Quantificação da adesão celular tumoral em crioseções de nó linfático

Elisa  Helena Farias Jandrey; Mayra  Akemi Kuroki; Anamaria  Aranha Camargo; Erico  Tosoni Costa

doi:10.3791/60531

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Artigo de método

Quantificação da adesão celular tumoral em crioseções de nó linfático

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DOI:

10.3791/60531

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9 de fevereiro de 2020

Elisa Helena Farias Jandrey¹ , Mayra Akemi Kuroki¹ , Anamaria Aranha Camargo¹ , Erico Tosoni Costa¹

¹Molecular Oncology Center, Hospital Sírio-Libanês

Neste artigo

Resumo

Aqui, descrevemos um método simples e barato que permite a quantificação de células tumorais adesivos para genimosgenas de nódulos linfáticos (LN). As células tumorais aderentes de LN são prontamente identificadas pela microscopia leve e confirmadas por um método baseado em fluorescência, dando um índice de adesão que revela a afinidade de ligação celular tumoral ao parenchyma lN.

Resumo

Os linfonodos drenantes de tumores (LNs) não são apenas filtros de resíduos produzidos pelo tumor. São um dos locais regionais mais comuns de residência provisória de células tumorais disseminadas em pacientes com diferentes tipos de câncer. A detecção dessas células tumorais residentes em LN é um importante biomarcador associado ao mau prognóstico e decisões de terapia adjuvante. Modelos recentes de camundongos indicaram que as células tumorais residentes em LN podem ser uma fonte substancial de células malignas para metástases distantes. A capacidade de quantificar a adesividade das células tumorais para o parenchyma lN é um indicador crítico em pesquisas experimentais que se concentra na identificação de genes ou sinalizando caminhos relevantes para a disseminação linfática/metastática. Como as LNs são estruturas 3D complexas com uma variedade de aparências e composições em seções teciduais dependendo do plano de seção, suas matrizes são difíceis de replicar experimentalmente in vitro de forma totalmente controlada. Aqui, descrevemos um método simples e barato que permite a quantificação de células tumorais adesivos para crioseções LN. Usando seções serial da mesma LN, adaptamos o método clássico desenvolvido pela Brodt para usar rótulos não radioativos e contar diretamente o número de células tumorais aderente por área de superfície LN. As células tumorais aderentes de LN são prontamente identificadas pela microscopia leve e confirmadas por um método baseado em fluorescência, dando um índice de adesão que revela a afinidade de ligação celular ao parenchyma lN, que é evidência sugestiva de alterações moleculares na ligação de afinidade dos integrins aos seus ln-ligands correlacionados.

Introdução

A metástase do câncer é a principal razão para a falha no tratamento e o aspecto dominante de risco de vida do câncer. Como postulou há 130 anos, a disseminação metastática resulta quando uma elite das células tumorais disseminadas (DTCs, as "sementes") adquirem habilidades biológicas específicas que lhes permitem escapar dos locais primários e estabelecer crescimento maligno em locais distantes (o "solo")¹. Recentemente, surgiram diversos conceitos novos sobre as relações "sementes e solo", como a indução de nichos pré-metastáticos (conceitualizado como um "solo fértil" necessário para que "sementes" prosperassem), a auto-semeagem de tumores p....