परमाणु बल माइक्रोस्कोपी-इन्फ्रारेड स्पेक्ट्रोस्कोपी (एएफएम-आईआर) बैक्टीरियल अध्ययन के लिए एक शक्तिशाली मंच प्रदान करता है, जिससे नैनोस्केल संकल्प प्राप्त किया जा सके। दोनों, उपकोशिकीय परिवर्तनों का मानचित्रण (उदाहरण के लिए, सेल डिवीजन पर) के साथ-साथ रासायनिक संरचना (उदाहरण के लिए, दवा प्रतिरोध से उत्पन्न होने वाले) के तुलनात्मक अध्ययन बैक्टीरिया में एकल कोशिका स्तर पर आयोजित किए जा सकते हैं।
परमाणु बल माइक्रोस्कोपी-इन्फ्रारेड स्पेक्ट्रोस्कोपी (एएफएम-आईआर) एक उपन्यास संयोजन तकनीक है, जो भौतिक गुणों के एक साथ लक्षण वर्णन और नैनोस्केल संकल्प के साथ नमूने की रासायनिक संरचना को सक्षम करती है। आईआर के साथ एएफएम के संयोजन से, पारंपरिक आईआर की स्थानिक संकल्प सीमा को दूर किया जाता है, जिससे 20-100 एनएम का संकल्प प्राप्त किया जा सके। यह कई माइक्रोमीटर से छोटे नमूनों की जांच की ओर आईआर के नए अनुप्रयोगों की एक व्यापक सरणी के लिए दरवाजा खोलता है, पहले पारंपरिक आईआर माइक्रोस्कोपी के माध्यम से अप्राप्य । एएफएम-आईआर बैक्टीरियल अनुसंधान के लिए अत्यधिक अनुकूल है, जो एकल कोशिका और इंट्रासेलुलर स्तर पर स्पेक्ट्रल और स्थानिक दोनों जानकारी प्रदान करता है। बढ़ती वैश्विक स्वास्थ्य चिंताओं और जीवाणु संक्रमण के बारे में प्रतिकूल भविष्य की भविष्यवाणी, और विशेष रूप से, रोगाणुरोधी प्रतिरोध के तेजी से विकास, एक अनुसंधान एकल कोशिका और उपकोशिक स्तर पर जांच फेनोटाइपिक में सक्षम उपकरण के लिए एक तत्काल जरूरत पैदा की है । एएफएम-आईआर एक जीवाणु की रासायनिक संरचना के विस्तार लक्षण वर्णन को सक्षम करके, इस आवश्यकता को संबोधित करने की क्षमता प्रदान करता है। यहां, हम बैक्टीरियल अध्ययन की ओर एएफएम-आईआर के अनुप्रयोग के लिए नमूना तैयार करने और एकल स्पेक्ट्रा और मैपिंग मोडलि मोडलि के डेटा अधिग्रहण के लिए एक पूर्ण प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं।
बैक्टीरिया एकल कोशिका प्रोकैरियोटिक जीव होते हैं, जो विभिन्न आकारों और आकारों में होते हैं, आमतौर पर कई सौ नैनोमीटर से माइक्रोमीटर की सीमा में होते हैं। वे विभिन्न आवासों में मौजूद हैं और जीवन के अस्तित्व के लिए आवश्यक हैं। मानव शरीर के भीतर, पेट में मौजूद अधिकांश बैक्टीरिया हानिरहित होते हैं और कई वास्तव में फायदेमंद होते हैं1। हालांकि, कई जीवाणु प्रजातियां रोगजनक हैं और संक्रामक रोगों की एक श्रृंखला का कारण बनती हैं। बैक्टीरियल संक्रमण सेप्सिस और सेप्टिक शॉक के विकास का कारण बन सकता है: एक जीवन-धमकी वाली स्थिति, जिसके परिणामस्वरूप शरीर की प्रतिक्रिया संक्रमण2के लिए होती है। सेप्सिस एक वैश्विक प्रमुख स्वास्थ्य खतरा है, जिसमें दुनिया भर में उच्च व्यापकता और गंभीर मृत्यु दर है । अकेले 2017 में, दुनिया भर में सेप्सिस के अनुमानित 50 मिलियन मामले दर्ज किए गए थे, जिनमें से 11 मिलियन जिनके परिणामस्वरूप मृत्यु (लगभग 20%)2। इसके अलावा, रोगी के जीवित रहने की संभावना में कमी, देरी से चिकित्सा के कारण, प्रति घंटा तरीके से3,4में होने के लिए दिखाया गया था ।
