冠状血管化后心血管预后冠状动脉祖细胞和可溶性生物标志物

Summary

严重不良心血管事件的发展，影响冠状血管后心血管预后，受冠状动脉损伤和血管修复程度的影响。使用新型冠状细胞和可溶性生物标志物，对血管损伤和修复反应，有助于预测MACEs的发展和预后。

Abstract

重大心血管不良事件 （MACEs） 对冠状血管化患者的心血管预后产生负面影响，因为冠状缺血损伤。冠状动脉损伤的程度和血管修复机制是影响MACEs未来发展的因素。内血管特征，如斑块特征和冠状动脉复杂性已证明MACEs的预后信息。然而，冠状动脉内循环生物标志物的使用已被假定为早期识别和预后MACE的一种方便方法，因为它们更密切地反映了涉及冠状动脉损伤和修复的动态机制。血管成形术期间冠状循环生物标志物的测定，如单核祖细胞（MPCs）的亚种群数量，以及反映炎症、细胞粘附和修复的可溶性分子的浓度，允许评估未来的发展和MACEs的预后6个月冠状血管性血管性。该方法的转化性与外周血液循环生物标志物相比，在预测MACEs方面性能更好，对心血管预后的影响，可应用于患者的风险分层冠状动脉疾病经历血管性。

Introduction

冠状血管化和支架是冠状动脉疾病 （CAD） 患者的抢救程序。然而，重大心血管不良事件（MACEs），包括心血管死亡、心肌梗死、冠状动脉恢复症和心绞痛发作或心力衰竭，可能在冠状动脉介入后数月发生，导致不定期到医院就诊。MACEs在全世界很普遍，其死亡率很高^。

冠状缺血损伤诱导早期血管反应和重组机制，涉及动员MPC由于其分化能力和/或血管抑制电位，以及可溶性分子，如细胞间粘附分子（ICAM），基质金属蛋白酶（MMPs）和反应氧物种，反映细胞粘附，组织重塑和氧化应激。虽然内在血管特征，如斑块特征和冠状动脉复杂性已经被用来预测MACEs，一些研究表明，与冠状内皮发生损伤和修复机制相关的生物标志物对于CAD提交冠状血管成形^{的2、3、4、5}患者的心血管事件的早期识别和预后非常有用。

持续的兴趣，了解CAD损伤和修复背后的机制，促使研究者研究冠状循环生物标志物，因为冠状动脉取样更密切地反映血管损伤和修复^6。然而，在人类研究中，冠状生物标志物的表征一直很少，7、8、9。因此，本研究的目的是描述一种确定冠状循环MPC和可溶性分子的量的方法，反映血管损伤和修复，并表明这些生物标志物是否与MACE和接受冠状血管化的CAD患者的临床预后有关。该方法基于使用血管相关、循环的MpCs和可溶性分子，通过采样最接近血管损伤的位置获得。对于下肢缺血、中风、血管炎、静脉血栓和其他涉及血管损伤和修复的损伤的临床研究，它也可能有用。

Protocol

该协议符合人类研究伦理委员会的体制准则。 1. 冠状血管造影、超声和血液取样 在冠状动脉介入之前，请求基线临床和人口统计信息。收集个人数据：年龄、性别、当前吸烟状态、体重指数（BMI）、高血压、血脂异常、糖尿病、药物和当前冠状血管造影指标。 使用径向方法通过心脏导管进行冠状血管造影。此程序应在由专家心脏病学家在血管动力学室的荧光?…

Representative Results

从52名接受冠状血管造影的患者中采集冠状、静脉坐宗和外周血（图1），显示高血压和血脂异常的高患病率。在临床随访中，11 （21.1%）在冠状血管造影术发生6个月后，MACEs：死亡（n = 1），需要住院治疗的心绞痛（n = 6），心肌梗死（n = 2），和/或心力衰竭的证据（n = 4）。 大多数MPC的基线冠状动脉浓度…

Discussion

从受影响的冠状动脉采集血液可能很困难。有时，冠状动脉几乎无法到达。在这种情况下，从静脉主塞采样可能是一种选择。我们进行了验证测试，比较冠状动脉中的循环生物标志物与静脉阴热，没有显著差异。然而，循环生物标志物的性能只用于冠状动脉取样。因此，从静脉主塞获得的生物标志物的性能仍有待探索。

最好在采血后的前 3 小时内处理 MpC 的样本。因此，心脏…

Materials

BSA	Roche	10735086001	Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.
Calibration Beads	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-607	MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests
CD133/1 (AC133)-PE	Milteny Biotec / MACS	#130-080-801	Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770	Miltenyi Biotec / MACS	#130-103-798	Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-601	Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer
CD34-FITC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-081-001	The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34
CD45- VioBlue	Miltenyi Biotec / MACS	#130-092-880	Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated
Conical Tubes	Thermo SCIENTIFIC	#339651	15ml conical centrifuge tubes
Cytometry Tubes	FALCON Corning Brand	#352052	5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12×75 style. Sterile.
EDTA	BIO-RAD	#161-0729	Heavy metals, (as Pb) <10ppm, Fe <0.01%, As <1ppm, Insolubles <0.005%
Improved Neubauer	Without brand	Without catalog number	Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)
K2 EDTA Blood Collection Tubes	BD Vacutainer	#367863	Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.
Lymphoprep	Stemcell Technologies	01-63-12-002-A	Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077±0.001g/mL
Paraformaldehyde	SIGMA-ALDRICH	#SZBF0920V	Fixation of biological samples, (powder, 95%)
Pipette Transfer 1,3mL	CRM Globe	PF1016, PF1015	The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.
Test Tubes	KIMBLE CHASE	45060 13100	Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm