Aquí describimos un nuevo método para detectar el establecimiento exitoso de circulación sanguínea compartida de dos parabiontes a través de una inyección de glucosa en venas caudales, que causa un daño mínimo y no es mortal para los parabionts.
La parabiosis es un método experimental para combinar quirúrgicamente dos animales paralelos a lo largo del eje longitudinal del cuerpo. Presentamos un protocolo para detectar el establecimiento exitoso de chimerismo sanguíneo en parabionts mediante una inyección de glucosa en vena caudal. Se construyeron ratones parabióticos. La glucosa se inyectó en el ratón del donante a través de la vena de la cola, y la fluctuación del nivel de glucosa en sangre se midió en ambos ratones utilizando un glucómetro de la sangre en diferentes momentos. Nuestros resultados mostraron que después de la inyección de glucosa, el nivel de glucosa en sangre en ratones donantes aumentó bruscamente después de 1 min y disminuyó lentamente a partir de entonces. Mientras tanto, el nivel de glucosa en sangre de los ratones receptores alcanzó un pico de 15 minutos después de la inyección. Se obtuvieron resultados similares con Evans azul, utilizado como un control positivo para la glucosa. La fluctuación sincrónica de los niveles de glucosa en sangre indica que el flujo sanguíneo entre los dos ratones se estableció con éxito.
La parabiosis es un método de modelado en el que dos organismos vivos se unen quirúrgicamente y se desarrollan como un único sistema fisiológico con un sistema circulatorio compartido1. Estos modelos se han utilizado ampliamente para estudiar la fisiología debido a la ventaja de que las sustancias producidas por un solo individuo pueden actuar sobre ambos animales al mismo tiempo a través del sistema circulatorio compartido. Desde mediados de la década de 1800, cuando los experimentos parabóticos fueron pioneros por Paul Bert2,los métodos para construir modelos parabióticos se han estandarizado. Sin embargo, ha faltado un método sencillo y conveniente para verificar el establecimiento exitoso del chimerismo sanguíneo. Se ha informado de que la circulación cruzada puede evaluarse con éxito inyectando por vía intraperitoneal un 0,5% de tinte azul Evans en uno de los parabiontes seguido de la medición de la absorbancia del azul evans en la sangre de ambos parabionts con un lector de microplacas3. Otro método requiere una raza de ratón específica que contenga CD45.1+– y CD45.2+ -etiquetadamonsen cada parabiont. La citometría celular se utiliza para determinar el cinismo sanguíneo midiendo la frecuencia de los dos marcadores en monocitos del bazo o la sangre4. Sin embargo, estos métodos son a menudo letales o engorrosos para los animales, y un método seguro y simple para la verificación rápida y confiable de los modelos parabióticos es altamente deseable. En este estudio, establecimos un nuevo método para este propósito, que fue validado en un modelo de ratón de parabiosis. La concentración de glucosa en muestras de sangre extraídas de una vena de cola se mide utilizando un glucómetro, y el patrón de cambios en el nivel de glucosa en ratones donantes y receptores se considera una indicación del chimerismo de circulación. Nombramos a este método el “método de fluctuación de glucosa”. La aplicación de este método de validación no se limita a los ratones, sino que podría extenderse a diversos modelos patológicos, excepto aquellos con desregulación grave del metabolismo de la glucosa. El procedimiento es simple, ahorra tiempo y es seguro.
La parabiosis se refiere a la técnica quirúrgica de conectar dos animales vivos para establecer un sistema vascular común por medios experimentales6,7,8. La ventaja de este modelo es que las sustancias producidas por un solo individuo pueden actuar sobre ambos animales al mismo tiempo. Por lo tanto, el modelo de parabiosis se puede utilizar para explorar el papel de una sustancia o factor en una enfermedad relacionada, produc…
The authors have nothing to disclose.
Este trabajo fue apoyado por la National Nature Science Foundation of China (81570399 y 81773735), el Programa Nacional De Investigación y Desarrollo Clave de China – Proyecto de Investigación de Modernización de la Medicina Tradicional China (2017YFC1702003), y Hei Long Jiang Fondo de Ciencia Juvenil Sobresaliente (JC2017020).
curved forceps | JZ surgical Instruments, China | J31340 | |
fine scissors | JZ surgical Instruments, China | WA1030 | |
needle forcep | JZ surgical Instruments, China | 60017961 | |
2.5 mL syringes | Agilent, USA | 5182-9642 | |
Tribromoethano | Sigma-Aldrich, USA | T48402-5G | |
penicillin | Solarbio, China | IP0150 | |
tramadol | Yijishiye, China | YJT712520 | |
glucometer | Roche Diabetes Care, Indiana | Accu-Chek Active test strips | |
Evan's blue Counterstain | Solarbio, China | G1810 | |
depilatory cream | Nair, USA | LL9161 | |
Warming Blanket (Heating pad) | Kent Scientific Corp, USA | TP-22G | |
Electrical shaver | Codos, China | CP-5000 | |
3-0,5-0 surgical suture |
Shanghai Medical Suture Needle Factory, China | SYZ 3-0#, SYZ 5-0# |