बैक्टीरियल इन्फेक्शन का इलाज एंटीबायोटिक्स से किया जाता है। जीवाणु रक्तप्रवाह संक्रमण (BSIs) के संभावित परिणामों की गंभीरता, एक साथ रोगाणुरोधी चिकित्सा की त्वरित दीक्षा के स्पष्ट महत्व के साथ, तत्काल एंटीबायोटिक दवाओं प्रशासन की आवश्यकता का संकेत । हालांकि, नैदानिक अभ्यास (जैसे, रक्त संस्कृति) में उपयोग किए जाने वाले वर्तमान नैदानिक दृष्टिकोणों के लिए अपेक्षाकृत लंबे समय की आवश्यकता होती है, एंटीबायोटिक्स प्रशासन अक्सर सकारात्मक बीएसआई निदान5से पहले होता है। इस कारक से एंटीबायोटिक दवाओं का व्यापक उपयोग होता है, जो कृषि जैसे अन्य क्षेत्रों में अत्यधिक एंटीबायोटिक उपयोग के साथ-साथ एंटीमाइक्रोबियल प्रतिरोध (एएमआर)6,7के विकास के प्रति गंभीर विकासवादी दबाव पैदा करता है। एएमआर वर्तमान में सबसे अहम वैश्विक स्वास्थ्य मुद्दों में से एक है7,8 और, 2050 तक, मृत्यु9का प्रमुख कारण बनने की भविष्यवाणी की गई है। प्रतिरोध का विकास, एएमआर उपभेदों के प्रसार के साथ एक खतरनाक गति से हो रहा है7,8,9 और अधिक, अब तक, नए एंटीबायोटिक दवाओं की खोज की दर10। नई प्रतिरोधी फेनोटाइप लगातार दुनिया भर में उभर रहे हैं, जबकि
एएमआर से संबंधित परिवर्तनों को समझने की दिशा में समर्पित अनुसंधान अक्सर धीमी गति से और उपलब्ध दृष्टिकोण11द्वारा सीमित है . इसके अलावा, आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले तरीके, जैसे पॉलीमरेज चेन रिएक्शन (पीसीआर) और पूरे जीन सीक्वेंसिंग (डब्ल्यूजीएस), केवल जीनोटाइपिक बदलावों पर ध्यान केंद्रित करते हैं। ये प्रतिरोध11के तंत्र को प्रकट करने के लिए पर्याप्त नहीं हैं, एक अनुसंधान उपकरण के लिए एक तत्काल आवश्यकता का संकेत बैक्टीरिया की रासायनिक संरचना को समझने के लिए सक्षम करने के लिए ।
इन्फ्रारेड स्पेक्ट्रोस्कोपी (आईआर) नमूने का आणविक लक्षण वर्णन प्रदान करता है और इस प्रकार फेनोटाइपिक बैक्टीरियल जांच के लिए एक आशाजनक उम्मीदवार है। 12 शुरुआती अनुप्रयोगों के बाद सेइसकेउपयोग के बहुत से उदाहरण13,14साहित्य में प्रदर्शित किए गए थे । इनमें जीनस15, प्रजाति 16और स्ट्रेन 17,18 स्तर पर बैक्टीरिया की फेनोटाइपिक आधारित पहचान शामिल है। हालांकि, पारंपरिक आईआर का स्थानिक संकल्प तरंगदैर्ध्य विवर्तन स्थानिक संकल्प सीमा19के कारण कई माइक्रोन तक सीमित है। चूंकि अधिकांश बैक्टीरिया का आकार उस सीमा से नीचे है (उदाहरण के लिए, स्टेफिलोकोकस ऑरियस ≈ 400 एनएम व्यास में), पारंपरिक आईआर एकल-कोशिका या इंट्रासेलुलर स्तर पर जांच के लिए लागू नहीं होता है।
