अत्यधिक रोगजनक एच5एन1 और एवियन एच7एन9 वायरस से लिफाफा ग्लाइकोप्रोटीन के साथ उच्च टिटर संक्रामक इन्फ्लूएंजा स्यूडोटाइप कणों का उत्पादन
Summary
यह प्रोटोकॉल दो इंफ्लूएंजा ए उपभेदों से लिफाफा ग्लाइकोप्रोटीन के साथ उच्च-टिटर संक्रामक वायरल छद्म कणों (पीपी) का उत्पादन करने के लिए एक प्रयोगात्मक प्रक्रिया का वर्णन करता है और उनकी संक्रामकता को कैसे निर्धारित किया जाता है। यह प्रोटोकॉल विभिन्न लिफाफे ग्लाइकोप्रोटीन के साथ किसी भी अन्य प्रकार के लिफाफे वाले वायरस के पीपीएस को विकसित करने के लिए अत्यधिक अनुकूलनीय है।
Abstract
अत्यधिक रोगजनक एवियन इंफ्लूएंजा ए वायरस H5N1 (HPAI H5N1) और मनुष्यों के लिए H7N9 और उनकी घातकता के सामयिक प्रत्यक्ष संचरण गंभीर सार्वजनिक स्वास्थ्य के मुद्दों और एक महामारी की संभावना का सुझाव है । हालांकि, वायरस के बारे में हमारी आणविक समझ प्रारंभिक है, और यह चिकित्सकीय लक्ष्यों के रूप में अपने लिफाफा प्रोटीन के जैविक गुणों का अध्ययन करने के लिए और संक्रमण को नियंत्रित करने के लिए रणनीतियों को विकसित करने के लिए आवश्यक है । हमने एवियन इन्फ्लूएंजा वायरस का अध्ययन करने के लिए एक ठोस वायरल छद्म कण (पीपी) मंच विकसित किया, जिसमें इसके हेमग्ग्लूटिनिन (एचए) और न्यूरामिनिड्स (एनए) लिफाफे ग्लाइकोप्रोटीन, एचएएस और एनआईएस की पुनर्वर्गीकरण विशेषताओं का कार्यात्मक विश्लेषण शामिल है, दवा विकास और वैक्सीन डिजाइन के प्रयोजनों के लिए रिसेप्टर्स, ट्रोपिज्म, एंटीबॉडी, निदान, संक्रमितता को बेअसर करना। यहां, हम दो इंफ्लूएंजा ए उपभेदों (HAPI H5N1 और 2013 एवियन एच7एन9) से लिफाफा ग्लाइकोप्रोटीन (एचए, एनए) के साथ पीपीएस स्थापित करने के लिए एक प्रायोगिक प्रक्रिया का वर्णन करते हैं। उनकी पीढ़ी कुछ वायरस की क्षमता पर आधारित है, जैसे कि मूत्र ल्यूकेमिया वायरस (एमएलवी), लिफाफा ग्लाइकोप्रोटीन को पीपी में शामिल करने के लिए। इसके अलावा, हम यह भी विस्तार करते हैं कि इन पीपीएस को आरटी-क्यूपीसीआर के साथ कैसे निर्धारित किया जाता है, और एचएएस और एनआईएस की उत्पत्ति के आधार पर देशी और बेमेल वायरस पीपीएस का संक्रमितता का पता लगाया जाता है। यह प्रणाली अत्यधिक लचीला और अनुकूलनीय है और इसका उपयोग लिफाफा ग्लाइकोप्रोटीन के साथ वायरल पीपीएस स्थापित करने के लिए किया जा सकता है जिसे किसी अन्य प्रकार के वायरस में शामिल किया जा सकता है। इस प्रकार, इस वायरल कण मंच कई शोध जांच में जंगली वायरस का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
Introduction
एक वायरल कण का मिशन संक्रमित मेजबान कोशिका से अपने जीनोम को गैर-संक्रमित मेजबान कोशिका तक ले जाना और इसे प्रतिकृति-सक्षम रूप1में साइटोप्लाज्म या नाभिक में वितरित करना है। यह प्रक्रिया शुरू में सेल रिसेप्टर्स की मेजबानी के लिए बाध्यकारी द्वारा ट्रिगर की जाती है, जिसके बाद विरोन और सेलुलर झिल्ली का संलयन होता है। इन्फ्लूएंजा वायरस की तरह लिफाफे वाले वायरस के लिए, स्पाइक ग्लाइकोप्रोटीन रिसेप्टर बाइंडिंग और फ्यूजन1,2के लिए जिम्मेदार हैं। वायरल लिफाफा ग्लाइकोप्रोटीन (उदाहरण के लिए, पायजेन्स, एंटीजन), वायरस लाइफसाइकिल दीक्षा (बाध्यकारी और संलयन), वायरल रोगजनन, इम्यूनोजेनिकिटी, होस्ट सेल एपोप्टोसिस और सेलुलर ट्रोपिज्म, सेलुलर एंडोसाइटिक पाथवे, साथ ही इंटरस्पीट्स ट्रांसमिशन और रेसॉर्टमेंट1,3,4,5,6,7जैसे कई महत्वपूर्ण गुणों और घटनाओं में शामिल हैं । वायरल लिफाफे ग्लाइकोप्रोटीन पर शोध से हमें वायरल इंफेक्शन प्रक्रिया के कई पहलुओं को समझने में मदद मिलेगी। छद्म टाइप किए गए वायरल कण (पीपी), जिसे छद्म विग्रह या छद्म लेख भी कहा जाता है, को छद्म टाइपिंग तकनीक8,9,10के माध्यम से उत्पन्न किया जा सकता है। इस तकनीक का उपयोग हेपेटाइटिस सी11,12,हेपेटाइटिस बी13,वेसिकुलर स्टोमेटाइटिस वायरस (वीएसवी)14,15और इन्फ्लूएंजा वायरस16,17, 18,19सहित कई वायरसों के छद्म कणों को विकसित करने के लिए किया गया है । यह तकनीक लेंटिवायरस या अन्य रेट्रोवायरस के गैग-पोल प्रोटीन पर आधारित है।
छद्म टाइप किए गए वायरल कणों को वायरल लिफाफे ग्लाइकोप्रोटीन एक्सप्रेशन प्लाज्मिड, एक रेट्रोवायरल पैकेजिंग प्लाज्मिड को लिफाफा एनवी जीन गायब करके तीन-प्लाज्मिड सिस्टम का उपयोग करके प्राप्त किया जा सकता है, और पीपी निर्माता कोशिकाओं में एक अलग रिपोर्टर प्लाज्मिड। रेट्रोवायरस अपने गैग प्रोटीन द्वारा इकट्ठा किया जाता है, और यह एक संक्रमित कोशिका झिल्ली से कलियों को व्यक्त करता है जो वायरस लिफाफा प्रोटीन1को व्यक्त करता है। इसलिए, इन्फ्लूएंजा एचए और एनए व्यक्त करने वाली सेलुलर झिल्ली पर कलियों का उत्पादन करने के लिए रेट्रोवायरस गैग प्रोटीन का उपयोग करके उच्च टिटर इन्फ्लूएंजा पीपीएस प्राप्त करना संभव है। हमारे पिछले अध्ययनों में, सभी संयोजनों में एचएएस/एनआईएस कार्यात्मक थे और वायरल जीवन चक्र16,17,18,20, 21में अपने इसी कार्यों को करने में सक्षम थे । इन पीपीएस का उपयोग इन्फ्लूएंजा जैविक विशेषताओं की जांच करने के लिए किया जाता है, जिसमें हेमग्ग्लूटिनेशन, न्यूरामिनिड्स गतिविधि, एचए-रिसेप्टर बाध्यकारी ट्रोपिज्म और संक्रमितता शामिल हैं। क्योंकि एचए और एनए वायरल जीवन चक्र में महत्वपूर्ण सतह कार्यात्मक प्रोटीन हैं, इंफ्लूएंजा के विभिन्न उपभेदों से प्राप्त बेमेल हास और नास आंशिक रूप से उनदोनों के बीच पुनर्वर्गीकरण प्रदर्शित कर सकते हैं । यहां, हम तीन-प्लाज्मिड छद्म टाइपिंग सिस्टम का उपयोग करके दो एचए और दो एनआईए (एचपीएआई एच5एन1 स्ट्रेन और एच7एन9 दाग से व्युत्पन्न) के संयोजन से आठ प्रकार के इन्फ्लूएंजा पीपीएस उत्पन्न करते हैं। इन आठ प्रकार के पीपीएस में दो देशी पीपीएस, एच5एन1पीपी, एच7एन9पीपी शामिल हैं; दो बेमेल पीपीएस, (H5 +N9) पीपी, (H7 +N1) पीपी; और चार पीपीएस केवल एक ही ग्लाइकोप्रोटीन (एचए या एनए), एच5पीपी, एन1पीपी, एच7पीपी, एन9पीपी को शरण देते हैं । एच5एन1 और एच7एन9 जैसे इंफ्लूएंजा वायरस पर अध्ययन, जैव सुरक्षा आवश्यकताओं द्वारा सीमित हैं । जंगली इन्फ्लूएंजा वायरस उपभेदों के सभी अध्ययनों को जैव सुरक्षा स्तर 3 (बीएसएल-3) प्रयोगशाला में किया जाना चाहिए। छद्म टाइप वायरल पार्टिकल तकनीक का उपयोग बायोसेफ्टी लेवल 2 (बीएसएल-2) सेटिंग में कृत्रिम विरियन को पैकेज करने के लिए किया जा सकता है। इसलिए, पीपीएस अपने दो प्रमुख ग्लाइकोप्रोटीन के आधार पर इन्फ्लूएंजा वायरस प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए एक सुरक्षित और उपयोगी उपकरण का प्रतिनिधित्व करते हैं: हेमैगग्लूटिनिन (एचए) और न्यूरामिनिडसे (एनए)।
