Un modello basato su capsule per l'infestazione di fasi di zecche dure immature su topi di laboratorio
Summary
In questo studio, un sistema di alimentazione per le fasi ninfe e larval di zecca dura è stato sviluppato utilizzando una capsula attaccata al topo di laboratorio. La capsula di alimentazione è realizzata con materiali flessibili e rimane saldamente attaccata al mouse per almeno una settimana e consente un comodo monitoraggio dell’alimentazione delle zecche.
Abstract
Le zecche sono parassiti obbligatori dell’alimentazione del sangue in tutte le fasi dello sviluppo (tranne le uova) e sono riconosciute come vettori di vari agenti patogeni. L’uso di modelli murini nella ricerca sulle zecche è fondamentale per comprendere la loro biologia e le interazioni tra l’ospite-patogeno. Qui dimostriamo una tecnica non laboriosa per l’alimentazione di stadi immaturi di zecche dure su topi di laboratorio. Il vantaggio del metodo è la sua semplicità, breve durata, e la capacità di monitorare o raccogliere zecche in diversi punti di tempo di un esperimento. Inoltre, la tecnica consente l’attaccamento di due singole capsule sullo stesso topo, il che è utile per una varietà di esperimenti in cui sono necessari due diversi gruppi di zecche per nutrirsi dello stesso animale. La capsula non irritante e flessibile è realizzata con materiali facilmente accessibili e riduce al minimo il disagio degli animali sperimentali. Inoltre, l’eutanasia non è necessaria, i topi si riprendono completamente dopo l’esperimento e sono disponibili per il nuovo utilizzo.
Introduction
Le zecche sono importanti vettori di diversi agenti patogeni e rappresentano un grave rischio per la salute animale e umana1. La creazione di un sistema di alimentazione efficace è fondamentale quando si studiano la loro biologia, le interazioni tra zecche-ospite-patogeno o per stabilire misure di controllo efficaci. Attualmente, diversi sistemi di alimentazione artificiale, che evitano l’uso di animali vivi sono disponibili per le zecche2,3,4 e questi dovrebbero essere utilizzati ogni volta che le condizioni sperimentali lo consentono. Tuttavia, in vari scenari sperimentali questi sistemi non riescono a imitare adeguatamente le caratteristiche fisiologiche specifiche e l’uso di animali vivi è necessario per ottenere risultati pertinenti.
I topi di laboratorio sono comunemente utilizzati per lo studio di molti sistemi biologici e sono regolarmente utilizzati come ospiti perl’alimentazione delle zecche 5,6,7,8,9. I due metodi più comuni per alimentare le zecche immature sui topi includono infestazioni libere e l’uso di camere di confinamento attaccate al topo. Le infestazioni libere sono utilizzate principalmente per stadi larve e le zecche engorged possono cadere in un’area in cui possono essere recuperate. Le camere di confinamento sono di solito composte da tappi acrilici o polipropilene che sono incollati alla schiena del topo. La prima tecnica è un efficace sistema naturale per l’alimentazione delle zecche, ma non consente un attento monitoraggio durante l’esperimento perché le singole zecche sono disperse in diverse parti del corpo ospite. Inoltre, le zecche engorged che cadono in un’area di recupero possono essere contaminate da feci e urina10,11,12,13,14 che possono influenzare gravemente la forma fisica della zecca o possono essere danneggiate o mangiate dal topo se non vi è separazione tra l’animale e l’area di recupero15. I sistemi a camera permettono il confinamento delle zecche in un’area definita, tuttavia, il processo di incollaggio è laborioso e i tappi sono spesso debolmente aderenti alla colla e quindi spesso si staccano durantel’esperimento 16,17,18,19. I tappi sono anche rigidi, scomodi e portano a reazioni cutanee, che impediscono il nuovo uso dei topi e ne richiedono l’eutanasia dopo l’esperimento.
Nel nostro studio precedente, abbiamo sviluppato con successo un sistema efficace utilizzando camere fatte di schiuma di acetato di etilene-vinile (EVA) per l’alimentazione delle zecche sui conigli dalaboratorio 20. Qui abbiamo adattato questo sistema a un modello di topo e proporre un metodo semplice e pulito per alimentare fasi di zecche dure immature in capsule chiuse fatte di eva-foam. In particolare, il nostro sistema utilizza capsule elastiche EVA-foam incollate ai topi rasati con asciugatura veloce (3 min), colla in lattice non irritante. Questa tecnica consente l’attaccamento fermo e duraturo di capsule al topo sperimentale, così come l’efficace infestazione/raccolta di zecche durante l’intero corso dell’esperimento. La capsula piatta è realizzata con materiali flessibili e non impedisce la manipolazione del topo per la raccolta del sangue o altri scopi. Il sistema è adatto principalmente per le fasi di zecche ninfe, ma con una leggera modifica può essere utilizzato anche per l’alimentazione delle larve. Il metodo può essere completato da una sola persona esperta e non è necessaria una formazione completa.
Protocol
Representative Results
Discussion
Il passo più critico nel protocollo è l’incollaggio fermo della capsula alla pelle del topo. Pertanto, la colla in lattice deve essere applicata omogeneamente all’intera superficie EVA-foam della capsula e deve essere applicata una pressione costante per 3 minuti, soprattutto sul lato sinistro e destro della capsula. Si consiglia inoltre di posizionare la capsula il più in avanti possibile sul retro per evitare la sua rimozione dal mouse utilizzando le zampe posteriori. Nei nostri esperimenti, solo l’adesione della sc…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Riconosciamo l’assistenza tecnica di Alain Bernier French National Institute of Agricultural Research (INRAE), e Océane Le Bidel (ANSES). Lo studio è stato sostenuto dal DIM One Health – Région àle-de-France (acronimo del progetto: NeuroPaTick). I topi sono stati acquistati da ANSES. Il dottor Jeffrey L. Blair è riconosciuto per aver esaminato la versione precedente del manoscritto.
Materials
| EVA-foam 2 mm thick, (low density) | Cosplay Shop | EVA-45kg (950/450/2 mm) | It can be ordered also via Amazon (ref. no. B07BLMJDXD) |
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| Mice BALB/cByJ | Charles River | Strain code 627 | |
| Mice C57BL/6 | Charles River | Strain code 664 | |
| No-toxic Latex Glue | Tear mender | Fabric & Leather Adhesive | Also available also via Amazon (ref. no. B001RQCTUU) |
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