O modelo animal da falha de fígado aguda desenvolvido no estudo atual apresenta uma alternativa praticável para o estudo de terapias potenciais. O modelo atual emprega o efeito combinado de ferimento hepático físico e droga-induzido e fornece uma janela de tempo apropriada para estudar o potencial de terapias novas.
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Artigo de método
Geração de um modelo de rato de insuficiência hepática aguda, combinando 70% hepatectomia parcial e paracetamol
Neste artigo
Resumo
Resumo
A insuficiência hepática aguda (ALF) é uma condição clínica causada por várias etiologias, resultando na perda de funções metabólicas, bioquímicas, sintetizantes e desintoxicantes do fígado. Na maioria dos casos irreversíveis de danos hepáticos, o transplante de fígado ortotrópico (OLT) continua sendo o único tratamento disponível. Para estudar o potencial terapêutico de um tratamento para ALF, seu teste prévio em um modelo animal de ALF é essencial. No presente estudo, um modelo ALF em ratos foi desenvolvido apartir da combinação de hepatectomia parcial de 70% (PHx) e injeções de paracetamol (APAP) que fornece uma janela terapêutica de 48 h. Os lobos laterais medianos e esquerdos do fígado foram removidos para extirpar 70% da massa do fígado e O APAP foi dado 24 h postsurgically por 2 dias. A sobrevivência em animais induzidos por ALF foi encontrada para ser diminuída severamente. O desenvolvimento da ALF foi confirmado por níveis alterados de soro das enzimas alanina amino transferase (ALT), aspartate amino transferase (AST), fósforo alcalino (ALP); mudanças no tempo de protrombina (PT); e avaliação do rácio normalizado internacional (INR). Estudo do perfil de expressão gênica por qPCR revelou um aumento nos níveis de expressão de genes envolvidos na apoptose, inflamação e na progressão da lesão hepática. A degeneração difusa de hepatócitos e a infiltração de células imunes foram observadas pela avaliação histológica. A reversibilidade da ALF foi confirmada pela restauração dos níveis de sobrevivência e soro de ALT, AST e ALP após transplante intrasplenic de hepatócitos de ratos saudáveis singênicos. Este modelo apresenta uma alternativa confiável para os modelos animais ALF disponíveis para estudar a fisiopatologia da ALF, bem como para avaliar o potencial de uma nova terapia para ALF. O uso de duas abordagens diferentes também permite estudar o efeito combinado da lesão hepática induzida por drogas e drogas. A reprodutibilidade e viabilidade do procedimento atual são um benefício adicional do modelo.
Introdução
A insuficiência hepática aguda (ALF) é definida pela Associação Americana para o Estudo de Doenças Hepáticas como o rápido desenvolvimento de lesão hepática aguda sem quaisquer sinais prévios de dano e é caracterizada por comprometimento grave das funções sintéticas, metabólicas e desintoxicantes do fígado1. ALF difere da insuficiência hepática crônica, onde a falha ocorre como resultado de lesão hepática causada durante um longo período de tempo e de insuficiência hepática crônica aguda (ACLF), onde danos bruscos abruptos ocorre como resultado de doenças hepáticas crônicas2,3,
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Protocolo
O procedimento descrito abaixo foi aprovado pelo Comitê Institucional de Ética Animal do Instituto Nacional de Imunologia, Nova Deli. O número de referência em série da aprovação é o IAEC#355/14.
1. Preparação
- Prepare-se para o procedimento cirúrgico, como descrito anteriormente por Das B et al.26.
- Use 6-8 semanas de idade ratos Wistar consanguíneos com um peso corporal de 200-250 g.
- Abrigar os animais em condições padrão de cuidados com os animais e alimentá-los com rat chow e libitum antes e depois do procedimento.
- Ao realizar 70% de PHx, use uma mistura padrão de coquetel de....
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Resultados
Percentual de sobrevivência em modelos animais de ALF
A dose ideal de APAP para causar ALF em combinação com 70% PHx foi padronizado como 750 mg / kg de peso corporal. O regime de tratamento começou 24 h após 70% de PHx, quando os animais se recuperaram completamente da cirurgia, e consistiu em duas doses de APAP em intervalos de 24 h. A mortalidade foi observada à taxa de 80% após a administração da segunda dose de APAP, 48 h pós-cirurgia. A porcentagem de sobrevivência foi analisada e traçada atravé.......
