JoVE Journal > Biology
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Resultados
Discussion
Declarações
Acknowledgements
Materials
Referências
Tadução automática
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Biologia

Sığır Yumurtalık Korteks Doku Kültürü

Published: January 14, 2021
doi:
10.3791/61668
, , ,
1Department of Animal Science,University of Nebraska-Lincoln, 2Department of Animal Production, School of Agriculture,University of Jordan

Summary

Sığır yumurtalık korteksinin in vitro kültürü ve beslenme Merdiven adım diyetinin yumurtalık mikroçevrişi üzerindeki etkisi sunulmuştur. Yumurtalık korteks parçaları yedi gün boyunca kültürlendi ve steroidler, sitokinler ve folikül evreleri değerlendirildi. Merdiven-Adım diyet tedavisi, kültürde folikül ilerlemesine neden olan steroidogenezi artırmıştı.

Abstract

İlkel evreden antral evreye kadar folikül gelişimi, yumurtalık korteksi içinde somatik hücrelerden ve kümülüs hücre-oosit iletişiminden endokrin ve parakrin faktörleri içeren dinamik bir süreçtir. Yumurtalık mikroçevrişi ve çevredeki milieu üretilen sitokinler ve steroidler folikül ilerlemesini veya tutuklanmasını nasıl etkilediği hakkında çok az şey bilinmektedir. Yumurtalık korteksinin in vitro kültürü, foliküllerin bitişik stroma tarafından desteklenen normalleştirilmiş bir ortamda gelişmesini sağlar. Amacımız, sığır yumurtalık korteksinin in vitro kültürü ile beslenme Merdiven-Adım diyetinin yumurtalık mikroçevrişi (folikül gelişimi, steroid ve sitokin üretimi) üzerindeki etkisini belirlemekti. Bunu başarmak için, yumurtalık kortikal parçaları ergenlikten önce iki farklı besinsel olarak geliştirilmiş şemadan geçen düvelerden çıkarıldı: Kontrol (geleneksel beslenme gelişimi) ve Yaklaşık 0.5-1 mm3 parçaya kesilen Merdiven-Adım (gelişim sırasında beslenme ve kısıtlama). Bu parçalar daha sonra bir dizi yıkamadan geçirildi ve Waymouth’un kültür ortamını içeren bir kuyuya yerleştirilmiş bir doku kültürü kesici ucuna yerleştirildi. Yumurtalık korteksi günlük kültür medya değişiklikleri ile 7 gün boyunca kültürlendi. Ek tedavi olmaksızın beslenmenin etkilerini ve kültürün etkisini belirlemek için kültür öncesi ve sonrası folikül evre değişikliklerini belirlemek için histolojik kesitleme yapıldı. Korteks kültür ortamı steroidler, steroid metabolitler ve sitokinleri ölçmek için günlerce birikti. Yumurtalık mikroçevriminde artan steroid hormonları için eğilimler vardı, bu da Merdiven-Adım ve Kontrol yumurtalık korteks kültürlerinde folikül ilerlemesine izin sağladı. Yumurtalık korteks kültürü tekniği, yumurtalık mikroçevrinin daha iyi anlaşılmasını ve endokrin salgıdaki değişikliklerin hem in vivo hem de in vitro tedavilerden folikül ilerlemesini ve büyümesini nasıl etkileyebileceğini sağlar. Bu kültür yöntemi, doğurganlığı teşvik etmek için kadınlarda folikül ilerlemesini artırabilecek potansiyel terapötiklerin test edilmesi için de yararlı olabilir.

Introduction

Yumurtalık korteksi, folikül gelişiminin meydana geldiği yumurtalığın dış tabakasını temsil eder1. Başlangıçta geliştirme aşamasında tutuklanan ilkel foliküller, parakrin ve gonadotropin girişlerine dayanan birincil, ikincil ve daha sonra antral veya üçüncül foliküllerhalinegelecek şekilde etkinleştirilecektir 1,2,3,4. Yumurtalık içindeki fizyolojik süreçleri daha iyi anlamak için doku kültürü in vitro model olarak kullanılabilir, böylece kontrollü bir ortamın deneyler yapmasına izin verir. Birçok çalışma, yardımcı üreme teknolojisi, doğurganlık koruma ve yumurtalık kanseri5,6,7araştırmalarında yumurtalık doku kültürünü kullanmıştır. Yumurtalık doku kültürü, yumurtalık sağlığına ve Polikistik Over Sendromu (PKOS) 8,9,10,11gibi üreme bozukluklarının etiyolojisine zarar veren üreme toksinlerinin araştırılması için de bir model görevi görmüştür. Bu nedenle, bu kültür sistemi çok çeşitli uzmanlıklar için geçerlidir.

