Análise de marcha de baixo custo para fenotipagem comportamental de modelos de camundongo de doença neuromuscular

Resumo

A análise de pegada é uma alternativa de baixo custo para programas digitalizados de análise da marcha para pesquisadores que quantifiquem anormalidades de movimento em camundongos. Devido à sua velocidade, simplicidade e potencial longitudinal, é ideal para a fenotipagem comportamental de modelos de mouse.

Resumo

A medida da locomoção animal é uma ferramenta comportamental comum usada para descrever o phenotype de uma doença, de um ferimento, ou de um modelo de droga dado. O método de baixo custo da análise da marcha demonstrado aqui é uma medida simples, mas efetiva, de anormalidades da marcha em modelos murinos. As pegadas são analisadas pintando os pés de um rato com a pintura washable não-tóxica e permitindo que o assunto ande através de um túnel em uma folha de papel. O projeto do túnel do teste aproveita-se do comportamento natural do rato e de sua afinidade para lugares escuros pequenos. O comprimento da passada, a largura da passada e a propagação do dedo do pé de cada mouse são facilmente medidos usando uma régua e um lápis. Este é um método bem estabelecido e confiável, e gera várias métricas que são análoga aos sistemas digitais. Esta aproximação é sensível bastante para detectar mudanças no Stride cedo na apresentação do phenotype, e devido a sua aproximação não invasora, permite o teste dos grupos através da vida-extensão ou da apresentação fenotípica.

Introdução

A locomoção requer coordenação neurológica e musculoesquelética complexa, e déficits em um único aspecto das vias motoras podem produzir anormalidades observáveis da marcha^1,2. A análise da marcha é uma ferramenta crítica para pesquisadores testando modelos de mouse, pois fornece dados comportamentais quantificáveis sobre como uma determinada doença, lesão ou droga impacta o movimento de um animal³. No entanto, a análise de marcha digitalizada requer a compra de uma esteira, uma câmera e software associado, que pode ser proibitivamente caro para os pesquisadores. A análise da marcha é f....

Protocolo

Todos os testes realizados com camundongos foram revisados e aprovados pelo Comitê institucional de cuidados e uso de animais (IACUC) da Duke University. O pessoal responsável pelo teste e a pontuação devem ser cegos ao genótipo animal ou condição experimental até que a análise da marcha e a Pontuação dos artigos tenham sido concluídas para toda a coorte.

1. preparação do material de teste

1. Conduza o teste com um túnel construído de 3 painéis acrílicos desobstruídos pre-cut que são 0,375 polegadas grossos. Monte o túnel colando os painéis junto com um vedador que lig especificamente o acrílico e não emita odores quando secado.
   ....

Resultados

Com número suficiente de animais, este procedimento é capaz de detectar diferenças de marcha entre genótipos de camundongo, dentro da mesma cepa ao longo do tempo. A Figura 1b mostra traços representativos de imagens da pegada coletadas em nosso laboratório, usando um modelo do rato da atrofia muscular espinal e bulbar X-lig (SBMA), uma desordem neurodegenerativas que afeta uns mais baixos neurônios do motor e músculo esqueletal. Nós temos relatado previamente que os ratos machos do Bac fxAR.......

Discussão

Usando o método de análise de marcha de baixo custo descrito acima, mostramos com sucesso a identificação de vários parâmetros de disfunção da marcha em idades pós-sintomáticas no modelo de mouse BAC fxAR121 da SBMA. As diminuições no comprimento da passada são consistentes com os estudos anteriores de SBMA de modelos do rato e de pacientes humanos⁹. Nós igualmente mostramos pela primeira vez que há umas diferenças significativas na propagação do dedo do pé do Hind-membro em ratos sintomáticos de .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Paquímetro	n/a	n/a	deve ter marcações de até 0,1 mm
Craft Glue	E6000	n/a
Tinta de Pegada (Tinta Tempera)	Artmind	n/a	deve ser não tóxico
Pincéis de Barril Redondo	Symply Simmons	n/a	0,5 cm de diâmetro
Régua	n/a	n/a	deve ter marcações de até milímetros
Papel de Pontuação (Blocos de Aquarela)	Canson	n/a	cortado no tamanho
Túnel e Câmara de Gol	Interstate Plastics	n/a	cortado no tamanho