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Discussão
O desenvolvimento de um modelo animal adequado para ALF é fundamental para uma melhor compreensão da patogênese e progressão da ALF. Um modelo animal alf bem caracterizado também oferece a oportunidade para o desenvolvimento e julgamento de novas abordagens terapêuticas contra a ALF. Muitas tentativas foram feitas para desenvolver um modelo clinicamente relevante de ALF6,12,21,23,
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pela concessão principal recebida do Departamento de Biotecnologia, Governo da Índia para o Instituto Nacional de Imunologia, Nova Deli.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Paracetamol (Biocetamol) | EG Pharmaceuticals | Sem número de catálogo específico (aquisição local) | |
| Kit de fosfatase alcalina (DEA) | Coral Clinical System, Índia | Sem número de catálogo específico (aquisição local) | |
| Analisador automatizado | Tulip, Alto Santracruz, Índia | Screen Maaster 3000 | Analisador bioquímico para teste funcional do fígado |
| Betadine ( Solução de Povidon-Iodo) | Win-Medicare; Índia | Nenhum número de catálogo específico (compras locais) | |
| Gabinete de segurança biológica (Classe I) | Kartos international; Índia | Nenhum número de catálogo específico (aquisição local) | |
| Microscópio de campo brilhante | Olympus, Japão | LX51 | |
| Cefotaxima (Taxim®) | AlKem; Injeção de | cefotaxima sódica na Índia, sem número de catálogo específico (aquisição local) | |
| US | CLS431752 | ||
| Collagenase Tipo I | Gibco da Life Technologies | 17100-017 | |
| Cotonetes | Pure Swabs Pvt Ltd; Índia | Sem número de catálogo específico (Aquisição Local) | |
| Folha de cortina | JSD Surgicals, Delhi, Índia | Sem número de catálogo específico (Aquisição Local) | |
| DPX Mountant | Sigma; US | 6522 | |
| Eosin Y solução, álcool | Sigma; Fórceps de HT110132 | ||
| Principais Cirúrgicos; Índia | Nenhum número de catálogo específico (aquisição local) | ||
| Sistema de anestesia a gás | Ugo Basile; Itália | 211000 | |
| Glucose | Himedia, Índia | GRM077 | |
| Creme depilatório (Veet®) | Reckitt Benckiser, Índia | Sem número de catálogo específico (aquisição local) | |
| Solução de hematoxilina, Mayer's | Sigma; US | MHS16 | |
| Heparina sal sódico | Himedia; Índia | RM554 | |
| Hialuronidase de testículos de ovelhas | Sigma; US | H6254 | |
| Cânula IV (Plusflon) | Mediplus, Índia | Ref 1732411420 | |
| Seringas de Insulina | BD; US | REF 303060 | |
| Isoflurano (Forano®) | Asecia Queenborough | No B506 | Anestésico por Inalação |
| Cetamina (Ketamax®) | Troikaa Farmacêutica Ltda. | Cloridrato de cetamina IP, sem número de catálogo específico (aquisição local) | |
| Meloxicam (Melonex®) | Intas Farmacêutica Ltda; Índia | Nenhum número de catálogo específico (aquisição local) | |
| Micro porta-agulhas reta e mércia curva; | Inglaterra | BS-13-8 | |
| Micro porta-agulhas reta & mércia curva; | Inglaterra | BS-13-8 | |
| Microtome | Histo-Line Laboratories, Itália | MRS3500 | |
| Fio de Nylon | Poderoso; Índia | Nenhum número de catálogo específico (aquisição local) | |
| Paraformaldeído | Himedia; Índia | GRM 3660 | |
| Percoll® | GE Healthcare | 17-0891-01 | |
| Gel Refrescante de Lágrimas/Eyemist | Allergan India Private Limited/Sun Pharma, Índia | P3060 | Sem número de catálogo específico |
| RPMI | Himedia; Índia | Nenhum número de catálogo específico (aquisição local) | |
| Bisturi | Major Surgicals; Índia | Sem número de catálogo específico (Aquisição Local) | |
| Tesouras | Major Surgicals; Índia | Sem número de catálogo específico (aquisição local) | |
| KIT SGOT (ASAT) Coral | Clinical System, Índia | Nenhum número de catálogo específico (aquisição local) | |
| KIT SGPT (ALAT) Coral | Clinical System, Índia | Nenhum número de catálogo específico (aquisição local) | |
| Shandon Cryotome E Cryostat | Thermo Electron Corporation; US | Nenhum número de catálogo específico | |
| Sacarose | Sigma; US | S0389 | |
| Lâmina Cirúrgica No. 22 | La Medcare, Índia | Sem Número de Catálogo Específico (Aquisição Local) | |
| Placa Cirúrgica | Feita | Sem Número de Catálogo específico (Aquisição Local) | |
| Fita Cirúrgica Branca | 3M Índia; Índia | 1530-1 | fita cirúrgica micropore |
| Ethicon, Johnson & Johnson, Índia | NW 5047 | ||
| Seringas (1ml, 26 G) | Dispo Van; Índia | Sem número de catálogo específico (aquisição local) | |
| Aparador (aparador) | Philips | NL9206AD-4 DRACHTEN QT9005 | |
| Máquina de pesagem | Braun | Sem número de catálogo específico (aquisição local) | |
| William's E Media | Himedia; Índia | AT125 | |
| xilazina (xilaxina®) | Indian Immunologicals Limited | Sedativo, Pré-Anestésico, Analgésico e relaxante muscular |
Referências
- Polson, J., Lee, W. M. AASLD position paper: the management of acute liver failure. Hepatology. 41, 1179-1197 (2005).
- Chung, R. T., et al. Pathogenesis of liver injury in acute liver failure. Gastroenterology. 143, 1-7 (2012).
- Fyfe, B., Zaldana, F., Liu, ....
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Reimpressões e permissões