Kemirgenlerde, üreme biyolojisi deneylerinde tüm fetal veya perinatal gonadlar kullanılmıştır12,13,14,15. Bununla birlikte, daha büyük evcil hayvancılıktan gelen gonadlar, büyük boyutları ve potansiyel dejenerasyonları nedeniyle tüm organlar olarak kültürlenemez. Bu nedenle, sığır ve insan olmayan primat yumurtalık korteksi daha küçük parçalar halinde kesilir16,17,18. Birçok çalışma, evcil hayvancılıkta ve insan dışı primatlarda ilkel folikül başlatmada çeşitli büyüme faktörlerini (leri) incelemek için küçük yumurtalık korteks parçalarını kültüre 1,17,18,19. Yumurtalık korteks kültürünün kullanımı, 7 gün boyunca kültürlenen sığır ve primat kortikal parçalar için serum yokluğunda ilkel folikül inisiyonu göstermiştir20. Yang ve Fortune 2006 yılında fetal yumurtalık korteks kültür ortamını 10 gün boyunca bir dizi testosteron dozu ile tedavi etti ve testosteronun 10-7 M konsantrasyonunun folikül alımını, sağkalımını ve erken evre foliküllerin ilerlemesini artırdığını gözlemledi19. 2007 yılında, sığır fetüslerinden (5-8 aylık gebelik) yumurtalık korteks kültürlerini kullanan Yang ve Fortune, birincil ila ikincil folikül geçişinde Vasküler Endotel Büyüme Faktörü A (VEGFA) için bir rol bildirmektedir21. Ayrıca laboratuvarımız, VEGFA izoformlarının (anjiyojenik, antianjiyojenik ve bir kombinasyon) VEGFA’nın16’yabağladığı ana sinyal transdüksiyon reseptörü olan Kinaz etki alanı reseptörü (KDR) aracılığıyla farklı sinyal transdüksiyon yollarını nasıl düzenleyebileceğini göstermek için yumurtalık korteks kültürlerini kullanmıştır. Bu bilgiler, farklı VEGFA izoformlarının folikül ilerlemesini veya tutuklanmasını ortaya çıkarmak için sinyal yollarını nasıl etkilediğinin daha iyi anlaşılmasını sağladı. Birlikte ele alındığında, yumurtalık korteks parçalarının farklı steroidler veya büyüme faktörleri ile in vitro kültüring folikülogenezi düzenleyen mekanizmalar üzerindeki etkilerini belirlemek için değerli bir tahlil olabilir. Benzer şekilde, farklı beslenme rejimleri üzerinde geliştirilen hayvanlar, kadın üreme olgunluğunu etkileyen folikülogenezleri teşvik edebilecek veya inhibe edebilecek yumurtalık mikroçevranlıklarını değiştirmiş olabilir. Bu nedenle, mevcut elyazmasındaki amacımız sığır korteksi kültür tekniğini bildirmek ve daha önce açıklandığı gibi 13 aylıkken toplanan Kontrol veya Merdiven-Adım diyetlerinden beslenen düvelerden sığır korteksinin in vitro kültüründen sonra yumurtalık mikroçevrimlerinde farklılıklar olup olmadığınıbelirlemektir 16.

Bu nedenle, bir sonraki adımımız farklı beslenme diyetleri ile geliştirilen bu düvelerdeki yumurtalık mikroçevrini belirlemekti. Merdiven-Adım veya Kontrol diyeti ile beslenen düvelerden yumurtalık korteksini değerlendirdik. Kontrol düvelerine 84 gün boyunca 97,9 g/kg0,75 bakım diyeti önerildi. Merdiven-Adım diyeti, 84 gün boyunca 67.4 g / kg0.75 kısıtlı bir beslenme diyeti içeren 8 ayda başlatıldı. İlk 84 günden sonra, Control düveleri 97.9 g/kg0.75almaya devam ederken, Merdiven-Basamak sığır düvelerine 68 gün daha118.9 g/kg 0.75 teklif edildi, daha sonra kültür öncesi ve sonrası foliküler evrelerde ve morfolojide yapılan değişiklikleri inceledikleri için13 aylıkken ovaerektomi yapıldılar. Biz de steroidler, steroid metabolitler, kemokinler ve korteks medya içine salgılanan sitokinler farklılıklar için test. Steroidler ve diğer metabolitler, in vivo ve/veya in vitro olarak yapılan tedavilerden doku canlılığı ve üretkenliği üzerinde doğrudan bir etki olup olmadığını belirlemek için ölçüldü. Kültürden önce ve sonra yumurtalık mikroçevrinde meydana gelen değişiklikler, kültürden önce endokrin milieu ve folikülogenezin bir anlık görüntüsünü ve kültür sırasında kültür veya tedavinin folikül ilerlemesini veya tutuklanmasını nasıl etkilediğini sağladı.

