Um modelo baseado em cápsulas para infestação de estágios de carrapato duro imaturo em ratos de laboratório
Summary
Neste estudo, foi desenvolvido um sistema de alimentação para estágios ninfais e larvais de carrapato duro utilizando-se uma cápsula ligada ao rato de laboratório. A cápsula de alimentação é feita de materiais flexíveis e permanece firmemente presa ao mouse por pelo menos uma semana e permite um monitoramento confortável da alimentação do carrapato.
Abstract
Carrapatos são parasitas obrigatórios de alimentação sanguínea em todos os estágios de desenvolvimento (exceto ovos) e são reconhecidos como vetores de vários patógenos. O uso de modelos de camundongos na pesquisa de carrapatos é fundamental para entender suas interações biologia e carrapato-hogeno-patógeno. Aqui demonstramos uma técnica não laboriosa para a alimentação de estágios imaturos de carrapatos duros em ratos de laboratório. O benefício do método é sua simplicidade, curta duração e a capacidade de monitorar ou coletar carrapatos em diferentes pontos de tempo de um experimento. Além disso, a técnica permite o apego de duas cápsulas individuais no mesmo rato, o que é benéfico para uma variedade de experimentos onde dois grupos diferentes de carrapatos são necessários para se alimentar do mesmo animal. A cápsula não irritante e flexível é feita a partir de materiais de fácil acesso e minimiza o desconforto dos animais experimentais. Além disso, a eutanásia não é necessária, os camundongos se recuperam completamente após o experimento e estão disponíveis para reutilização.
Introduction
Carrapatos são vetores importantes de vários patógenos e representam um sério risco para a saúde animal e humana1. A criação de um sistema de alimentação eficaz é crucial ao estudar sua biologia, interações carrapato-hospedeiro-patógeno ou estabelecer medidas eficazes de controle. Atualmente, diversos sistemas de alimentação artificial, que evitam o uso de animais vivos, estão disponíveis para carrapatos2,,3,4 e estes devem ser utilizados sempre que as condições experimentais permitirem. No entanto, em várias configurações experimentais esses sistemas não conseguem imitar adequadamente as características fisiológicas específicas e o uso de animais vivos é necessário para alcançar resultados relevantes.
Camundongos de laboratório são comumente usados para o estudo de muitos sistemas biológicos e são rotineiramente utilizados como hospedeiros para alimentação carrapatos5,,6,7,,8,,9. Os dois métodos mais comuns de alimentação de carrapatos imaturos em camundongos incluem infestações gratuitas e o uso de câmaras de confinamento ligadas ao camundongo. Infestações gratuitas são usadas principalmente para estágios larvais e carrapatos engorgados podem cair para uma área onde podem ser recuperados. As câmaras de confinamento são geralmente compostas de tampas de acrílico ou polipropileno que são coladas nas costas do rato. A primeira técnica é um sistema natural eficaz para alimentação de carrapatos, mas não permite um monitoramento próximo durante o experimento porque os carrapatos individuais são dispersos em diferentes partes do corpo hospedeiro. Além disso, carrapatos engorgados que caem para uma área de recuperação podem se contaminar com fezes e urina10,11,12,13,14 que podem afetar severamente o condicionamento do carrapato ou podem ser danificados ou comidos pelo camundongo se não houver separação entre o animal e a área derecuperação 15. Os sistemas baseados em câmara permitem o confinamento de carrapatos em uma área definida, no entanto, o processo de colagem é trabalhoso e as tampas são muitas vezes fracamente aderentes à cola e, portanto, muitas vezes se desprendem durante o experimento16,17,,18,19. As tampas também são rígidas, desconfortáveis e levam a reações cutâneas, que impedem o reutilização dos camundongos e necessitam de sua eutanásia após o experimento.
Em nosso estudo anterior, desenvolvemos com sucesso um sistema eficaz usando câmaras feitas de espuma de acetato de vinil de etileno (EVA) para alimentar carrapatos em coelhos de laboratório20. Aqui, adaptamos este sistema a um modelo de mouse e propomos um método simples e limpo para alimentar estágios imaturos de carrapato duro em cápsulas fechadas feitas de espuma EVA. Especificamente, nosso sistema usa cápsulas elásticas de espuma EVA coladas nos camundongos raspados de volta com secagem rápida (3 min), cola de látex não irritante. Esta técnica permite uma fixação firme e duradoura de cápsulas ao camundongo experimental, bem como a efetiva infestação/coleta de carrapatos durante todo o curso do experimento. A cápsula plana é feita de materiais flexíveis e não impede a manipulação do camundongo para coleta de sangue ou outros fins. O sistema é adequado principalmente para os estágios do carrapato ninfa, mas com uma pequena modificação pode ser usado para alimentar larvas também. O método pode ser completado por uma única pessoa experiente e não é necessário treinamento extensivo.
Protocol
Representative Results
Discussion
O passo mais crítico no protocolo é a colagem firme da cápsula na pele do rato. Portanto, a cola de látex deve ser aplicada de forma homogênea em toda a superfície de espuma EVA da cápsula e deve ser aplicada pressão constante por 3 minutos, especialmente no lado esquerdo e direito da cápsula. Também recomendamos a colocação da cápsula o mais longe possível na parte traseira para evitar sua remoção pelo mouse usando suas patas traseiras. Em nossos experimentos, apenas a adesão da cola eva-espuma e látex…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Reconhecemos a assistência técnica do Instituto Nacional de Pesquisas Agrícolas Da França Alain Bernier (INRAE) e da Océane Le Bidel (ANSES). O estudo foi apoiado pelo DIM One Health – Région Île-de-France (Acrônimo do projeto: NeuroPaTick). Os ratos foram comprados pela ANSES. Dr. Jeffrey L. Blair é reconhecido por revisar a versão anterior do manuscrito.
Materials
| EVA-foam 2 mm thick, (low density) | Cosplay Shop | EVA-45kg (950/450/2 mm) | It can be ordered also via Amazon (ref. no. B07BLMJDXD) |
| Heat Shrink Tubing Electric Wire Wrap Sleeve | Amazon | B014GMT1AM | Different diameters of Heat Shrink Tubing are available via Amazon. |
| Mice BALB/cByJ | Charles River | Strain code 627 | |
| Mice C57BL/6 | Charles River | Strain code 664 | |
| No-toxic Latex Glue | Tear mender | Fabric & Leather Adhesive | Also available also via Amazon (ref. no. B001RQCTUU) |
| Punch Tool Hand Art Tool | Amazon | B07QPWNGBF | Saled by amazon as Leather Working Tools 1-25mm Round Steel Leather Craft Cutter Working for Belt Strap |
| PVC Binding Covers Transparent | Amazon | B078BNLSNP | Any transparent PVC sheet of ticknes between 0.150 mm to 0.180 mm is suitable |
| Self Adhesive Pad Sponge Double Coated Foam Tape | Amazon | B07RHDZ35J | Saled by amazon as 2 Rolls Double Sided Foam Tape, Super Strong White Mounting Tape Foam |
| Transparent seal stickers (20 mm diameter circles) | Amazon | B01DAA6X66 |
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