Summary

测量果蝇的作物运动性和食物通度

Published: May 09, 2020
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Summary

该协议的目标是测量作物收缩和量化食物分布在果蝇肠道

Abstract

大多数动物使用胃肠道(GI)来消化食物。摄入的食物在胃肠道的运动对营养吸收至关重要。紊乱的GI运动和胃排空导致多种疾病和症状。作为一种强大的基因模型生物体,果蝇可用于GI运动性研究。D罗友病作物是一种器官,它收缩并移动食物进入中腹,以便进一步消化,其功能类似于哺乳动物的胃。介绍是一种使用简单测量工具研究果蝇作物动性的协议。介绍了一种计算作物收缩以评估作物运动性的方法,以及一种利用分光光度计检测作物和肠道之间染蓝色食物分布的方法,以调查作物对食物传传的影响。该方法用于检测控制与nprl2突变苍蝇在作物运动性上的差异。该协议既具有成本效益,又对作物的动性高度敏感。

Introduction

大多数动物有一个消化管称为胃肠道(GI),以吸收来自环境的能量和营养。人类胃肠道由四个部分组成:食道、胃、小肠和大肠(结肠)。从胃到肠的食物通道对营养吸收至关重要。一些影响因素,如老化,有毒药物和感染,导致胃肠道运动障碍和胃排空,这与一些疾病及其症状,如消化不良,胃食管反流病,便秘1。

果蝇(果蝇黑色素)是生物医学研究中广泛使用的模型动物,因为它易于基因操作。重要的是,大约77%与人类疾病相关的基因在果蝇2中具有同源性。使用果蝇的研究在了解许多疾病机制方面取得了巨大的进展。作为一种强大的遗传模型生物体,果蝇在胃肠道研究中得到了广泛的应用果蝇有一个更简单的消化道,分为三个离散域:前脑、中生道和后脑4。作物是前种的一部分,是一个袋式结构,作为摄入食物储存的场地。中肠是一个长管,作为食物消化和营养吸收的站点,通过上皮层,其中包括吸收性肠细胞(CS)和分泌肠分泌细胞5。有趣的是,果蝇的胃功能分为两部分:作物功能作为食物储存和铜细胞区(CCR)是一个高酸性区域与pH <3 6在果蝇,摄入的食物最初被转移到作物,然后泵入中果7。因此,作物在食物传传中起着至关重要的作用。被内脏肌肉包裹,由一系列复杂的阀门和括约肌组成,作物不断收缩,将食物移动到中游,以作进一步消化。

该协议允许检测食物从作物到中游的果蝇运动。通过计算作物收缩频率来评估作物收缩。此外,通过检测作物和肠道之间的食物分布,对作物对食物传通的影响进行了调查。此外,食物分配可用于反映使用不同喂养期的直接食物运动或基本食物状况。综合起来,该协议提供了快速评估作物运动性和食物传通性的方法

Protocol

1. 维护和准备实验苍蝇 在25°C的孵化器中,在含有10 mL新鲜食物(1%agar,2.4%的啤酒酵母,3%蔗糖,5%玉米粉)的培养箱中保持苍蝇,湿度为60%。将培养箱的光循环设置为 12 小时光:12-h 暗。 为了确保大量所需的基因型苍蝇同时出现,培养幼蝇(1~3天大)在标准食品中,表面有干酵母,3天。将成人转移到一个新的食物小瓶与标准食品,包括湿酵母,2天,让产卵。将卵子留在孵化器中?…

Representative Results

这些计算作物收缩率和检测染色食物分布的方法可用于评估作物对食物活力的功能。作物收缩反映了将食物推入肠道的频率。短喂养期后,染料在苍蝇中的分布表明食物从作物直接从作物到中游。 拉帕霉素复合物1(TORC1)的目标是调节营养和细胞代谢的主调节器。TORC1抑制可延长许多生物体的寿命,包括果蝇。作为 TORC1 的抑制剂,nprl2 突变苍蝇表现出 TORC1 和 GI 消化缺…

Discussion

在果蝇中,摄入的食物从作物转移到肠道进行消化。在这个过程中,营养物质被吸收,废物被排出体外作为粪便。因此,将食物摄入与粪便喷射进行比较,可以大致评估食物在体内运动的速度。毛细管喂食器(CAFE)的方法被广泛用于测量食物摄入10,11。10,粪便数计数方法可用于估计粪便的产生量12。然而,果蝇体内的食物运…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

这项工作得到了国家自然科学基金(第31872287号)、江苏省自然科学基金(NO.BK20181456)和江苏省六大人才高峰项目(第1号SWYY-146)。

Materials

96-well plate Thermo fisher 269620
Brillant Blue FCF Solarbio E8500 also called FD&C Blue No. 1
Centrifuge Thermo fisher Heraeus Pico 17
Spectrophotometer Spectra Max cMax plus
Tweezers Dumont 11252-30

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Citar este artigo
Cai, J., Xi, J., Wei, Y. Measuring Crop Motility and Food Passaging in Drosophila. J. Vis. Exp. (159), e61181, doi:10.3791/61181 (2020).

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