Yumurtalıklar,16yaşında 13 aylık Kontrol ve Merdiven-Basamak düvelerinden IACUC prosedürlerine göre ABD Et Hayvanları Araştırma Merkezi’nde (USMARC) yumurtalıklar yapıldıktan sonra toplandı , kan ve diğer kirleticileri çıkarmak için steril fosfat tampon salin (PBS) ile% 0.1 antibiyotikle temizlendi, fazla doku kesilmiş ve 37°C23’te Nebraska-Lincoln Üniversitesi (UNL) Üreme Fizyolojisi laboratuvarı UNL’ye nakledildi. . UNL’de yumurtalık korteks parçaları küçük kare parçalar halinde kesildi (~0.5-1 mm3; Şekil 1) ve 7 gün kültürlü (Şekil 2). Histoloji, folikül evreleri16,24 (Şekil 3 ve Şekil4 ) ve fibrozis gösterebilecek hücre dışı matris proteinlerini belirlemek için kültürden önce ve sonra korteks kültürü slaytları üzerinde yürütülmüştür (Picro-Sirus Red, PSR; Şekil 5). Bu, in vivo beslenme rejimlerinin folikül evreleri üzerindeki etkisinin belirlenmesine izin verdi ve folikül evreleri ve folikül ilerlemesi üzerinde 7 günlük yumurtalık korteksinin karşılaştırılmasına izin verdi. Kültür boyunca, ortam günlük olarak toplandı ve değiştirildi (her gün medyanın yaklaşık% 70’i toplandı; 250 μL / kuyu) böylece günlük hormonlar / sitokinler / kemokinler günlük olarak değerlendirilebilir veya ortalama konsantrasyonlar elde etmek için gün içinde birikebilir. Androstenedione (A4) ve östrojen (E2) gibi steroidler 3 gün boyunca birikebilir ve radyoimmunoassay (RIA; Şekil 6) ve hayvan başına 4 günden fazla havuzlanmış ve Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi-Kütle Spektrometresi (HPLC-MS)24,25 (Tablo 1)ile test edilir. Sitokin dizileri yumurtalık korteks kültürüortamında sitokin ve kemokin konsantrasyonlarını değerlendirmek için kullanılmıştır (Tablo 2). Gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) test plakaları, daha önce gösterildiği gibi belirli sinyal iletim yolları için gen ekspresyonlarını belirlemek için yapılmıştır16. Tüm steroid, sitokin, folikül evresi ve histolojik belirteçler yumurtalık mikroçevroronment bir anlık sağlar ve bu mikroçevrenim “normal” veya “anormal” folikülogenez teşvik yeteneği hakkında ipuçları.

Protocol

Yumurtalıklar ABD Et Hayvanları Araştırma Merkezi16.’dan alınmıştır. Daha önce belirtildiği gibi16, tüm prosedürler ABD Et Hayvanları Araştırma Merkezi (USMARC) Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından Tarımsal Hayvanların Tarımsal Araştırma ve Öğretimde Bakımı ve Kullanımı kılavuzuna uygun olarak onaylanmıştır. Yumurtalıklar, işlendikleri ve kültürlendikleri Nebraska-Lincoln Üniversitesi Üreme Laboratuvarı’na getirildi. <p cl…

Representative Results

Bu sığır korteksi kültürü prosedürü, yumurtalığın küçük parçalarından çok çeşitli hormon, sitokin ve histoloji verilerini belirlemek için kullanılabilir. Hematoksilin ve eozin (H&E) gibi boyama, folikül evreleme yoluyla yumurtalık morfolojisini belirlemek için kullanılabilir16,23,31 (Şekil 3). Kısaca, foliküller, granüloza öncesi hücrelerin tek bir tabakası ile çevri…

