Détection de l’établissement de l’approvisionnement en sang partagé dans les souris parabiotiques par injection de glucose de veine caudale

Summary

Ici nous décrivons une nouvelle méthode de détecter l’établissement réussi de la circulation sanguine partagée de deux parabionts par une injection caudale de veine de glucose, qui cause des dommages minimaux et n’est pas mortelle aux parabionts.

Abstract

La parabiose est une méthode expérimentale pour combiner chirurgicalement deux animaux parallèles le long de l’axe longitudinal du corps. Nous présentons un protocole pour détecter l’établissement réussi du chimerism de sang dans les parabionts par une injection caudale de veine de glucose. Des souris parabiotiques ont été construites. Le glucose a été injecté dans la souris de distributeur par la veine de queue, et la fluctuation du niveau de glucose sanguin a été mesurée dans les deux souris utilisant un glucomètre de sang à différents points de temps. Nos résultats ont prouvé qu’après injection de glucose, le niveau de glucose sanguin dans les souris de distributeur a augmenté brusquement après 1 min et a diminué lentement par la suite. Pendant ce temps, le taux de glucose sanguin des souris receveuses a atteint un sommet de 15 min après l’injection. Des résultats similaires ont été obtenus avec Evans bleu, utilisé comme un contrôle positif pour le glucose. La fluctuation synchrone des niveaux de glucose sanguin indique que le flux sanguin entre les deux souris a été établi avec succès.

Introduction

La parabiose est une méthode de modélisation dans laquelle deux organismes vivants sont réunis chirurgicalement et se développent comme un système physiologique unique avec un système circulatoire partagé¹. Ces modèles ont été largement utilisés pour étudier la physiologie en raison de l’avantage que les substances produites par un seul individu peuvent agir sur les deux animaux en même temps via le système circulatoire partagé. Depuis le milieu des années 1800, lorsque les expériences parabiotiques ont été lancées par Paul Bert², les méthodes de construction de modèles parabiotiques sont devenues standardisées. Cependant, une méthode simple et commode pour vérifier l’établissement réussi du chimérisme de sang a été manquante. Il a été rapporté que la circulation croisée peut être évaluée avec succès en injectant intrapéritonement 0,5% de colorant bleu Evans dans l’un des parabionts suivi par la mesure de l’absorption du bleu Evans dans le sang des deux parabionts avec un lecteur de microplaque³. Une autre méthode nécessite une race de sourisspécifique qui contient CD45.1 – et CD45.2– monocytes étiquetés dans chaque parabiont. La cytométrie cellulaire est ensuite utilisée pour déterminer le chimérisme sanguin en mesurant la fréquence des deux marqueurs dans les monocytes de la rate ou du sang⁴. Cependant, ces méthodes sont souvent mortelles ou encombrantes pour les animaux, et une méthode sûre et simple pour une vérification rapide et fiable des modèles parabiotiques est hautement souhaitable. Dans cette étude, nous avons établi une nouvelle méthode à cet effet, qui a été validée dans un modèle de souris de parabiose. La concentration de glucose dans les échantillons de sang prélevés dans une veine de queue est mesurée à l’aide d’un glucomètre, et le modèle de changements du niveau de glucose chez les souris donneuses et bénéficiaires est considéré comme une indication de chimérisme de circulation. Nous avons nommé cette méthode la « méthode de fluctuation du glucose ». L’application de cette méthode de validation ne se limite pas aux souris, mais pourrait être étendue à divers modèles pathologiques, sauf pour ceux qui ont une dysrégulation sérieuse du métabolisme du glucose. La procédure est simple, gain de temps, et sûr.

Protocol

Toutes les procédures impliquant les animaux et leurs soins ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux de l’Université médicale Harbin. REMARQUE : Les outils et l’équipement requis pour la méthode sont énumérés dans le Tableau des matériaux. 1. Préparation des matériaux et des animaux Commandez des souris mâles C57BL/6 dont le poids se siédesde entre 20 g et 25 g auprès d?…

Representative Results

Chez six souris donneuses, le taux de glucose sanguin a fortement augmenté pour atteindre 26,5 ‘mol/L (augmentation de 173 %) à une moyenne de 1 min après l’injection de 100 l de glucose (1,2 g/kg) dans la veine de la queue, puis a diminué graduellement à 13,3 ‘mol/L à 60 min. Chez les souris receveuses, la glycémie augmentait lentement après l’injection et atteignait le premier niveau de pointe à 15 min (augmentation de 47 %, 12,2 ‘mol/L). Sur la base des résultats ci-dessu…

Discussion

Parabiose se réfère à la technique chirurgicale de connecter deux animaux vivants pour établir un système vasculaire commun par des moyens expérimentaux^6,7,8. L’avantage de ce modèle est que les substances produites par un seul individu peuvent agir sur les deux animaux en même temps. Ainsi, le modèle de parabiose peut être utilisé pour explorer le rôle d’une substance ou d’un facteur dans une maladie connexe, …

Materials

curved forceps	JZ surgical Instruments, China	J31340
fine scissors	JZ surgical Instruments, China	WA1030
needle forcep	JZ surgical Instruments, China	60017961
2.5 mL syringes	Agilent, USA	5182-9642
Tribromoethano	Sigma-Aldrich, USA	T48402-5G
penicillin	Solarbio, China	IP0150
tramadol	Yijishiye, China	YJT712520
glucometer	Roche Diabetes Care, Indiana	Accu-Chek Active test strips
Evan's blue Counterstain	Solarbio, China	G1810
depilatory cream	Nair, USA	LL9161
Warming Blanket (Heating pad)	Kent Scientific Corp, USA	TP-22G
Electrical shaver	Codos, China	CP-5000
3-0,5-0 surgical suture	Shanghai Medical Suture Needle Factory, China	SYZ 3-0#, SYZ 5-0#