Isolação de populações específicas do Neuron do elegans da Caenorhabditis da lombriga

Edward  M. Germany; Nataliya Zahayko; Oleh Khalimonchuk

doi:10.3791/60145

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Artigo de método

Isolação de populações específicas do Neuron do elegans da Caenorhabditis da lombriga

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DOI:

10.3791/60145

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6 de agosto de 2019

Edward M. Germany¹ , Nataliya Zahayko¹ , Oleh Khalimonchuk¹^,²^,³^,⁴

¹Department of Biochemistry, University of Nebraska, ²Nebraska Redox Biology Center, University of Nebraska, ³Nebraska Center for Integrated Biomolecular Communication, University of Nebraska, ⁴Fred & Pamela Buffett Cancer Center, University of Nebraska Medical Center

Neste artigo

Resumo

Aqui, nós apresentamos um protocolo para a isolação simples de grupos específicos de pilhas neuronal vivos que expressam a proteína fluorescente verde das linhas transgênicas dos elegans de Caenorhabditis . Este método permite uma variedade de estudos ex vivo focados em neurônios específicos e tem a capacidade de isolar as células para uma maior cultura de curto prazo.

Resumo

Durante o processo de envelhecimento, muitas células acumulam altos níveis de danos que levam à disfunção celular, que está subjacente a muitas condições geriátricas e patológicas. Os neurônios pós-mitóticos representam um tipo de célula principal afetado pelo envelhecimento. Embora existam vários modelos de mamíferos de envelhecimento neuronal, eles são desafiadores e caros para estabelecer. O lombriga Caenorhabditis elegans é um modelo poderoso para estudar o envelhecimento neuronal, como estes animais têm tempo curto, uma caixa de ferramentas genética robusta disponível, e sistema nervoso bem catalogado. O método aqui apresentado permite a isolação sem emenda de pilhas específicas baseadas na expressão de uma proteína fluorescente verde transgénica (GFP). Linhas de animais transgênicas expressando GFP distintos, os promotores específicos do tipo celular são digeridos para remover a cutícula externa e suavemente interrompidas mecanicamente para produzir chorume contendo vários tipos de células. As células de interesse são então separadas de células não-alvo através de triagem de células ativadas por fluorescência, ou por anti-GFP-acoplado contas magnéticas. As pilhas isoladas podem então ser cultivadas por um tempo limitado ou ser usadas imediatamente para análises ex vivo Cell-specific tais como a análise transcricional pelo PCR quantitativo do tempo real. Assim, este protocolo permite a análise rápida e robusta de respostas Cell-specific dentro das populações neuronal diferentes em C. elegans.

Introdução

Ao longo das últimas décadas, o modelo metazoários organismo Caenorhabditis elegans tem sido um trunfo tremendo no estudo de neurônios, circuitos neuronais e seu papel em respostas fisiológicas e comportamentais, e envelhecimento associado neurodegenerativa Doenças. Uma característica única de C. elegans é que os animais são transparentes, permitindo que a linhagem de todas as células somáticas adultas seja mapeada¹. C. elegans também abriga a quantidade gerenciável de neurônios, levando à morfologia e conectividade do sistema nervoso sendo bem compreendido². A linhagem de células invariantes, ....