마우스에서 완전한 Transection 형 척수 손상의 유도
Summary
이 프로토콜은 척수 손상 연구에 대한 최소한의 부수적 손상과 함께 마우스 모델에서 안정적인 횡부 형 척수 손상을 유도하기위한 정확한 라미네절절제술을 만드는 방법을 설명합니다.
Abstract
척수 손상 (SCI)은 주로 외상의 결과로 돌이킬 수없는 영구적 인 기능 상실로 이어집니다. 세포 이식 방법과 같은 몇몇 처리 선택권은 SCI에서 생기는 쇠약하게 하는 무력을 극복하기 위하여 연구되고 있습니다. 대부분의 임상 전 동물 실험은 SCI의 설치류 모델에서 수행됩니다. SCI의 쥐 모델은 널리 사용되는 동안, 마우스 모델은 쥐 모델보다 상당한 장점을 가질 수 있지만, 덜 관심을 받고있다. 마우스의 작은 크기는 쥐에 대 한 보다 낮은 동물 유지 보수 비용에 동일시, 수많은 형질 전환 마우스 모델의 가용성연구의 많은 유형에 대 한 유리. 동물에서 반복 가능하고 정확한 부상을 유도하는 것은 SCI 연구의 주요 과제이며, 작은 설치류에서는 고정밀 수술이 필요합니다. transection 형 상해 모형은 이식 기지를 둔 치료 연구를 위한 마지막 10년간 일반적으로 이용된 상해 모형이었습니다, 그러나 마우스에 있는 완전한 transection 모형 상해를 유도하기 위한 표준화된 방법은 존재하지 않습니다. 우리는 흉부 척추 수준 10 (T10)에서 C57BL/6 마우스에서 완전한 흉부 유형 상해를 유도하기위한 수술 프로토콜을 개발했습니다. 절차는 정확하게 라미나를 제거하기 위해 rongeurs 대신 작은 팁 드릴을 사용, 그 후 둥근 절삭날이 있는 얇은 블레이드척수 편절을 유도하는 데 사용됩니다. 이 방법은 최소한의 부수적인 근육과 뼈 손상을 가진 작은 설치류에 있는 재현가능한 편부 모형 상해로 이끌어 내고 그러므로 행동 기능 결과가 분석되는 경우에 특히 혼란 요인을 극소화합니다.
Introduction
척수 손상 (SCI)은 건강과 라이프 스타일에 급격한 변화를 초래하는 복잡한 의료 문제입니다. SCI에 대한 치료법은 없으며 SCI의 병리학은 철저히 이해되지 않습니다. 동물 SCI 모델, 특히 설치류 모델은 새로운 치료법을 시험하기 위한 귀중한 도구를 제공하며 수십 년 동안 SCI를 탐구하는 데 사용되어 왔습니다. 현재까지, 전임상 SCI 연구의 72% 이상은쥐1을 사용한 단지 16%에 비해 쥐 모형을 채택했습니다. 비록 쥐, 그들의 더 큰 크기와 인간 SC와 유사한 충 치 형성 하는 경향, 전통적으로 새로운 치료 접근 을 공부 하기 위한 선호 하는 모델 동물 되었습니다., 쥐 (많은 형질 전환 마우스 모델을 포함 하 여) 지금 SCI2의세포 및 분자 메커니즘을 공부 하기 위해 더 자주 사용 되 고 있다. 마우스 모델은 쥐보다 취급이 용이하고 생식 속도가 빨라지고 비용이 절감되는 측면에서 추가적인 이점을 제공합니다. 마우스는 또한 인간1,2,3과게놈 유사성의 높은 정도를 나타낸다. 마우스 모델의 주요 단점은 척수 손상을 생성하고 치료하기위한 외과 적 개입에 대한 도전을 만드는 상당히 작은 크기로 확인되었습니다4,5.
마우스 모델에서 안정적인 SCI를 유도하기 위한 견고하고 재현 가능한 수술 프로토콜의 필요성을 강조하는 기존 문헌에는 격차가 있습니다. 따라서 이러한 한계를 극복하기 위해 이 프로토콜에서 참신하고 정확한 수술 방법을 제공합니다. 이 프로토콜은 마우스에서 황부 형 상해를 유도하기 위한 심층 지침을 제공하며, 이 부상 유형은 부상6,신경 가소성, 신경 회로 및 조직 공학 접근법7에따른 재생 및 퇴행성 변화를 연구하는 데 가장 적합한 것으로 인식되고 있다. 우리는 흉부 수준 SCI가 문헌1에서가장 일반적으로 사용되기 때문에, 낮은 흉부 영역에서 부상을 유도하기로 결정했다.
