माउस लिवर ऊतक में जहाजों का मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपिक अवलोकन
Summary
इस प्रयोग में, एक माउस को रोडामाइन बी आइसोथियोसाइनेट-डेक्सट्रान के साथ अपनी पूंछ की नस में इंजेक्ट किया जाता है जो रक्त वाहिकाओं को दाग सकता है। जिगर के उजागर होने और तय होने के बाद, लिवर के एक विशिष्ट हिस्से को मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके जीवित शरीर में गहरे ऊतक का निरीक्षण करने के लिए चुना जा सकता है।
Abstract
माउस जिगर के ऊतकों की इंट्रावैस्कुलर गतिशीलता को देखना हमें माउस यकृत के ऊतकों से संबंधित रोगों पर आगे गहराई से टिप्पणियों और अध्ययनों का संचालन करने की अनुमति देता है। एक माउस को डाई के साथ इंजेक्ट किया जाता है जो रक्त वाहिकाओं को दाग सकता है। वीवो में माउस लिवर का निरीक्षण करने के लिए, यह एक फ्रेम में उजागर और तय किया जाता है। जिगर के ऊतकों में रक्त वाहिकाओं की दो और त्रि-आयामी छवियों को मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोप का उपयोग करके प्राप्त किया जाता है। चयनित स्थलों पर ऊतकों की छवियां दीर्घकालिक परिवर्तनों का निरीक्षण करने के लिए लगातार प्राप्त की जाती हैं; यकृत ऊतकों में रक्त वाहिकाओं के गतिशील परिवर्तन भी देखे जाते हैं। मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी गहरे ऊतक वर्गों या अंगों में कोशिका और कोशिका कार्य को देखने के लिए एक विधि है। मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी में ऊतक माइक्रोस्ट्रक्चर के प्रति संवेदनशीलता होती है और वीवो में उच्च स्थानिक संकल्प पर जैविक ऊतकों की इमेजिंग को सक्षम बनाता है, जो संगठन की जैव रासायनिक जानकारी को कैप्चर करने की क्षमता प्रदान करता है। मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी का उपयोग यकृत के हिस्से का निरीक्षण करने के लिए किया जाता है लेकिन छवि को अधिक स्थिर बनाने के लिए यकृत को ठीक करना समस्याग्रस्त है। इस प्रयोग में, यकृत को ठीक करने और माइक्रोस्कोप के नीचे जिगर की अधिक स्थिर छवि प्राप्त करने के लिए एक विशेष वैक्यूम सक्शन कप का उपयोग किया जाता है। इसके अलावा, इस विधि का उपयोग रंगों के साथ ऐसे पदार्थों को चिह्नित करके जिगर में विशिष्ट पदार्थों के गतिशील परिवर्तनों का निरीक्षण करने के लिए किया जा सकता है।
Introduction
रक्त वाहिकाएं मानव शरीर के विभिन्न अंग ऊतकों के लिए पोषक तत्व प्रदान कर सकती हैं, और पदार्थों का आदान-प्रदान कर सकती हैं। साथ ही, कई साइटोकिन्स, हार्मोन, दवाएं और कोशिकाएं विशिष्ट स्थानों पर संवहनी परिवहन के माध्यम से भी कार्य करती हैं। यकृत ऊतक में संवहनी परिवर्तन देखने से यकृत ऊतकों में रक्त प्रवाह के वितरण और पदार्थों के परिवहन को समझने में मदद मिल सकती है, और कुछ संवहनी से संबंधित रोगों के विश्लेषण में सहायता1,2।
चूहों में जिगर की रक्त वाहिकाओं का निरीक्षण करने के कई तरीके हैं। उनमें से, ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी अपारदर्शी संवहनी ऊतक3अवलोकन में कई सीमाएं हैं। मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी का उपयोग जीवित यकृत की रक्त वाहिकाओं को गैर – निवास उच्च संकल्प4के साथ छवि बनाने के लिए किया जा सकता है। न केवल रक्त वाहिकाओं की त्रि-आयामी छवियों को प्राप्त किया जा सकता है, बल्कि तकनीक का उपयोग ऊतक को जैविक प्रभावों का निरीक्षण करने के लिए व्यवस्थित करने में मदद करने के लिए भी किया जा सकता है; इसके अलावा, पूरे ऊतक के बजाय केवल माइक्रोवेसेल्स के रूप में गणना टोमोग्राफी और चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग5में इमेज किया जा सकता है ।