स्थानिक संकल्प सीमा हाल ही में परमाणु बल माइक्रोस्कोपी (AFM-IR) के साथ आईआर स्पेक्ट्रोस्कोपी के संयोजन से दूर किया गया था । इस उदाहरण में, 19,20, 21, 22सामग्री के थर्मल विस्तार के माध्यम से परोक्ष रूप से आईआर अवशोषण का पतालगाया जाताहै। संक्षेप में, आईआर विकिरण के अवशोषण के परिणामस्वरूप स्थानीय तापमान में वृद्धि होती है। इसे सीधे23 या एएफएम कैंटिलीवर जांच के दोलन के माप के माध्यम से मापा जा सकता है, जिसके परिणामस्वरूप आईआर अवशोषण20,21द्वारा बनाए गए बल आवेग के परिणामस्वरूप। संयोजन AFM-IR तकनीक 20 एनएम आ स्थानिक संकल्प प्राप्त करने के लिए सक्षम बनाता है, एक नमूना (AFM) और उसके रासायनिक संरचना (AFM-IR) के स्थानीय भौतिक गुणों के बारे में एक साथ जानकारी प्रदान करते हैं । दोनों का संग्रह, चयनित स्थानों से एकल स्पेक्ट्रा और एक चुने हुए क्षेत्र के भीतर चयनित तरंग मूल्यों की तीव्रता का मानचित्रण संभव है।
एएफएम-आईआर के प्राप्त स्थानिक संकल्प को ध्यान में रखते हुए, यह स्पष्ट है कि यह तकनीक एकल जीवाणु कोशिका और उनके इंट्रासेलुलर संरचना24की रासायनिक/फेनोटाइपिक जांच की संभावना को खोलती है । अब तक, एकल बैक्टीरियाके लिए एएफएम-आईआर के आवेदन के कई उदाहरण साहित्य19, 20, 21,22, 25,26,27,28में प्रदर्शित किए गए थे। इनमें एकल स्पेक्ट्रल विश्लेषण19,21,22 और उपकोशिकीय स्तर19, 22,25, 26,27,28पर मानचित्रण शामिल है । उदाहरण के लिए, इंट्रासेलुलर लिपिड वेसिकल्स27 और वायरस28 को एकल जीवाणु के भीतर पता लगाने की क्षमता का वर्णन किया गया है । ये परिणाम एकल बैक्टीरिया और चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक रोगजनकों19के नैनोस्केल अध्ययन के लिए एएफएम-आईआर की उपयोगिता प्रदर्शित करते हैं।
इसलिए, हम मल्टीलेयर, मोनोलेयर और सिंगल सेल बैक्टीरियल नमूनों के एएफएम-आईआर डेटा के लिए एक नमूना तैयारी और संग्रह विधि प्रस्तुत करते हैं। यहां वर्णित प्रोटोकॉल बैक्टीरिया22 की विभिन्न प्रजातियों और उनकी रासायनिक संरचना में परिवर्तन का अध्ययन करने के लिए लागू किया गया था । विशेष रूप से, वैकोमाइसिन प्रतिरोध और डैप्टोमाइसिन गैर-संवेदनशीलता के वीवो विकास में एस ऑरियस19के नैदानिक जोड़े में जांच की गई थी। दोनों, वैनोमाइसिन आंतरायिक प्रतिरोध और डैप्टोमाइसिन गैर-संवेदनशीलता एस ऑरियस (वीज़ा और डीपीआर) में अपेक्षाकृत हाल ही में उभरा, बढ़ते उपयोग और क्लीनिकों के लिए इन एंटीबायोटिक दवाओं की शुरूआत के बाद, एक महत्वपूर्ण चिकित्सा समस्या का गठन। इसके अलावा, विशेष रूप से, डैप्टोमाइसिन गैर-संवेदनशीलता का तंत्र अभी भी मायावी बना हुआ है, जो वैकल्पिक दवा विकास19,29को बाधित करता है। प्रस्तुत प्रोटोकॉल एकल बैक्टीरिया के विश्वसनीय AFM-IR स्पेक्ट्रा के प्रावधान पर केंद्रित है, जो आगे केममेट्रिक दृष्टिकोण की एक किस्म का उपयोग कर विश्लेषण किया जा सकता है, प्रयोगात्मक उद्देश्यों के अनुसार । इसके अतिरिक्त इसमें मैपिंग दृष्टिकोण शामिल है, जो इंट्रा-सेलुलर अध्ययनों के लिए लागू होता है।
