نموذج زرع الشريان الاورطي لعنق الرحم من murine باستخدام تقنيه الكفة المعدلة غير الخياطة
Summary
هنا ، نقدم بروتوكولا لزرع الابهر غير المتجانس في الفئران باستخدام تقنيه الكفة غير الخياطة في نموذج murine عنق الرحم. ويمكن استخدام هذا النموذج لدراسة الامراض الاساسيه لاعتلال الاوعيه الدموية المزمنة الطعوم (CAV) ويمكن ان تساعد في تقييم العوامل العلاجية الجديدة من أجل منع تشكيلها.
Abstract
مع الأخذ ببروتوكولات مثبطه للمناعة قويه ، والتقدم المتميزة ممكنة في الوقاية والعلاج من نوبات الرفض الحاد. غير انه لم يتسن خلال العقود الماضية ملاحظه سوي تحسن طفيف في النتائج الطويلة الأجل للأعضاء الصلبة المزروعة. في هذا السياق ، لا يزال اعتلال الاوعيه الدموية المزمن (CAV) يمثل السبب الرئيسي لفشل الأعضاء المتاخر في زراعه القلب والكلي والرئة.
وحتى الآن ، لا يزال المرض الكامن وراء تطور CAV غير واضح ، موضحا سبب فقدان استراتيجيات العلاج الفعالة حاليا والتاكيد علي الحاجة إلى نماذج تجريبية ذات صله من أجل دراسة الفيزيولوجيا المرضية الكامنة التي تؤدي إلى تشكيل CAV. يصف البروتوكول التالي نموذجا لزرع الابهر العنقي غير المتجانس باستخدام تقنيه الكفة غير الخياطة المعدلة. في هذه التقنية ، يتم وضع شريحة من الابهر الصدري في الشريان السباتي المشترك الأيمن. مع استخدام تقنيه الكفة غير الخياطة ، يمكن إنشاء نموذج سهل التعلم والاستنساخ ، والتقليل إلى ادني حد ممكن من عدم تجانس الاوعيه الدموية المجهرية الصغيرة.
Introduction
علي مدي العقود الستة الماضية ، تطورت زراعه الأعضاء الصلبة من اجراء تجريبي إلى معيار الرعاية لعلاج فشل الجهاز في المرحلة النهائية1. ونظرا لتحسن عوامل مضادات الميكروبات والتقنيات الجراحية والتقدم في الأفواج المثبطة للمناعة ، فان معدل النجاح المبكر لزراعه الأعضاء الصلبة قد ازداد بشكل ملحوظ علي مدي العقود الماضية2.
غير ان معدلات البقاء علي قيد الحياة الطويلة الأجل لم تتحسن تحسنا كبيرا بنفس الطريقة3. تطوير CAV هو العامل الرئيسي الذي يحد من البقاء علي المدى الطويل4,5,6. ويتميز هذا المرض من خلال تشكيل طبقه الورم العضوي المتمركزة التي تتكون من خلايا العضلات الملساء ، مما يؤدي إلى تضييق تدريجي للسفينة وسوء التغذية علي التوالي من الجهاز الصلبة المزروعة. في المتلقيين زرع القلب ، يمكن تشخيص آفات CAV في ما يصل إلى 75 ٪ من المرضي 3 سنوات بعد زرع7.
الفيزيولوجيا المرضية من CAV ليست مفهومه تماما حتى الآن. ويبدو ان تكون مرتبطة بالعديد من العوامل المناعية وغير المناعية ، مما يؤدي إلى تلف البطانية مع التنشيط البطانية اللاحقة والخلل الوظيفي8. حتى الآن ، لا يوجد خيار العلاج السببية للوقاية من CAV ، والتاكيد علي الحاجة إلى نموذج الحيوانية الصغيرة استنساخه من أجل دراسة تشكيل والعلاج المحتمل من CAV.
مع استخدام نماذج زرع الشريان الابهري ، CAV مثل آلافات يمكن ان ينظر اليها بعد 4 أسابيع من الزرع. هذه آلافات تتكون أساسا من خلايا العضلات الملساء الاوعيه الدموية ، التالي ، تشبه علم الامراض البشرية. بسبب مجموعه واسعه من الوراثية وضرب الفئران ، واستخدام نماذج الماوس في زرع الامراض المرتبطة يوفر فرصه فريدة لتحديد الخيارات العلاجية الجديدة وفهم تنميتها. بسبب القطر الصغير للسفن المزروعة ومع ذلك ، عاده ما يرتبط استخدام نماذج الماوس مع منحنيات التعلم الطويل ومعدل المضاعفات الاوليه العالية9. مع إدخال تقنيه الكفة غير خياطه ، ويمكن تسهيل هذا الجزء الأكثر تحديا من العملية والحفاظ علي قطر من اناستاموسيس ثابت10،11.
Protocol
Representative Results
Discussion
اعتلال الاوعيه الدموية المزمنة الطعوم هو السبب الرئيسي لفقدان الطعم في وقت متاخر بعد زرع الأعضاء الصلبة من القلب والمحتملة الكلي والرئة الطعوم8. حتى الآن ، لا يمكن وضع نظام علاجي السببية من أجل منع تشكيل CAV.
الفيزيولوجيا المرضية لCAV متعددة العوامل وتنطوي علي ال?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
اي.