मल्टीफोटॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग कम फोटोकॉक्सिसिटी 6 के साथ गहरे जीवित ऊतकों में बिखरे हुए फ्लोरोसेंट संकेतों का प्रभावीढंगसे पता लगाने के लिए किया जा सकता है। इसलिए, जीवित ऊतक की गतिविधि सुनिश्चित की जा सकती है, और नुकसान की मात्रा को कम किया जा सकता है। मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी में कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी की तुलना में बेहतर मर्मज्ञ शक्ति होती है, जिससे गहरी परतों को7देखा जा सकता है, जो अद्वितीय 3 डी इमेजिंग प्रदान करता है। मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी का उपयोग अब अक्सर कपालनसों 8 में किया जाता है और इसे जीवित चूहों 9 , 10,11में न्यूरोनल गतिशीलता के अध्ययन तक बढ़ाया गयाहै।
इस प्रयोग में, माउस रक्त वाहिकाओं के फ्लोरोसेंट लेबलिंग के बाद, यकृत को एक फ्रेम में तय किया जाता है, और जीवित यकृत ऊतक में रक्त वाहिकाओं की गतिशीलता को मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके देखा जा सकता है। यह प्रयोग विशिष्ट पदार्थों को चिह्नित करने के तरीके को दर्शाता है, ऊतक के भीतर किसी स्थान का निरीक्षण करने में मदद करने के लिए मल्टीफोटॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करें, अंतरकोशिकीय ऊतक में सेलुलर घटनाओं का निरीक्षण करें, फोटोकेमिकल माप12,13,14बनाएं और जीवित ऊतक15के अंदर सामग्री गतिशीलता का निरीक्षण करें। उदाहरण के लिए, ट्यूमर एंडोथेलियल मार्कर 1 (TEM1) को कई ठोस ट्यूमर में रक्त वाहिकाओं और स्ट्रोमा पर एक उपन्यास सतह मार्कर अपविनियमित के रूप में पहचाना गया है, जो टेम1 के खिलाफ एकल-श्रृंखला चर टुकड़ा (एससीएफवी) 78 को चिह्नित करता है, और फिर मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी का उपयोग माउस हेमंगियोमा स्थान और ट्यूमर16के मूल्यांकन के लिए किया जा सकता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
एक विशिष्ट जीवित ऊतक को देखते हुए ऊतक17के अंदर सामग्री के परिवर्तनों, स्थानीयकरण और जैविक प्रभावों को समझने का एक प्रभावी साधन है। इस प्रयोग में, महत्वपूर्ण कदम एक अंग इमेजिंग स्थिरता के साथ ज?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन ऑफ चाइना (81772133, 81902444), गुआंगडोंग नेचुरल साइंस फंड (2020A1515010269, 2020A1515011367), ग्वांग्झू नागरिक स्वास्थ्य विज्ञान और प्रौद्योगिकी अनुसंधान परियोजना (201803010034, 201903010072), और सैन्य चिकित्सा नवाचार परियोजना (17CXZ008) ।
Materials
| 1 mL syringe x 2 | Hunan Pinan Medical Devices Technology | YA0551 | |
| 5 W heating pad | BiolinkOptics Technology | BL336 | |
| 75% absolute ethanol | Guangdong Guanghua Sci-Tech | 1.17113.023 | |
| Absorbent cotton ball | Healthy Sanitation Kingdom | ||
| Mouse surgical instrument | RWD Life Science | SP0001-G | Including scissors and tweezers |
| Multiphoton microscopy | Olympus | FV1200MPE | |
| Organ imaging fixture | BiolinkOptics Technology | BL336 | Including suction cup, hose, negative pressure pump and bracket |
| Rhodamine B isothiocyanate–Dextran | Sigma | R9379 | |
| Shaving machine | Lei Wa | RE-3201 | |
| Sodium pentobarbital | Sigma | P3761-25G |
Referências
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