dimensjonale (2D) underlag som vev kultur polystyren (TCPS). Imidlertid har karakteristiske endringer av PDL celler blitt observert under in vitro kultur. Dette fenomenet er sannsynligvis fordi 2D TCPS skiller seg fra in vivo tredimensjonale (3D) mikromiljøet. Sammenlignet med celler kultivert på 2D-underlag, har celler dyrket i en 3D-mikromiljøet, mer likheter med in vivo-celler. Derfor, 3D cellekultur modeller gir et lovende alternativ for konvensjonelle 2D monolag cellekultur. For å forbedre konvensjonelle PDL cellekultur modeller, har vi nylig utviklet en 3D-cellekultur metode, som er basert på spheroid dannelse av PDL celler på Chitosan filmer. Her presenterer vi detaljert celle spheroid kultur protokoller basert på Chitosan filmer. Den 3D-kultur system av PDL mobilnettet spheroids overvinne noen av begrensningene knyttet til konvensjonelle 2D monolag cellekultur, og dermed kan være egnet for å produsere PDL celler med en forbedret terapeutisk effekt for fremtidig periodontal vev gjenfødelse.
Periodontitt, initialisert hovedsakelig av Dental plakk1, er preget av skaden av periodontal vev inkludert periodontal LEDDBÅND (PDL), alveolære bein, og cementen. Nåværende behandlinger for periodontitt er vanligvis vellykket i å forebygge fremdriften av den aktive sykdommen, men regenerering av tapt periodontal vev forblir en klinisk utfordring. Nylig har viktig fremgang er gjort i celle-baserte tilnærminger for periodontal vev gjenfødelse å overvinne ulempene med dagens behandlinger2,3,4.
Vår tidligere systematisk gjennomgang avslørte at PDL celler viste stort potensial for periodontal regenerering5. Konvensjonelt, er PDL celler kultivert på to-dimensjonale (2D) underlag som vev kultur polystyren (TCPS). Imidlertid har karakteristiske endringer av PDL celler blitt observert under in vitro kultur6. Dette fenomenet er sannsynligvis fordi 2D TCPS skiller seg fra in vivo tredimensjonale (3D) mikromiljøet7. Sammenlignet med celler som er kultivert på 2D-underlag, har celler som dyrkes i 3D-mikromiljøet, mer likheter med in vivo-celler8. Derfor, 3D cellekultur modeller gir et lovende alternativ for konvensjonelle 2D monolag cellekultur.
Konvensjonell 3D-kultur metoden er innkapsle celler i 3D-Biomaterials. Sammenlignet med celler innkapslet i 3D Biomaterials, cellular spheroids etterligne in vivo situasjonen tettere fordi spheroids er aggregater av celler vokser fritt for utenlandske materialer9,10,11, 12. det er rapportert at mobilnettet SPHEROIDS forfremmet MSC bioactivities via bevaring av ekstracellulære MATRISE (ECM) komponenter inkludert fibronektin og laminin13. For å forbedre konvensjonelle PDL cellekultur modeller, har vi nylig utviklet en 3D PDL cellekultur metode, som er basert på spheroid dannelse av PDL celler på Chitosan filmer14. Spheroid formasjon økte selv Fornyelses-og osteogen differensiering kapasiteter av PDL celler14. Her presenterer vi detaljert PDL celle spheroid kultur protokoller basert på Chitosan filmer. Den 3D-kultur system av PDL mobilnettet spheroids overvinne noen av svakhetene knyttet til konvensjonelle TCPS cellekultur, og dermed kan være egnet for å produsere PDL celler med en forbedret terapeutisk effekt for fremtidig periodontal vev gjenfødelse.
Den nåværende studien introduserte en 3D cellekultur system for å overvinne noen begrensninger knyttet til konvensjonelle 2D monolag cellekultur. Ifølge protokollen ble PDL Cellular spheroids vellykket dannet av dyrking celler på Chitosan filmer. Vår tidligere studie rapporterte at spheroid formasjon økte selv-fornyelse og osteogen differensiering kapasitet på PDL celler14. I stedet for å bruke et enzym for å høste celler fra TCPS, kan PDL celle spheroids høstes fra Chitosan filmer ved…
The authors have nothing to disclose.
Denne studien ble sponset av National Natural Science Foundation i Kina (NSFC 81700978), grunnleggende forskningsmidler for de sentrale universitetene (1504219050), Natural Science Foundation i Shanghai (17ZR1432800), og Shanghai Medical Exploration Project ( 17411972600).
α-MEM | Gibco | 11900-073 | |
acetic acid | Sigma-Aldrich | 64197 | |
Cell culture flask 25 cm2 | Corning | 430639 | |
Cell culture flask 75 cm2 | Corning | 430641 | |
Chitosan | Heppe Medical Chitosan GmbH | / | molecular weight 500 kDa, degree of deacetylation 85% |
FCS | Gibco | 26140-079 | |
Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit | Molecular Probes | L3224 | |
NaOH | Sigma-Aldrich | 1310732 | |
PBS | KeyGen Biotech | KGB5001 | |
pen/strep | Gibco | 15140-122 | |
Trypsin/EDTA | KeyGen Biotech | KGM25200 | |
15 mL conical centrifuge tube | Corning | 430790 | |
24-well plate | Corning | 3524 |