هنا، نقدم وصفا مفصلا للإجراءات التي تحث خزعات قرصة متناظرة موجهة في الفئران وتتبع إغلاق الجروح في الوقت الحقيقي. وبالإضافة إلى ذلك، يتم توفير طرق لإعداد الأنسجة للتحليلات النسيجية والمناعة الكيميائية والجزيئية لسرّد الجرح.
فهم الأنسجة والتغيرات الخلوية التي تحدث في الاستجابة للاصابة الحادة وكذلك خلال عملية التئام الجروح هو من الأهمية بمكان عند دراسة أمراض الجهاز الهضمي (GI). نموذج خزعة قرصة القولونية مورين هو أداة مفيدة لتحديد هذه العمليات. بالإضافة إلى ذلك، يمكن دراسة التفاعل بين محتوى الأمعاء (على سبيل المثال، الميكروبات) والقولون. ومع ذلك، يمكن أن يكون تحريض الجروح والقدرة على تتبع إغلاق الجروح مع مرور الوقت بطريقة موثوقة تحديا. وعلاوة على ذلك، يجب أن يتم إعداد الأنسجة والتوجه بها بطريقة موحدة لاستجواب الأمثل التغيرات الهستوولوجي والجزيئية. هنا، نقدم طريقة مفصلة تصف الإصابة الناجمة عن الخزعة ورصد إغلاق الجروح من خلال تكرار تنظير القولون. ويرد وصف النهج الذي يضمن قياسات متسقة وقابلة للتكرار من حجم الجرح، والقدرة على جمع السرير الجرح للتحليلات الجزيئية وكذلك تصور سرير الجرح عند تقسيم الأنسجة. القدرة على تنفيذ هذه التقنيات بنجاح يسمح لدراسات الاستجابة للإصابة الحادة، والتئام الجروح والتفاعلات المستضيفة داخل القولون.
الجهاز الهضمي (GI) هو نظام الجهاز المعقد نظرا لوظائفه المتعددة، وأنواع الخلايا المضيفة (مثل الظهارية، المناعي، stromal، الخ) فضلا عن تريليونات من الميكروبات. في ضوء هذا التعقيد، وأمراض الجهاز الهضمي غالبا ما تنطوي على التفاعل بين كل هذه العوامل. على سبيل المثال ، ترتبط أمراض الأمعاء الالتهابية (IBD) بدورات الالتهاب والمغفرة في الجهاز الهضمي ، والتي تنطوي على تنشيط الخلايا الالتهابية ، dysbiosis ، والإصلاح الظهاري1،2،3،4،5،6،7. وجود نظم نموذج مناسب لدراسة مرض التهاب الأمعاء والظروف الالتهابية الأخرى في الجهاز الهضمي أمر بالغ الأهمية لتوضيح التسبب في المرض. توجد عدة نماذج لدراسة التسبب في مرض الالتهابات المتعددة الوبائيات بما في ذلك الفئران المعدلة وراثيا واستخدام المواد الكيميائية مثل كبريتات الصوديوم dextran (DSS) في القوارض8،9،10. وتشمل القيود المفروضة على هذه النماذج عدم القدرة على التحكم بدقة في تحريض الالتهاب، فضلا عن الصعوبات في تقييم التئام الجروح. يمكن أن تكون الطرق البديلة لمحاكاة جوانب من مرض الالتهابات الالتهابية IBD مفيدة لتطوير العلاجات.
توفر خزعات قرصة المنظار الموجهة في الفئران نظامًا نموذجيًا مفيدًا لدراسة التسبب في الاستجابة الالتهابية ، والتئام الجروح ، بالإضافة إلى تفاعلات الميكروب المضيف في القولون. وقد استخدم هذا النهج لأول مرة كأداة تجريبية في عام 2009، والتي أظهرت فائدتها لدراسة الاستجابة الالتهابية الحادة والتئام الجروح في القناة الهضمية11. واستخدمت الدراسات اللاحقة هذه التقنية لتقييم أدوار مسارات الإشارات المختلفة وكذلك ميكروبيوتا الأمعاء ، في التئام الجروح القولونية11،12،13،14،15،16،17،18. في الآونة الأخيرة، استخدمت مجموعتنا هذا النموذج للتحقيق في أهمية sphingosine-1-الفوسفات الإشارات والبكتيريا في الاستجابة الحادة لإصابة القولون19. على الرغم من أنه مفيد ، يمكن أن يكون إجراء خزعات قرصة موجهة بالمنظار في الفئران وتقييم تغييرات الأنسجة اللاحقة أمرًا صعبًا تقنيًا. على سبيل المثال، يمكن أن يحدث ثقب الأمعاء عند تحريض الإصابة وضمان قياسات متسقة من السرير الجرح من خلال تنظير القولون التسلسلي يمكن أن يكون من الصعب. بالإضافة إلى ذلك، يمكن توجيه الأنسجة القولونية بشكل صحيح لتصور سرير الجرح للتحليلات النسيجية أو المناعية الكيميائية يكون تحديا. على الرغم من وجود بعض المعلومات بشأن هذه الأساليب18,20, وصف دقيق خطوة الحكيمة من هذه التقنيات على طول سوف البصرية المساعدات وعود لتعزيز الموثوقية وفائدة أوسع لهذا النموذج. هنا ، نقدم طريقة مفصلة لتنفيذ خزعات قرصة متناظرة موجهة في الفئران ، وتتبع إغلاق الجروح بمرور الوقت وإعداد الأنسجة لتمكين التحليلات الهستويولوجية والجزيئية للسرير الجرحي. يمكن إنشاء طريقة قياسية لتنفيذ هذه التقنيات توسيع استخدام هذا النموذج لدراسة الوسطاء الذين لم يتم التحقيق في السابق التي يحتمل أن تكون مهمة لالتهاب GI وإصلاح الجرح.
ضمان خزعات متسقة ودقيقة وكذلك قياسات حجم الجرح هي ذات أهمية قصوى عند محاولة تقييم فعال لمعدل إغلاق الجرح في هذا النموذج. ولذلك، ينبغي اتخاذ عدة تدابير للتأكد من أن الإجراءات يجري تنفيذها على النحو الصحيح. أولاً، يجب ألا يكون عمق الخزعة ضحلاً أو عميقاً جداً. إذا كانت ضحلة جدا، لن يكون هناك ن…
The authors have nothing to disclose.
وقد تم دعم هذا العمل من خلال منح من مؤسسة كرون والتهاب القولون (D.C.M) ومؤسسة نيويورك كرون (D.C.M و A.J.D.). يشكر المؤلفون السيدة كارمن فيرارا على مساعدتها في إنشاء مرافقة الفيديو لهذه المقالة.
Biopsy forceps, 3 Fr | Karl Storz | 61071ZJ | |
Coloview Tower system | Karl Storz | contact company | |
Examination sheath, 9 Fr, Kit | Karl Storz | 61029DK | |
Hopkins telescope, 0', 1.9 mm x 10 cm | Karl Storz | 64301AA | |
isofluorane | Covetrus | 2905 | |
methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
micro iris scissors | Integra | 18-1619 | |
NIH ImageJ | NIH | N/A | software available for free download from: https://imagej.nih.gov/ij/ |
Pawfly MA-60 aquarium pump | Amazon | N/A | |
scalpal with #10 blade | Hill-Rom | 372610 |