Discussion

Bu yazıda açıklandığı gibi in vitro over korteks kültürünün faydası, foliküllerin folikülleri çevreleyen bitişik stroma ile normalleştirilmiş bir ortamda gelişmesidir. Somatik hücreler ve oosit bozulmadan kalır ve in vivo model olarak uygun hücreden hücreye iletişim vardır. Laboratuvarımız, 7 günlük bir kültür sisteminin yumurtalık korteksinin tedavisi için temsili folikülogenez ve steroidogenez verileri sağladığını tespit etti. Diğer yumurtalık doku kültürü protokolleri ya nisp…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu araştırma, Ulusal Gıda ve Tarım Enstitüsü 2013-67015-20965 tarafından ASC’ye, Nebraska Gıda Gıda Üniversitesi ASC’ye Rekabetçi Hibeler için desteklendi. Amerika Birleşik Devletleri Tarım Bakanlığı Hatch, ASC’ye NEB26-202/W3112 Katılım #1011127, Hatch-NEB ANHL Katılım #1002234 ASC’ye hibe. Nicel Yaşam Bilimleri Girişimi Yaz Doktora Sonrası Akademik Destek – CMS için yaz finansmanı için COVID-19 Ödülü.

Yazarlar, daha sonra mevcut makalede bu tekniğin doğruluğunda bir kavram kanıtı olarak kullanılan önceki bir yayında yumurtalıkları sağladığı için dr. Robert Cushman, ABD Et Hayvanları Araştırma Merkezi, Clay Center, NE’ye teşekkür etmek istiyor.

Materials

#11 Scapel Blade Swann-Morton  303 Scaple Blade
#21 Scapel Blade Swann-Morton  307 Scaple Blade
500mL Bottle Top Filter Corning 430514 Bottle Top Filter 0.22 µm pore for filtering medium
AbsoluteIDQ Sterol17 Assay Biocrates Sterol17 Kit Samples are sent off to Biocrates and steroid panels are run and results are returned 
Androstenedione Double Antibody RIA Kit MPBio 7109202 RIA to determine androstenedione from culture medium
Belgium A4 Assay Kit  DIA Source  KIP0451 RIA to determine androstenedione from culture medium
Bovine Cytokine Array Q3 RayBiotech QAB-CYT-3-1 Cytokine kit to determine cytokines from culture medium
cellSens Software Standard 1.3 Olympus 7790 Imaging Software
Insulin-Transferrin-Selenium-X Gibco ThermoFisher Scientific 5150056 Addative to the culture medium
Leibovitz's L-15 Medium Gibco ThermoFisher Scientific 4130039 Used for tissue washing on clean bench, and in the biosafety cabniet 
Microscope  Olympus SZX16 Disection microscope used for imaging tissue culture pieces 
Microscope Camera  Olympus DP71 Microscope cameraused for imaging tissue culture pieces 
Millicell Cell Culture Inserts 0.4µm, 12,mm Diameter Millipore Sigma PICM01250 Inserts that allow the tissue to rest against the medium without being submerged in it
Multiwell 24 well plate Falcon 353047 Plate used to hold meduim, inserts, and tissues
Petri dish 60 x 15 mm Falcon 351007 Petri dish used for washing steps prior to culture
Phosphate-Buffered Saline (PBS 1X) Corning 21-040-CV Used for tissue washing
SAS Version 9.3 SAS Institute  9.3 TS1M2 Statistical analysis software 
Thomas Stadie-Riggs Tissue Slicer Thomas Scientific 6727C10 Tissue slicer for preperation of thin uniform sections of fresh tissue
Waymouth MB 752/1 Medium Sigma-Aldrich W1625 Medium used for tissue cultures
DOWNLOAD MATERIALS LIST