यह प्रोटोकॉल तीन-प्लाज्मिड कॉट्रांसफेक्शन रणनीति (चित्रा 1में अवलोकन), पीपीएस की मात्रा कैसे निर्धारित करना है, और संक्रमण का पता लगाने के साथ इन पीपीएस की पीढ़ी का वर्णन करता है। पीपी उत्पादन में तीन प्रकार के प्लाज्मिड(चित्रा 1)शामिल हैं। गैग-पोल जीन, जो रेट्रोवायरस गैग-पोल प्रोटीन को एन्कोड करता है, को रेट्रोवायरस पैकेजिंग किट से क्लोन किया गया था और पीसीडीएनए ३.१ प्लाज्मिड में डाला गया था और pcDNA-Gag-Pol नाम दिया गया था । उन्नत ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन (ईजीएफपी) जीन, जो ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन को एन्कोड करता है, को PTRE-EGFP वेक्टर से क्लोन किया गया था, जिसे पीसीडीएनए 3.1 प्लाज्मिड में डाला गया था, और जिसे पीसीडीएनए-जीएफपी कहा जाता है। क्लोनिंग के दौरान, एक प्राइमर के माध्यम से एक पैकेजिंग सिग्नल () अनुक्रम जोड़ा गया था। एचए और एनए जीन को क्रमशः पीवीआरसी प्लाज्मिड में क्लोन किया गया, जिसका नाम क्रमश पीवीआरसी-एचए और पीवीआरसी-एनए था । पिछले प्लाज्मिड फ्यूजन प्रोटीन को एन्कोड करता है और इसे ब्याज के किसी अन्य फ्यूजन प्रोटीन के साथ प्रतिस्थापित किया जा सकता है। हमारे छद्म टाइपिंग प्लेटफॉर्म में दो ग्लाइकोप्रोटीन एक्सप्रेशन प्लाज्मिड्स शामिल हैं: पीवीआरसी-एचए और पीवीआरसी-एनए। यह बीएसएल-2 सेटिंग में विभिन्न वायरस उपभेदों के बीच पुनर्वर्गीकरण पर अनुसंधान को सरल बना सकता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस प्रोटोकॉल में, हम बीएसएल-2 सेटिंग में इन्फ्लूएंजा वायरस छद्म कणों (पीपी) का उत्पादन करने की विधि का वर्णन करते हैं। रिपोर्टर प्लाज्मिड pcDNA-GFP पीपीएस में शामिल है और एक संक्रमित परख में FACS द्वारा पीपीएस क?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को झेजियांग प्रांतीय चिकित्सा और स्वास्थ्य विज्ञान और प्रौद्योगिकी योजना (अनुदान संख्या, २०१७KY538), हांग्जो म्यूनिसिपल मेडिसिन एंड हेल्थ साइंस एंड टेक्नोलॉजी प्लान (ग्रांट नंबर, OO20190070), हांग्जो मेडिकल साइंस और से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था प्रौद्योगिकी प्रमुख परियोजना (ग्रांट नंबर, 2014Z11) और हांग्जो नगरपालिका स्वायत्त अनुप्रयोग सामाजिक विकास और वैज्ञानिक अनुसंधान (ग्रांट नंबर, 20191203B134) की स्वायत्त अनुप्रयोग परियोजना।
Materials
| Benzonase Nuclease | Millipore | 70664 | Effective viscosity reduction and removal of nucleic acids from protein solutions |
| Clear Flat Bottom Polystyrene TC-treated Microplates (96-well) | Corning | 3599 | Treated for optimal cell attachment Sterilized by gamma radiation and certified nonpyrogenic Individual alphanumeric codes for well identification |
| Clear TC-treated Multiple Well Plates (6-wells) | Costar | 3516 | Individual alphanumerical codes for well identification Treated for optimal cell attachment Sterilized by gamma irradiation |
| Dulbecco's modified essential medium (DMEM) | Gibco | 11965092 | A widely used basal medium for supporting the growth of many different mammalian cells |
| Fetal bovine serum | Excell | FND500 | fetal bovine sera that can offer excellent value for basic cell culture, specialty research, and specific assays |
| Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) | Beckman coulter | cytoflex | |
| Human alveolar adenocarcinoma A549 cells | ATCC | CRM-CCL-185 | |
| Human embryonic kidney (HEK) HEK-293T/17 cells | ATCC | CRL-11268 | A versatile transfection reagent that has been shown to effectively transfect the widest variety of adherent and suspension cell lines |
| Inverted fluorescent biological microscope | Olympus | BX51-32P01-FLB3 | |
| Inverted light microscope | Olympus | CKX31-12PHP | |
| Lipofectamine 2000 Transfection Reagent | Invitrogen | 11668019 | Rapid, sensitive and precise probe-based qPCR detection and quantitation of target RNA targets. |
| Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit | NEB | E3006L | Will withstand up to 14,000 RCF RNase-/DNase-free Nonpyrogenic |
| Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells | ATCC | CCL-34 | |
| MaxyClear Snaplock Microcentrifuge Tube (1.5 mL) | Axygen | MCT-150-C | 33 mm, gamma sterilized |
| Millex-HV Syringe Filter Unit, 0.45 µm, PVDF | Millipore | SLHV033RS | an improved Minimal Essential Medium (MEM) that allows for a reduction of Fetal Bovine Serum supplementation by at least 50% with no change in cell growth rate or morphology. Opti-MEM I medium is also recommended for use with cationic lipid transfection reagents, such as Lipofectamine reagent. |
| Opti-MEM I Reduced Serum Medium | Gibco | 11058021 | The antibiotics penicillin and streptomycin are used to prevent bacterial contamination of cell cultures due to their effective combined action against gram-positive and gram-negative bacteria. |
| penicillin-streptomycin | Gibco | 15140122 | Maximum RCF is 12,500 xg Temperature range from -80 °C to 120 °C RNase-/DNase-free Sterile |
| PP Centrifuge Tubes (15 mL) | Corning | 430791 | a stable and highly reactive serine protease |
| Proteinase K | Beyotime | ST532 | Treated for optimal cell attachment Sterilized by gamma radiation and certified nonpyrogenic |
| TC-treated Culture Dish (60mm) | Corning | 430166 | Trypsin from bovine pancreas TPCK Treated, essentially salt-free, lyophilized powder, ≥10,000 BAEE units/mg protein |
| TPCK-trypsin | Sigma | T1426 | This liquid formulation of trypsin contains EDTA and phenol red. Gibco Trypsin-EDTA is made from trypsin powder, an irradiated mixture of proteases derived from porcine pancreas. Due to its digestive strength, trypsin is widely used for cell dissociation, routine cell culture passaging, and primary tissue dissociation. The trypsin concentration required for dissociation varies with cell type and experimental requirements. |
| Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red | Gibco | 25200056 |
Referências
- Knipe, D. M., Howley, P. M. . Fields Virology (6th). , (2013).