उनकी रासायनिक संरचना के संदर्भ में जैविक नमूनों की एक विस्तृत श्रृंखला के लक्षण वर्णन के लिए आईआर स्पेक्ट्रोस्कोपी की उपयोगिता अच्छी तरह से स्थापित है। पिछले एक दशक में, आईआर स्पेक्ट्रोस्कोपी बैक्टीरियल अध्ययन 12 , 13 ,14,15,16,17के लिए एक आशाजनक उपकरण के रूप मेंउभराहै । यह माइक्रोबायोलॉजी के क्षेत्र में पर्याप्त रुचि को आकर्षित करने के लिए जारी है, कुछ तकनीकों में से एक के रूप में रासायनिक संरचना के माध्यम से एक फेनोटाइपिक लक्षण वर्णन को सक्षम करने । इस संदर्भ में, पारंपरिक FTIR माइक्रोस्कोपी की प्रमुख खामी सीमित स्थानिक संकल्प में निहित है, एकल कोशिका और बैक्टीरिया के उपकोशिकीय अध्ययन को रोकने । वास्तव में, बैक्टीरिया का छोटा आकार न केवल आईआर के लिए, बल्कि अधिकांश तकनीकों के लिए एक बाधा का प्रतिनिधित्व करता है। इस प्रकार, बैक्टीरिया के एकल कोशिका और उपकोशिकीय अध्ययनों के लिए उपलब्ध अनुसंधान उपकरण काफी सीमित हैं। आईआर के साथ एएफएम का संयोजन आईआर स्पेक्ट्रोस्कोपी की स्थानिक संकल्प सीमा को दूर करने में सक्षम बनाता है, जो रासायनिक संरचना की नैनोस्केल जांच में सक्षम बैक्टीरियल अनुसंधान के लिए एक उपन्यास उपकरण प्रदान करता है।
तकनीक एकल सेल अध्ययन तक ही सीमित नहीं है और एक नमूनों की एक किस्म की जांच करने के लिए अनुमति देता है, मोटाई में लेकर । निस्संदेह, स्वच्छ, और सावधान नमूना तैयारी उच्च गुणवत्ता वाली छवियों को प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है। यहां प्रोटोकॉल विभिन्न बैक्टीरिया(चित्रा 1)के मल्टीलेयर, मोनोलेयर और/या एकल कोशिका नमूनों को तैयार करने की विधि प्रदान करता है । तैयार नमूना प्रारंभिक बैक्टीरियल लोड, धोने के बाद कमजोर पड़ने के साथ-साथ सब्सट्रेट पर और कमजोर पड़ने सहित कई कारकों पर निर्भर करता है। धुले हुए छर्रों को कमजोर करने के बाद प्राप्त नमूने की मात्रा और सब्सट्रेट पर बयान से पहले आम तौर पर कई नमूनों की तैयारी की अनुमति देता है। इसलिए, सब्सट्रेट पर नमूने का वांछित वितरण प्राप्त करने के लिए, अक्सर नमूनों की एक श्रृंखला तैयार करना फायदेमंद होता है, जिसमें उनके कमजोर पड़ने की कमी होती है। उपकोशिकीय इमेजिंग के बजाय एएफएम-आईआर स्पेक्ट्रा के संग्रह के उद्देश्य से अध्ययनों के लिए, सिग्नल की तीव्रता बढ़ाने के लिए नमूने की मात्रा (उदाहरण के लिए, मोनोलेयर से मल्टीलेयर तक) को संशोधित करना फायदेमंद हो सकता है।