Referências

  1. Braw-Tal, R., Yossefi, S. Studies in vivo and in vitro on the initiation of follicle growth in the bovine ovary. Journal of Reproduction and Fertility. 109, 165-171 (1997).
  2. Nilsson anEdson, M. A., Nagaraja, A. K., Matzuk, M. M. The mammalian ovary from genesis to revelation. Endocrine Reviews. 30 (6), 624-712 (2009).
  3. Fortune, J. E., Cushman, R. A., Wahl, C. M., Kito, S. The primordial to primary follicle transition. Molecular and Cellular Endocrinology. 163, 53-60 (2000).
  4. Ireland, J. J. Control of follicular growth and development. Journal of Reproduction and Fertility. 34, 39-54 (1987).
  5. Higuchi, C. M., Maeda, Y., Horiuchi, T., Yamazaki, Y. A simplified method for three-dimensional (3-D) ovarian tissue culture yielding oocytes competent to produce full-term offspring in mice. PLoS One. 10 (11), e0143114 (2015).
  6. Ramezani, M., Salehnia, M., Jafarabadi, M. Short term culture of vitrified human ovarian cortical tissue to assess the cryopreservation outcome: molecular and morphological analysis. Journal of Reproduction & Infertility. 18 (1), 162-171 (2017).
  7. McLaughlin, M., Telfer, E. Oocyte development in bovine primordial follicles is promoted by activin and FSH within a two-step serum-free culture system. Reproduction. 139 (6), 971-978 (2010).
  8. Stefansdottir, A., Fowler, P. A., Powles-Glover, N., Anderson, R. A., Spears, N. Use of ovary culture techniques in reproductive toxicology. Reproductive Toxicology. 49, 117-135 (2014).
  9. Bromfield, J. J., Sheldon, I. M. Lipopolysaccharide reduces the primordial follicle pool in the bovine ovarian cortex ex vivo and in the murine ovary in vivo. Biology of Reproduction. 88 (4), 1-9 (2013).
  10. Franks, S., Stark, J., Hardy, K. Follicle dynamics and anovulation in polycystic ovary syndrome. Humane Reproduction Update. 14 (4), 367-378 (2008).
  11. Desmeules, P., Devine, P. J. Characterizing the ovotoxicity of cyclophosphamide metabolites on cultured mouse ovaries. Toxicological Sciences. 90 (2), 500-509 (2006).
  12. Bott, R. C., McFee, R. M., Clopton, D. T., Toombs, C., Cupp, A. S. Vascular endothelial growth factor and kinase domain region receptor are involved in both seminiferous cord formation and vascular development during testis morphogenesis in the rat. Biology of Reproduction. 75, 56-67 (2006).
  13. Baltes-Breitwisch, M. M., et al. Neutralization of vascular endothelial growth factor antiangiogenic isoforms or administration of proangiogenic isoforms stimulates vascular development in the rat testis. Reproduction. 140 (2), 319-329 (2010).
  14. McFee, R. M., et al. Inhibition of vascular endothelial growth factor receptor signal transduction blocks follicle progression but does not necessarily disrupt vascular development in perinatal rat ovaries. Biology of Reproduction. 81, 966-977 (2009).
  15. Artac, R. A., et al. Neutralization of vascular endothelial growth factor antiangiogenic isoforms is more effective than treatment with proangiogenic isoforms in stimulating vascular development and follicle progression in the perinatal rat ovary. Biology of Reproduction. 81, 978-988 (2009).
  16. Abedal-Majed, M. A., et al. Vascular endothelial growth factor A isoforms modulate follicle development in peripbertal heifers independent of diet through diverse signal transduction pathways. Biology of Reproduction. 102 (3), 680-692 (2020).
  17. Wandji, S. A., Srsen, V., Voss, A. K., Eppig, J. J., Fortune, J. E. Initiation in vitro of bovine primordial follicles. Biology of Reproduction. 55, 942-948 (1996).
  18. Wandji, S. A., Srsen, V., Nathanielsz, P. W., Eppig, J. J., Fortune, J. E. Initiation of growth of baboon primordial follicles in vitro. Human Reproduction. 12 (9), 1993-2001 (1993).
  19. Yang, M. Y., Fortune, J. E. Testosterone stimulates the primary to secondary follicle transition in bovine follicles in vitro. Biology of Reproduction. 75, 924-932 (2006).
  20. Fortune, J. E., Kito, S., Wandji, S. A., Srsen, V. Activation of bovine and baboon primordial follicles in vitro. Theriogenology. 49, 441-449 (1998).
  21. Yang, M. Y., Fortune, J. E. Vascular endothelial growth factor stimulates the primary to secondary follicle transition in bovine follicles in vitro. Molecular Reproduction and Development. 74, 1095-1104 (2007).
  22. Barberino, R. S., Silva, J. R. V., Figueiredo, J. R., Matos, M. H. T. Transport of domestic and wild animal ovaries: a review of the effects of medium, temperature, and periods of storage on follicular viability. Biopreservation and Biobanking. 17 (1), 84-90 (2019).
