Här beskriver vi en ny metod för att upptäcka framgångsrik etablering av delad blodcirkulation av två parabionter genom en caudal ven injektion av glukos, vilket orsakar minimal skada och är inte dödlig för parabionterna.
Parabios är en experimentell metod för att kirurgiskt kombinera två parallella djur längs kroppens längsgående axel. Vi presenterar ett protokoll för att upptäcka det framgångsrika inrättandet av blodchimär i parabionter genom en caudal ven injektion av glukos. Parabiotiska möss konstruerades. Glukos injicerades i givaren musen genom svansvenen, och fluktuationer na i blodsockernivån mättes i båda mössen med hjälp av en blodglukometer vid olika tidpunkter. Våra resultat visade att efter glukosinjektion, blodglukosnivån hos donatormöss ökade kraftigt efter 1 min och minskade långsamt därefter. Samtidigt nådde de mottagande mössens blodsockernivå 15 min efter injektionen. Liknande resultat erhölls med Evans blå, som användes som en positiv kontroll för glukos. Den synkrona fluktuationen av blodsockernivåer indikerar att blodflödet mellan de två mössen har etablerats framgångsrikt.
Parabios är en modelleringsmetod där två levande organismer förenas kirurgiskt och utvecklas som ett enda fysiologiskt system med ett gemensamt cirkulationssystem1. Sådana modeller har använts i stor utsträckning för att studera fysiologi på grund av den fördel som de ämnen som produceras av en enda individ kan agera på båda djuren samtidigt via det gemensamma cirkulationssystemet. Sedan mitten av 1800-talet då parabiotiska experiment var pionjärer av Paul Bert2, metoderna för att konstruera parabiotiska modeller har blivit standardiserade. Men en enkel och bekväm metod för att kontrollera det framgångsrika inrättandet av blodchimär har saknats. Det har rapporterats att korscirkulationen framgångsrikt kan bedömas genom intraperitoneally injicera 0,5% Evans blå färgämne i en av de parabionts följt av mätning av absorbans av Evans blå i blodet av båda parabionts med en mikroplatta läsare3. En annan metod kräver en specifik musras som innehåller CD45.1+– och CD45.2+märkta monocyter i varje parabiont. Cellcytometri används sedan för att bestämma blodcmerism genom att mäta frekvensen av de två markörerna i monocyter från mjälte eller blod4. Dessa metoder är dock ofta dödliga eller besvärliga för djuren, och en säker och enkel metod för snabb och tillförlitlig verifiering av parabiotiska modeller är mycket önskvärt. I denna studie etablerade vi en ny metod för detta ändamål, som validerades i en musmodell av parabios. Glukoskoncentrationen i blodprover från en svansven mäts med hjälp av en glukometer, och mönstret för förändringar av glukosnivån hos donatorer och mottagarmöss anses vara en indikation på cirkulationskirmerism. Vi namngav denna metod “glukosfluktuationsmetoden”. Tillämpningen av denna valideringsmetod är inte begränsad till möss, men kan utvidgas till olika patologiska modeller utom för dem med allvarlig dysreglering av glukosmetabolism. Proceduren är enkel, tidsbesparande och säker.
Parabios avser den kirurgiska tekniken att ansluta två levande djur för att upprätta ett gemensamt kärlsystem med experimentella medel6,7,8. Fördelen med denna modell är att de ämnen som produceras av en enda individ kan agera på båda djuren samtidigt. Således kan parabiosmodellen användas för att utforska rollen som ett ämne eller faktor i en relaterad sjukdom, vilket ger många meningsfulla och innovativa slutsats…
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete stöddes av National Nature Science Foundation of China (81570399 och 81773735), National Key Research and Development Program of China – Traditionell kinesisk medicin modernisering Forskningsprojekt (2017YFC1702003) och Hei Long Jiang Outstanding Youth Science Fund (JC2017020).
curved forceps | JZ surgical Instruments, China | J31340 | |
fine scissors | JZ surgical Instruments, China | WA1030 | |
needle forcep | JZ surgical Instruments, China | 60017961 | |
2.5 mL syringes | Agilent, USA | 5182-9642 | |
Tribromoethano | Sigma-Aldrich, USA | T48402-5G | |
penicillin | Solarbio, China | IP0150 | |
tramadol | Yijishiye, China | YJT712520 | |
glucometer | Roche Diabetes Care, Indiana | Accu-Chek Active test strips | |
Evan's blue Counterstain | Solarbio, China | G1810 | |
depilatory cream | Nair, USA | LL9161 | |
Warming Blanket (Heating pad) | Kent Scientific Corp, USA | TP-22G | |
Electrical shaver | Codos, China | CP-5000 | |
3-0,5-0 surgical suture |
Shanghai Medical Suture Needle Factory, China | SYZ 3-0#, SYZ 5-0# |