नमूना तैयार करने में एक और महत्वपूर्ण पहलू मध्यम अवशिष्टों को उचित रूप से हटाना है। चयनित नमूना खेती विधियों के आधार पर, नमूना या तो तरल माध्यम से या एक आगर प्लेट से एकत्र किया जाता है। दोनों ही मामलों में, मध्यम अवशिष्ट नमूने में मौजूद होने की संभावना है, हालांकि आगर प्लेटों से संग्रह पर बहुत कम हद तक। चूंकि बैक्टीरियल ग्रोथ मीडिया में विभिन्न जैविक घटकों की बहुतायत होती है, इसलिए माध्यम को उचित रूप से हटाना सुनिश्चित करना महत्वपूर्ण है। हम आगर प्लेट नमूनों के लिए अल्ट्रापुरे पानी के साथ तीन वॉश और मध्यम से एकत्र नमूनों के लिए कम से कम चार वॉश की सलाह देते हैं। यदि आवश्यक हो तो वॉश की संख्या बढ़ाई जा सकती है; हालांकि, विभिन्न नमूनों के बीच तुलना के लिए, इसे नमूनों के बीच सुसंगत रखना महत्वपूर्ण है। प्रदर्शित प्रोटोकॉल फॉस्फेट बफर सॉल्यूशन (पीबीएस) या नमकीन जैसे सॉल्वैंट्स के बजाय पानी का उपयोग करता है। पीबीएस और नमकीन दोनों ही हवा सुखाने पर क्रिस्टल के गठन के लिए नेतृत्व करते हैं, जो बैक्टीरिया को नुकसान पहुंचा सकते हैं । इसके अलावा, दोनों तीव्र आईआर बैंड का एक स्रोत हैं, PBS के साथ, विशेष रूप से, फिंगरप्रिंट क्षेत्र में कई बैंड युक्त । खारा या PBS के उपयोग के लिए क्षमता की कमी, वर्तमान में तकनीक के लिए एक महत्वपूर्ण सीमा का प्रतिनिधित्व करता है । आमतौर पर, धोने के लिए पानी का उपयोग बैक्टीरिया पर कोई विनाशकारी प्रभाव नहीं डालता है; हालांकि, देखभाल की जानी चाहिए, और यदि संभव हो, तो पानी के संपर्क का समय सीमित होना चाहिए। यदि नमूना तैयारी प्रोटोकॉल को धोने के चरण में रोके जाने की आवश्यकता है, तो पानी को हटाने के बाद नमूना को पेलेटाइज्ड रूप में छोड़ने की सिफारिश की जाती है। यह चने-नकारात्मक बैक्टीरिया के लिए विशेष महत्व रखता है, जिसमें पतले सेल की दीवार होती है क्योंकि वे टूटने की अधिक संभावना होती है।
उचित और उच्च गुणवत्ता वाले एएफएम-आईआर डेटा सुनिश्चित करने के लिए, डेटा संग्रह प्रोटोकॉल में कई पहलू महत्वपूर्ण महत्व के हैं। सबसे पहले, पृष्ठभूमि का सही संग्रह डेटा अधिग्रहण के लिए आवश्यक है । विशेष रूप से, पृष्ठभूमि संग्रह के साथ-साथ पृष्ठभूमि और नमूना संग्रह के बीच स्थिर आर्द्रता के स्तर का रखरखाव आवश्यक है। यह सुनिश्चित करने के लिए, हम नाइट्रोजन के साथ उपकरण मिटाने और आर्द्रता के स्तर को बनाए रखने की सलाह देते हैं जो 25% से अधिक नहीं है। मिटाने की कमी विशेष रूप से उच्च आर्द्रता वाले स्थानों में एक महत्वपूर्ण सीमा लागू कर सकती है। दूसरे, आईआर स्पॉट के उचित अनुकूलन के महत्व पर प्रकाश डाला जाना चाहिए । सर्वोत्तम परिणामों के लिए, बैंड मैक्सिमा की स्थिति के बारे में एक प्राथमिकताओं का ज्ञान फायदेमंद हो सकता है। उदाहरण के लिए, जीवाणु गोली के एक पारंपरिक आईआर स्पेक्ट्रम का उपयोग