Aqui, fornecemos uma descrição detalhada do procedimento para induzir biópsias de pinça guiadas colonoscópicas em camundongos e rastrear o fechamento de feridas em tempo real. Além disso, são fornecidos métodos para a preparação de tecidos para análises histológicas, imunohistoquímicas e moleculares do leito da ferida.
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Artigo de método
Realizando biópsias de pinça guiadas colonoscópicas em camundongos e avaliando alterações subsequentes de tecido
Neste artigo
Resumo
Resumo
Compreender as alterações teciduais e celulares que ocorrem na resposta de lesão aguda, bem como durante o processo de cicatrização da ferida, é de suma importância no estudo de doenças do trato gastrointestinal (GI). O modelo de biópsia de pinças coloniais murinas é uma ferramenta útil para definir esses processos. Além disso, a interação entre o conteúdo luminal intestinal (por exemplo, micróbios) e o cólon pode ser estudada. No entanto, a indução da ferida e a capacidade de rastrear o fechamento da ferida ao longo do tempo de forma confiável podem ser desafiadoras. Além disso, a preparação e orientação tecidual devem ser realizadas de forma padronizada para interrogar de forma ideal alterações histológicas e moleculares. Aqui, apresentamos um método detalhado descrevendo a lesão induzida pela biópsia e o monitoramento do fechamento da ferida através de colonoscopias repetidas. Uma abordagem é descrita que garante medições consistentes e reprodutíveis do tamanho da ferida, a capacidade de coletar o leito da ferida para análises moleculares, bem como visualizar o leito da ferida após a secção dos tecidos. A capacidade de realizar com sucesso essas técnicas permite estudos da resposta de lesão aguda, cicatrização de feridas e interações luminal-hospedeira dentro do cólon.
Introdução
O trato gastrointestinal (GI) é um sistema de órgãos complexo dadas suas múltiplas funções, tipos de células hospedeiras (por exemplo, epiteliais, imunes, estromicas, etc.) bem como trilhões de micróbios. Diante dessa complexidade, as doenças do trato de GI muitas vezes envolvem a interação de todos esses fatores. Por exemplo, as doenças inflamatórias intestinais (DII) estão associadas a ciclos de inflamação e remissão no trato GI, envolvendo a ativação de células inflamatórias, disbiose e reparação epitelial1,2,3,4,
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Protocolo
Todos os procedimentos aqui descritos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Weill Cornell Medicine." Para: "Todos os procedimentos descritos aqui foram aprovados pelos Comitês Institucionais de Cuidados e Uso de Animais da Weill Cornell Medicine e da Universidade Stony Brook.
1. Colonoscopia e indução de feridas
- Pré-monte os componentes do endoscópio inserindo primeiro o endoscópio de furo rígido de 1,9 mm na baia(Figura 1A-B). Conecte a bomba de ar (para fornecer insuficiência cólon) utilizando a tubulação fornecida, à válvula de gás no lado esquer....
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Resultados
Os pequenos itens (lente, bainha, biópsia) necessários para a realização de biópsias são mostrados na Figura 1, juntamente com indicadores de montagem adequada desses componentes. A Figura 2 mostra imagens representativas de visões aceitáveis do leito da ferida, a fim de quantificar com precisão o tamanho do leito da ferida e a taxa de fechamento da ferida. Um exemplo de visão ex vivo do leito da ferida é mostrado na Figura 3A, incl.......
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Discussão
Garantir biópsias consistentes e precisas, bem como medidas de tamanho da ferida são de suma importância ao tentar avaliar efetivamente a taxa de fechamento da ferida neste modelo. Portanto, várias medidas devem ser tomadas para ter certeza de que os procedimentos estão sendo realizados corretamente. Primeiro, a profundidade da biópsia não deve ser muito rasa ou profunda. Se for muito raso, não haverá uma janela suficiente para avaliar o fechamento da ferida. A Figura 2 demonstra uma ótima p.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado por subsídios da Crohn's and Colitis Foundation (D.C.M) e da Fundação Crohn de Nova York (D.C.M. e A.J.D.). Os autores agradecem à sra. Carmen Ferrara pela ajuda na criação do acompanhamento do vídeo deste artigo.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Pinça de biópsia, 3 Fr | Karl Storz | 61071ZJ | |
| Sistema Coloview Tower | Karl Storz | empresa de contato | |
| Bainha de exame, 9 Fr, Kit | Karl Storz | 61029DK | |
| Telescópio Hopkins, 0', 1,9 mm x 10 cm | Karl Storz | 64301AA | |
| isofluorano | Covetrus | 2905 | |
| azul de metileno | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Integra | 18-1619 | ||
| NIH ImageJ NIH | N / A | software disponível para download gratuito em: https://imagej.nih.gov/ij/ | |
| Bomba de aquário Pawfly MA-60 | Amazon | N / A | |
| bisturi com lâmina # 10 | Hill-Rom | 372610 |
Referências
- Boal Carvalho, P., Cotter, J. Mucosal Healing in Ulcerative Colitis: A Comprehensive Review. Drugs. 77 (2), 159-173 (2017).
- Chen, M. L., Sundrud, M. S. Cytokine Networks and T-Cell Subsets in Inflammatory Bowel Diseases. Inflammatory Bowel Diseases. 22
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Reimpressões e permissões