- White, J. M., Delos, S. E., Brecher, M., Schornberg, K. Structures and mechanisms of viral membrane fusion proteins: multiple variations on a common theme. Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology. 43 (3), 189-219 (2008).
- Bright, R. A., et al. Cross-clade protective immune responses to influenza viruses with H5N1 HA and NA elicited by an influenza virus-like particle. PLoS One. 3 (1), 1501 (2008).
- Yang, J., et al. Reliability of pseudotyped influenza viral particles in neutralizing antibody detection. PLoS One. 9 (12), 113629 (2014).
- Wyatt, R., Sodroski, J. The HIV-1 envelope glycoproteins: fusogens, antigens, and immunogens. Science. 280 (5371), 1884-1888 (1998).
- Joe, A. K., Foo, H. H., Kleeman, L., Levine, B. The transmembrane domains of Sindbis virus envelope glycoproteins induce cell death. Journal of Virology. 72 (5), 3935-3943 (1998).
- Albecka, A., Laine, R. F., Janssen, A. F., Kaminski, C. F., Crump, C. M. HSV-1 Glycoproteins Are Delivered to Virus Assembly Sites Through Dynamin-Dependent Endocytosis. Traffic. 17 (1), 21-39 (2016).
- Huang, A. S., Palma, E. L., Hewlett, N., Roizman, B. Pseudotype formation between enveloped RNA and DNA viruses. Nature. 252 (5485), 743-745 (1974).
- Rubin, H. Genetic Control of Cellular Susceptibility to Pseudotypes of Rous Sarcoma Virus. Virology. 26, 270-276 (1965).
- Steffen, I., Simmons, G. Pseudotyping Viral Vectors With Emerging Virus Envelope Proteins. Current Gene Therapy. 16 (1), 47-55 (2016).
- Bartosch, B., Dubuisson, J., Cosset, F. L. Infectious hepatitis C virus pseudo-particles containing functional E1-E2 envelope protein complexes. Journal of Experimental Medicine. 197 (5), 633-642 (2003).
- Bian, T., Zhou, Y., Bi, S., Tan, W., Wang, Y. HCV envelope protein function is dependent on the peptides preceding the glycoproteins. Biochemical and Biophysical Research Communications. 378 (1), 118-122 (2009).
- Gudima, S., Meier, A., Dunbrack, R., Taylor, J., Bruss, V. Two potentially important elements of the hepatitis B virus large envelope protein are dispensable for the infectivity of hepatitis delta virus. Journal of Virology. 81 (8), 4343-4347 (2007).
- Yoshida, Y., Emi, N., Hamada, H. VSV-G-pseudotyped retroviral packaging through adenovirus-mediated inducible gene expression. Biochemical and Biophysical Research Communications. 232 (2), 379-382 (1997).
- Burns, J. C., Friedmann, T., Driever, W., Burrascano, M., Yee, J. K. Vesicular stomatitis virus G glycoprotein pseudotyped retroviral vectors: concentration to very high titer and efficient gene transfer into mammalian and nonmammalian cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (17), 8033-8037 (1993).
- Zhang, F., et al. Characterization of pseudoparticles paired with hemagglutinin and neuraminidase from highly pathogenic H5N1 influenza and avian influenza A (H7N9) viruses. Virus Research. 253, 20-27 (2018).
- Zhang, F., et al. Infectivity of Pseudotyped Particles Pairing Hemagglutinin of Highly Pathogenic Avian Influenza a H5N1 Virus with Neuraminidases of The 2009 Pandemic H1N1 and a Seasonal H3N2. Journal of Bioterrorism & Biodefense. 2, 104 (2011).
- Wu, J., et al. Characterization of neuraminidases from the highly pathogenic avian H5N1 and 2009 pandemic H1N1 influenza A viruses. PLoS One. 5 (12), 15825 (2010).
- Nefkens, I., et al. Hemagglutinin pseudotyped lentiviral particles: characterization of a new method for avian H5N1 influenza sero-diagnosis. Journal of Clinical Virology. 39 (1), 27-33 (2007).
- Zhang, Y., et al. Hemagglutinin and neuraminidase matching patterns of two influenza A virus strains related to the 1918 and 2009 global pandemics. Biochemical and Biophysical Research Communications. 387 (2), 405-408 (2009).