Protocol
Representative Results
Discussion
이 방법은 마우스의 T10 척추 수준에서 완전한 트란섹션 유형 부상을 유도하여 동물의 완전한 하반신 마비를 발생시며 부상 수준 보다 낮습니다. 전반적으로,이 방법은 최소한의 출혈, 무시할 수있는 부수적 인 손상 및 안정적이고 재현 가능한 부상을 초래합니다. 라미네절제술(10)이없는 이전에 발표된 트랜섹션 방법과 비교하여, 이 방법은 척추의 곡률을 조작하지 않고 직접 시?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 그리피스 대학 국제 학생 (박사) RR에 급여, JE와 JSJ에 페리 크로스 재단 보조금, JSJ와 JE에 클렘 존스 재단 보조금, JSJ와 JE에 퀸즐랜드 보조금의 자동차 사고 보험위원회에 의해 지원되었다.
Materials
| Baytril injectable 50 mg/mL, 50 mL | Provet | BAYT I | Post-operative care drug |
| Betadine 500 mL | Provet | BETA AS | Consumable |
| Castroviejo needle holder, locking | ProSciTech | T149C | Reusable |
| Ceramic zirconia blade, round with sharp sides, single edge, angled | ProSciTech | TXD101A-X | Reusable |
| Cotton swabs (5pcs) | Multigate | 21-893 | Consumable |
| Dremel Micro | DREMEL | 8050-N/18 | Cordless rotary tool |
| Dressing forceps fine | Multigate | 06-306 | Single use disposable |
| Drill bits | Kemmer Präzision | SM 32 M 0550 070 | Reusable |
| Dumont #7b forceps | Fine Science Tools | 11270-20 | Reusable |
| Dumont tweezers, style 5 | ProSciTech | T05-822 | Reusable |
| Fur trimmer | WAHL | WA9884-312 | Zero Overlap Hair Trimmer |
| Iris scissors, Ti, sharp tips, straight, 90mm | ProSciTech | TY-3032 | Reusable |
| Isoflurane isothesia NXT 250 | Provet | ISOF 00 HS | Anaesthetic agent |
| Colibri Retractor – 4cm | Fine Science Tools | 17000-04 | Reusable |
| Scalpel handle | ProSciTech | T133 | Reusable |
| Signature latex surgical gloves size 7.5 | Medline | MSG5475 | Consumable |
| Sodium Chloride 0.9% | STS | PHA19042005 | Consumable |
| Sterile Dressing Pack | Multigate | 08-709 | Single use disposable |
| Sterile Fluid Impervious Drape 60×60 cm | Multigate | 29-220 | Single use disposable |
| Surgical spirit 100 mL | Provet | # SURG SP | Consumable |
| Suture Material – SILK BLK 45CM 5/0 FS-2 | Johnson & Johnson Medical | 682G | Silk Suture |
| Suture Material – Vicryl 70CM 5-0 S/A FS-2 | Johnson & Johnson Medical | VCP421H | Vicryl Suture |
| Temgesic 0.3 mg in 1 mL, x 5 ampoules (class S8 drug) | Provet | TEMG I | Post-operative care drug |
Referências
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- Lee, D. H., Lee, J. K. Animal models of axon regeneration after spinal cord injury. Neuroscience Bulletin. 29 (4), 436-444 (2013).
- Sharif-Alhoseini, M., Rahimi-Movaghar, V., Dionyssiotis, Y. . Topics in Paraplegia. , (2014).
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- Nakae, A., et al. The animal model of spinal cord injury as an experimental pain model. Journal of Biomedicine & Biotechnology. 2011, 939023 (2011).
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- Seitz, A., Aglow, E., Heber-Katz, E. Recovery from spinal cord injury: a new transection model in the C57Bl/6 mouse. Journal of Neuroscience Research. 67 (3), 337-345 (2002).
