Method Article

Fundição Vascular de Pulmões de Camundongos Adultos e Precoces para Imagem Micro-CT

DOI:

10.3791/61242

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June 20th, 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Translational Vascular Medicine Branch, National Heart Lung and Blood Institute, National Institutes of Health, 2Mouse Imaging Facility, National Institute of Neurological Disorders and Stroke, National Institutes of Health, 3Division of Pediatric Surgery, Department of Surgery, University of North Carolina at Chapel Hill

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

O objetivo desta técnica é a visualização ex vivo de redes arteriais pulmonares de camundongos pós-natais e adultos precoces através da inflação pulmonar e injeção de um composto radio-opaco à base de polímero através da artéria pulmonar. Também são discutidas possíveis aplicações para tecidos fundidos.

Abstract

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Vasos sanguíneos formam redes intrincadas no espaço tridimensional. Consequentemente, é difícil apreciar visualmente como as redes vasculares interagem e se comportam observando a superfície de um tecido. Este método fornece um meio de visualizar a complexa arquitetura vascular tridimensional do pulmão.

Para isso, um cateter é inserido na artéria pulmonar e a vasculatura é simultaneamente lavada de sangue e quimicamente dilatada para limitar a resistência. Os pulmões são então inflados através da traqueia a uma pressão padrão e o composto de polímero é infundido no leito vascular a uma taxa de fluxo padrão. Uma vez que toda a rede arterial é preenchida e permitida a cura, a vasculatura pulmonar pode ser visualizada diretamente ou visualizada em um scanner micro-CT (μCT).

Quando realizado com sucesso, pode-se apreciar a rede arterial pulmonar em camundongos que variam de idades pós-natal precoces a adultos. Além disso, enquanto demonstrado no leito arterial pulmonar, este método pode ser aplicado em qualquer leito vascular com colocação otimizada de cateter e pontos finais.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

O foco desta técnica é a visualização da arquitetura arterial pulmonar usando um composto à base de polímero em camundongos. Embora tenha sido realizado um trabalho extensivo em leitos vasculares sistêmicos como cérebro, coração e rim1,2,,3,4,5, há menos informações sobre a preparação e o preenchimento da rede arterial pulmonar. O objetivo deste estudo, portanto, é expandir o trabalho anterior6,,7,8 e fornecer uma ....

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Protocol

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Todos os métodos aqui descritos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (ACUC) do Instituto Nacional de Pulmão e Sangue do Coração.

1. Preparação

  1. Injete o mouse intraperitonealmente com heparina (1 unidade/g de peso corporal do rato) e deixe-o ambulatório por 2 minutos.
  2. Eutanize o animal em uma câmara de CO2.
  3. Disponha o mouse em uma posição supina em uma placa cirúrgica e fixe todos os quatro membros na placa com fita. Use a ampliação para dissecção fina.

2. Expondo pulmões e traqueia

  1. Pulverize o lado ventral do mouse com 70% ....

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Results

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Um elenco bem sucedido exibirá o preenchimento uniforme de toda a rede arterial pulmonar. Demonstramos isso em camundongos C57Bl/6J variando em idade: Dia pós-natal P90 (Figura 4A),P30(Figura 4B),P7(Figura 4C)e P1(Figura 4D). Controlando a taxa de fluxo e monitorando visualmente o preenchimento em tempo real, foram alcançados pontos finais confiáveis da vasculatura mais .......

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Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Executado corretamente, este método produz imagens marcantes de redes arteriais pulmonares, permitindo comparação e experimentação em modelos de roedores. Vários passos críticos ao longo do caminho garantem o sucesso. Primeiro, os investigadores devem heparinizar o animal na fase preparatória para evitar que coágulos sanguíneos se formem na vasculatura pulmonar e câmaras do coração. Isso permite o trânsito arterial completo do composto polímero. Em segundo lugar, ao perfurar o diafragma e remover a caixa torácica, tome c.......

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Disclosures

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Os autores não têm nada a revelar

Acknowledgements

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Esta pesquisa foi apoiada em parte pelo Programa de Pesquisa Intramuros da NHLBI (DIR HL-006247). Gostaríamos de agradecer ao NIH Mouse Imaging Facility por orientação em aquisição e análise de imagens.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Seringa de 1ccBecton Dickinson309659
20ml Frascos de cintilação de vidroFisher03-340-25P
30G AgulhaBecton Dickinson305106
Tubos cônicos de 50mLCornin352098Para armazenamento e digitalização de amostras
Seringa de 60ccBecton Dickinson309653
7-0 seda Teleflex103-S
Analyze 12.0 SoftwareAnalyzeDirect Inc.N / ASoftware Primário
Amira 6.7 SoftwareThermo ScientificN / ASofware Alternativo
CeramaCut Tesouras 9cmFerramentas de Ciências Finas14958-09
Pinça Curva Revestida de CerâmicaFerramentas de Ciências Finas11272-50
Tanque de CO2 Robert'sOxygen Co.n / a
Bomba de seringa duplaCole ParmerEW-74900-10
Dumont Mini-FórcepsFerramentas de ciências finas11200-14
EtanolPharmco111000200
FormalinaSigma - Ciências da vidaHT501128
GazeCovidien441215
HemostatFerramentas de ciências finas13013-14
Heparina (1000USP Unidades/ml)HospiraNDC 0409-2720-01
Horos SoftwareHoros ProjectN/Ade software alternativo
n/a n/a
KimwipeFisher06-666lenço de limpeza de fibra óptica
Fita de rotulagemFisher15966
Base magnéticaKanetecN/A
Sistema Micro-CTPerkinElmerQuantum GX
Microfil (Composto Polimérico)Flowech Inc.Kit B - MV-1228 onças de composto MV; 8 onças de diluente; Agente de cura MV
MicromanipuladorStoelting56131
Monoject 1/2 ml Seringa de insulinaCovidien1188528012
Octagon Fórceps Dentes retosFerramentas de ciências finas11042-08
ParafilmBemis company, Inc.
Tubulação PE-10InstechBTPE-10
Phospahte tampolado com solução salinaBioRad#161-0780
Suporte de anelFisherS13747Altura 24in.
Nitroprussiato de Sódiosigma71778-25G
Placa de AçoN/AN/A16 x 16 pol. de área, 1/16 pol de espessura
Tesoura de Mola RetaFerramentas Fine Science15000-08
Cateter I.V. de Teflon SURFLO 24GCruz Biotechnology360103
Placa CirúrgicaFisher12-587-20Este é um suporte de slide convertido
Grampo universal de 3 pinos Conjunto deFisherS24280
25X3/4, Tubulação de 12"NiproPR25G19
Zeiss Stemi-508 Escopo de DissecçãoZeissn/a
Câmara de indução #PM999 Santa Inf. Alado

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Vasquez, S. X., et al. Optimization of microCT imaging and blood vessel diameter quantitation of preclinical specimen vasculature with radiopaque polymer injection medium. PLoS One. 6 (4), 19099(2011).
  2. Hong, S. H., et al.

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Vascular CastingPulmonary ArteryMicro CT ImagingMouse LungPolymer InfusionLung InflationCatheter InsertionVascular NetworkSodium Nitroprusside3D Visualization

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