Materials
| Balb-c Mice (H2-d) | Charles River | Strain# 028 | Donor animal |
| Bipolar cautery system | ERBE | ICC 50 / 20195-023 | Bipolar cautery |
| C57BL/6J (H-2b) | Charles River | Strain# 027 | Recipient animal |
| Halsey Needle Holders | FST | 12501-12 | Needle Holder |
| Halsted-Mosquito Forceps | AESCULAP | BH111R | Curved Clamp |
| Medical Polyimide Tubing | Nordson MEDICAL | 141-0031 | Cuff-Material |
| Micro Serrefines | FST | 18055-04 | Micro Vessel Clip |
| Micro-Adson Forceps (serrated) | FST | 11018-12 | Standard Forceps |
| Micro-Serrefine Clamp Applying Forceps | FST | 18057-14 | Clipapplicator |
| S&T Forceps – SuperGrip Tips (Angled 45°) | S&T | 00649-11 | Fine Forceps |
| S&T Vessel Dilating Forceps – Angled 10° (Tip diameter 0.2 mm) | S&T | 00125-11 | Vesseldilatator |
| Schott VisiLED Set | Schott | MC 1500 / S80-55 | Light |
| Stereoscopic microscope | ZEISS | SteREO Discovery.V8 | Microscope |
| Student Fine Scissors / Surgical Scissors – Sharp-Blunt | FST | 91460-11 / 14001-12 | Standard Sissors |
| Vannas-Tübingen Spring Scissors (curved, 8.5 cm) | FST | 15004-08 | Microsissors (curved) |
| Vannas-Tübingen Spring Scissors (straight, 8.5 cm) | FST | 15003-08 | Microsissors (straight) |
Referências
- Rana, A., et al. Survival benefit of solid-organ transplant in the United States. JAMA Surgery. 150 (3), 252-259 (2015).
- Rana, A., Godfrey, E. L. Outcomes in Solid-Organ Transplantation: Success and Stagnation. Texas Heart Institute Journal. 46 (1), 75-76 (2019).
- Meier-Kriesche, H. U., Schold, J. D., Srinivas, T. R., Kaplan, B. Lack of improvement in renal allograft survival despite a marked decrease in acute rejection rates over the most recent era. American Journal of Transplantation. 4 (3), 378-383 (2004).
- Bagnasco, S. M., Kraus, E. S. Intimal arteritis in renal allografts: new takes on an old lesion. Current Opinion in Organ Transplantation. 20 (3), 343-347 (2015).
- Hollis, I. B., Reed, B. N., Moranville, M. P. Medication management of cardiac allograft vasculopathy after heart transplantation. Pharmacotherapy. 35 (5), 489-501 (2015).
- Verleden, G. M., Raghu, G., Meyer, K. C., Glanville, A. R., Corris, P. A new classification system for chronic lung allograft dysfunction. The Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (2), 127-133 (2014).
- Ramzy, D., et al. Cardiac allograft vasculopathy: a review. Canadian Journal of Surgery. 48 (4), 319-327 (2005).
- Skoric, B., et al. Cardiac allograft vasculopathy: diagnosis, therapy, and prognosis. Croatian Medical Journal. 55 (6), 562-576 (2014).
- Koulack, J., et al. Development of a mouse aortic transplant model of chronic rejection. Microsurgery. 16 (2), 110-113 (1995).
- Rowinska, Z., et al. Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation – An Instructional Video. Journal of Visualized Experiments. (128), (2017).
- Dietrich, H., et al. Mouse model of transplant arteriosclerosis: role of intercellular adhesion molecule-1. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 20 (2), 343-352 (2000).
- Mähler Convenor, M., et al. FELASA recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit colonies in breeding and experimental units. Laboratory Animals. 48 (3), 178-192 (2014).
- Ollinger, R., et al. Blockade of p38 MAPK inhibits chronic allograft vasculopathy. Transplantation. 85 (2), 293-297 (2008).
- Thomas, M. N., et al. SDF-1/CXCR4/CXCR7 is pivotal for vascular smooth muscle cell proliferation and chronic allograft vasculopathy. Transplant International. 28 (12), 1426-1435 (2015).
- Ollinger, R., et al. Bilirubin: a natural inhibitor of vascular smooth muscle cell proliferation. Circulation. 112 (7), 1030-1039 (2005).
- Segura, A. M., Buja, L. M. Cardiac allograft vasculopathy: a complex multifactorial sequela of heart transplantation. Texas Heart Institute Journal. 40 (4), 400-402 (2013).
- McDaid, J., Scott, C. J., Kissenpfennig, A., Chen, H., Martins, P. N. The utility of animal models in developing immunosuppressive agents. European Journal of Pharmacology. 759, 295-302 (2015).
- Shi, C., Russell, M. E., Bianchi, C., Newell, J. B., Haber, E. Murine model of accelerated transplant arteriosclerosis. Circulation Research. 75 (2), 199-207 (1994).
- Koulack, J., et al. Importance of minor histocompatibility antigens in the development of allograft arteriosclerosis. Clinical Immunology and Immunopathology. 80 (3 Pt 1), 273-277 (1996).
- Maglione, M., et al. A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis. Surgery. 141 (5), 682-689 (2007).
- Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. Journal of Visualized Experiments. (92), e50753 (2014).
- Nakao, A., Ogino, Y., Tahara, K., Uchida, H., Kobayashi, E. Orthotopic intestinal transplantation using the cuff method in rats: a histopathological evaluation of the anastomosis. Microsurgery. 21 (1), 12-15 (2001).