  23. Summers, A. F., et al. Altered theca and cumulus oocyte complex gene expression, follicular arrest and reduced fertility in cows with dominant follicle follicular fluid androgen excess. PLoS One. 9 (10), e110683 (2014).
  24. Koal, T., Schmiederer, D., Pham-Tuan, H., Rohring, C., Rauh, M. Standardized LC-MS/MS based steroid hormone profile analysis. The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology. 129, 129-138 (2012).
  25. Poole, R. K., Brown, A. R., Pore, M. H., Pickworth, C. L., Poole, D. H. Effects of endophyte-infected tall fescue seed and protein supplementation on stocker steers: II. Adaptive and innate immune function. Journal of Animal Science. 97 (10), 4160-4170 (2019).
  26. Laronda, M., et al. Alginate encapsulation supports the growth and differentiation of human primordial follicles within ovarian cortical tissue. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 31 (8), 1013-1028 (2014).
  27. Silber, S. J., et al. A series of monozygotic twins discordant for ovarian failure: ovary transplantation (cortical versus microvascular) and cryopreservation. Human Reproduction. 23 (7), 1531-1537 (2008).
  28. Wiedemann, C., Zahmel, J., Jewgenow, K. Short-term culture of ovarian cortex pieces to assess the cryopreservation outcome in wild fields for genome conservation. BMC Veterinary Research. 9 (37), (2013).
  29. Baufeld, A., Vanselow, J. Increasing cell plating density mimics an early post-LH stage in cultured bovine granulosa cells. Cell and Tissue Research. 354 (3), 869-880 (2013).
  30. Shimizu, T., Miyamoto, A. Progesterone induces the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) 120 and Flk-1, its receptor, in bovine granulosa cells. Animal Reproduction Science. 102 (3-4), 228-237 (2007).
  31. Tepekoy, F., Akkoyunlu, G. The effect of FSH and activin A on Akt and MAPK1/3 phosphorylation in cultured bovine ovarian cortical strips. Journal of Ovarian Research. 9 (13), 1-9 (2016).
  32. Beck, K., Singh, J., Arshud Dar, M., Anzar, M. Short-term culture of adult bovine ovarian tissues: chorioallantoic membrane (CAM) vs. traditional in vitro culture systems. Reproductive Biology and Endocrinology. 16 (1), 21 (2018).
  33. Eppig, J. J. Oocyte control of ovarian follicular development and function in mammals. Reproduction. 122 (6), 829-838 (2001).
  34. Paczkowski, M., Silva, E., Schoolcraft, W. B., Krisher, R. L. Comparative importance of fatty acid beta-oxidation to nuclear maturation, gene expression, and glucose metabolism in mouse, bovine, and porcine cumulus oocyte complexes. Biology of Reproduction. 88 (5), 1-11 (2013).
  35. Raffel, N., et al. Is ovarian tissue transport at supra-zero temperatures compared to body temperature optimal for follicle survival?. In Vivo. 34 (2), 533-541 (2020).
  36. Duncan, F., et al. Ovarian tissue transport to expand access to fertility preservation: from animals to clinical practice. Reproduction (Cambridge, England). 152 (6), R201-R210 (2016).
  37. Liebenthron, J., et al. Overnight ovarian tissue transportation for centralized cryobanking: a feasible option. Reproductive BioMedicine Online. 38 (5), 740-749 (2019).
  38. Mohammed, B. T., Donadeu, F. X. Bovine granulosa cell culture. Epithelial Cell Culture: Methods and Protocols. , 79-87 (2018).
  39. Langbeen, A., et al. Effects of neutral red assisted viability assessment on the cryotolerance of isolated bovine preantral follicles. Journal of Assisted Reproduction Genetics. 31, 1727-1736 (2014).
  40. Higuchi, C. M., Maeda, Y., Horiuchi, T., Yamazaki, Y. A simplified method for three-dimensional (3-D) ovarian tissue culture yielding oocytes competent to produce full-term offspring in mice. PLoS One. 10 (11), e0143114 (2015).
  41. Yang, M. Y., Fortune, J. E. Changes in the transcriptome of bovine ovarian cortex during follicle activation in vitro. Physiological Genomics. 47, 600-611 (2015).

Tags

Bovine Ovarian CortexFollicle GrowthSteroidogenesisImmune MoleculesReproductive DisordersPolycystic Ovarian SyndromeOvarian MicroenvironmentIn Vitro Examination
check_url/pt/61668?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Citar este artigo
Sutton, C. M., Springman, S. A., Abedal-Majed, M. A., Cupp, A. S. Bovine Ovarian Cortex Tissue Culture. J. Vis. Exp. (167), e61668, doi:10.3791/61668 (2021).
Baixar citação
Reimpressões e Permissões

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image