- Lin, X., et al. Oseltamivir boosts 2009 H1N1 virus infectivity in vitro. Biochemical and Biophysical Research Communications. 390 (4), 1305-1308 (2009).
- McKay, T., Patel, M., Pickles, R. J., Johnson, L. G., Olsen, J. C. Influenza M2 envelope protein augments avian influenza hemagglutinin pseudotyping of lentiviral vectors. Gene Therapy. 13 (8), 715-724 (2006).
- Pan, H., et al. Autophagy mediates avian influenza H5N1 pseudotyped particle-induced lung inflammation through NF-kappaB and p38 MAPK signaling pathways. American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 306 (2), 183-195 (2014).
- Szecsi, J., et al. Induction of neutralising antibodies by virus-like particles harbouring surface proteins from highly pathogenic H5N1 and H7N1 influenza viruses. Virology Journal. 3, 70 (2006).
- Garcia, J. M., Lagarde, N., Ma, E. S., de Jong, M. D., Peiris, J. S. Optimization and evaluation of an influenza A (H5) pseudotyped lentiviral particle-based serological assay. Journal of Clinical Virology. 47 (1), 29-33 (2010).
- Garcia, J. M., Lai, J. C. Production of influenza pseudotyped lentiviral particles and their use in influenza research and diagnosis: an update. Expert Review of Anti-infective Therapy. 9 (4), 443-455 (2011).
- Haynes, J. R., et al. Influenza-pseudotyped Gag virus-like particle vaccines provide broad protection against highly pathogenic avian influenza challenge. Vaccine. 27 (4), 530-541 (2009).
- Schmeisser, F., et al. Production and characterization of mammalian virus-like particles from modified vaccinia virus Ankara vectors expressing influenza H5N1 hemagglutinin and neuraminidase. Vaccine. 30 (23), 3413-3422 (2012).
- Liu, Y. V., et al. Chimeric severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) S glycoprotein and influenza matrix 1 efficiently form virus-like particles (VLPs) that protect mice against challenge with SARS-CoV. Vaccine. 29 (38), 6606-6613 (2011).
- Moeschler, S., Locher, S., Conzelmann, K. K., Kramer, B., Zimmer, G. Quantification of Lyssavirus-Neutralizing Antibodies Using Vesicular Stomatitis Virus Pseudotype Particles. Viruses. 8 (9), 254 (2016).
- Lai, A. L., Millet, J. K., Daniel, S., Freed, J. H., Whittaker, G. R. The SARS-CoV Fusion Peptide Forms an Extended Bipartite Fusion Platform that Perturbs Membrane Order in a Calcium-Dependent Manner. Journal of Molecular Biology. 429 (24), 3875-3892 (2017).
- Millet, J. K., et al. Middle East respiratory syndrome coronavirus infection is inhibited by griffithsin. Antiviral Research. 133, 1-8 (2016).
- Millet, J. K., et al. Production of Pseudotyped Particles to Study Highly Pathogenic Coronaviruses in a Biosafety Level 2 Setting. Journal of Visualized Experiments. (145), e59010 (2019).
- Ma, M., et al. Murine leukemia virus pseudotypes of La Crosse and Hantaan Bunyaviruses: a system for analysis of cell tropism. Virus Research. 64 (1), 23-32 (1999).
- Wool-Lewis, R. J., Bates, P. Characterization of Ebola virus entry by using pseudotyped viruses: identification of receptor-deficient cell lines. Journal of Virology. 72 (4), 3155-3160 (1998).
- Chen, C. M., et al. Production and design of more effective avian replication-incompetent retroviral vectors. Biologia do Desenvolvimento. 214 (2), 370-384 (1999).
- Kaku, Y., et al. Second generation of pseudotype-based serum neutralization assay for Nipah virus antibodies: sensitive and high-throughput analysis utilizing secreted alkaline phosphatase. Journal of Virological Methods. 179 (1), 226-232 (2012).
- Rudiger, D., Kupke, S. Y., Laske, T., Zmora, P., Reichl, U. Multiscale modeling of influenza A virus replication in cell cultures predicts infection dynamics for highly different infection conditions. PLOS Computational Biology. 15 (2), 1006819 (2019).
- Petiot, E., et al. Influenza viruses production: Evaluation of a novel avian cell line DuckCelt(R)-T17. Vaccine. 36 (22), 3101-3111 (2018).
