考达尔静脉葡萄糖注射剂在益生菌小鼠中检测共享血液供应的建立
1Department of Pharmacology, The State-Province Key Laboratories of Biomedicine-Pharmaceutics of China, Key Laboratory of Cardiovascular Research, Ministry of Education, College of Pharmacy,Harbin Medical University, 2Institute of Metabolic Disease,Heilongjiang Academy of Medical Science, 3Department of Pharmacology and Therapeutics, Melbourne School of Biomedical Sciences, Faculty of Medicine,Dentistry and Health Sciences University of Melbourne
Summary
在这里，我们描述了一种新方法，通过注射葡萄糖，检测两种副生物的共享血液循环的成功建立，这种注射对副生子的损害最小，而且对寄生虫没有致命。
Abstract
寄生虫症是一种实验方法，将两种平行动物沿着身体的纵轴进行手术结合。我们提出了一个方案，用于检测通过注射葡萄糖的胆热静脉在副生物中成功建立血性。建造了益生菌小鼠。通过尾静脉将葡萄糖注射到供体小鼠中，并在不同时间点使用血胶仪测量两只小鼠的血糖水平波动。结果表明，葡萄糖注射后，供体小鼠血糖水平在1分钟后急剧上升，此后缓慢下降。同时，受体小鼠的血糖水平在注射后15分钟达到峰值。与埃文斯蓝，用作葡萄糖的阳性对照获得类似的结果。血糖水平的同步波动表明两小鼠之间的血流成功。
Introduction
寄生虫症是一种建模方法，其中两个活生物体通过手术连接，并发展成为一个与共享循环系统1的单一生理系统。由于单个个体产生的物质可以通过共享循环系统同时作用于两种动物，因此这些模型已广泛用于生理学研究。自19世纪中叶保罗·伯特2号开创的益生菌实验以来，构建生物模型的方法已经标准化。然而，一个简单方便的方法，以验证成功建立血性。据报道，交叉循环可以通过在其中一种副生物中注射0.5%埃文斯蓝色染料，然后用微孔板读取器3测量两种副生物血液中的Evans蓝色吸收率，从而成功地评估。另一种方法需要特定小鼠品种，其中包含 CD45.1+– 和 CD45.2=– 标记单核细胞在每个寄生虫中。然后，细胞细胞测定通过测量脾脏或血液4中单核细胞中的两个标记的频率来确定血液的血性。然而，这些方法往往对动物是致命的或繁琐的，并且非常需要一种安全而简单的方法来快速可靠地验证副生物模型。在这项研究中，我们建立了一种用于此目的的新方法，在寄生虫化小鼠模型中进行了验证。从尾静脉抽取的血液样本中的葡萄糖浓度使用胶质测定仪进行测量，供体小鼠和受体小鼠的葡萄糖水平变化模式被认为是循环性血球症的征兆。我们给这种方法命名为”葡萄糖波动法”。这种验证方法的应用并不仅限于小鼠，但可以扩展到不同的病理模型，但那些葡萄糖代谢严重调节不良的模型除外。该过程简单、省时且安全。
Protocol
所有涉及动物及其护理的程序均经哈尔滨医科大学动物护理与使用委员会批准。 注：该方法所需的工具和设备列在材料表中。 1. 材料和动物的制备 从标准实验室动物供应商处订购重量在 20 g-25 g 之间的 C57BL/6 雄性小鼠。 将小鼠以12小时光的周期内房屋：在24~26°C下黑暗12小时，并可获取水和食物。 2. 寄?…
Representative Results
在6只供体小鼠中，通过尾静脉注射100μL葡萄糖（1.2克/千克）后，血糖水平急剧上升至26.5μmol/L（173%增加），然后逐渐降至13.3μmol/L，60分钟。在受体小鼠中，注射后血糖缓慢升高，并在15分钟达到第一峰水平（增加47%，12.2μmol/L）。根据上述结果，循环血球化的标准设定如下：1）注射葡萄糖后1分钟内供体小鼠血糖水平急剧上升（至少增加100%或>20 μmol/L），2）注射后15分钟?…
Discussion
寄生虫学是指通过实验方法6、7、8连接两只活体动物建立共同血管系统的外科技术。该模型的优点是，单个个体产生的物质可以同时作用于两种动物。因此，寄生虫病模型可用于探索物质或因素在相关疾病中的作用，得出许多有意义的创新结论。鉴于其巨大的应用价值，该模型使人们对心血管系统疾病<sup clas…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作得到了国家自然科学基金（81570399和81773735）、国家重点研究发展计划——中医药现代化研究项目（2017YFC1702003）和黑龙江的支持。杰出青年科学基金（JC2017020）。
Materials
| curved forceps | JZ surgical Instruments, China | J31340 | |
| fine scissors | JZ surgical Instruments, China | WA1030 | |
| needle forcep | JZ surgical Instruments, China | 60017961 | |
| 2.5 mL syringes | Agilent, USA | 5182-9642 | |
| Tribromoethano | Sigma-Aldrich, USA | T48402-5G | |
| penicillin | Solarbio, China | IP0150 | |
| tramadol | Yijishiye, China | YJT712520 | |
| glucometer | Roche Diabetes Care, Indiana | Accu-Chek Active test strips | |
| Evan's blue Counterstain | Solarbio, China | G1810 | |
| depilatory cream | Nair, USA | LL9161 | |
| Warming Blanket (Heating pad) | Kent Scientific Corp, USA | TP-22G | |
| Electrical shaver | Codos, China | CP-5000 | |
| 3-0,5-0 surgical suture |
Shanghai Medical Suture Needle Factory, China | SYZ 3-0#, SYZ 5-0# |
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Citar este artigo
Liu, X., Bai, X., Li, M., Li, H., Zhang, Y., Yang, B. Detecting Establishment of Shared Blood Supply in Parabiotic Mice by Caudal Vein Glucose Injection. J. Vis. Exp. (156), e60411, doi:10.3791/60411 (2020).