नमूने से अपेक्षित बैंड की स्थिति निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है। यदि यह एक वैकल्पिक दृष्टिकोण के रूप में प्राप्त करना संभव नहीं है, तो उपयोगकर्ता साहित्य में उपलब्ध आईआर स्पेक्ट्रा का उपयोग कर सकता है या एक बैंड स्थिति का उपयोग करके अनुकूलन शुरू कर सकता है जो जीवाणु में उम्मीद करना उचित है (उदाहरण के लिए, अमेद मैं और अमीद द्वितीय)। तीसरा, डेटा संग्रह के लिए, सावधान शक्ति चयन (एक अच्छा एस/एन अनुपात प्राप्त करने की अनुमति) के महत्व को उजागर करना महत्वपूर्ण है, क्योंकि इसका विनाशकारी प्रभाव हो सकता है । सलाह दी शक्ति नमूना की मोटाई पर निर्भर करता है, किसी न किसी मार्गदर्शन के साथ साधन मैनुअल31में उपलब्ध है । हम एएफएम छवि के संग्रह द्वारा नमूना पोस्ट-माप की स्थिति का अनुभवजन्य रूप से परीक्षण करने की सलाह देते हैं, क्योंकि इससे किसी भी विनाशकारी प्रभाव का पता चलेगा। इसके अलावा, एएफएम-आईआर स्पेक्ट्रा के संग्रह से पहले और बाद में उसी क्षेत्र से एएफएम छवियों का संग्रह एक अच्छी पुष्टि के रूप में कार्य करता है कि कोई बहाव नहीं हुआ है और स्पेक्ट्रा वास्तव में सेल में चयनित बिंदु से उत्पन्न होता है। चयनित तरंगमान्य मूल्यों पर आईआर तीव्रता की लगातार इमेजिंग के माध्यम से इमेजिंग मोडलि को लागू करते समय बहाव की संभावना विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। इसका एक उदाहरण चित्र 5में दर्शाया गया है . चित्रित क्षेत्र को प्रयोग की शुरुआत में परिभाषित किया गया था और सभी तरंगमान्य मूल्यों के अनुरूप होना चाहिए। हालांकि, लगभग 40 मिनट के प्रत्येक मानचित्र के अधिग्रहण समय के साथ प्रत्येक एएफएम ऊंचाई (और इसी आईआर वेवरनंबर तीव्रता) छवि के बीच एक स्पष्ट बहाव दिखाई देता है। इसके कारण, इमेजिंग डेटा एकत्र करने वाले उपयोगकर्ताओं के लिए, हम हमेशा ब्याज के नमूने से थोड़ा बड़ा क्षेत्र का चयन करने की सलाह देते हैं, यह सुनिश्चित करने के लिए कि बहाव के अस्तित्व पर भी, ब्याज का नमूना छवि क्षेत्र के भीतर रहेगा।
प्रोटोकॉल की संभावित सीमाओं में ऊपर वर्णित शारीरिक समाधानों (जैसे, खारा या पीबीएस) में हाइड्रेटेड राज्य में डेटा एकत्र करने की क्षमता की कमी शामिल है। इसके अलावा, विशेष रूप से उच्च आर्द्रता क्षेत्रों में, अक्सर नाइट्रोजन शुद्ध की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, प्रोटोकॉल छोटे संरचनाओं के लिए इसके उपयोग की संभावना को छोड़कर, आकार में १०० एनएम तक जीवों की जांच करने में सक्षम बनाता है । हालांकि यह एक अलग लेजर का उपयोग कर दूर किया जा सकता है (जैसे, क्वांटम झरना लेजर 20 एनएम के स्थानिक संकल्प को प्राप्त करने की अनुमति), यह भी सीमित स्पेक्ट्रल रेंज के साथ जुड़ा हुआ है और साथ ही शोर अनुपात के लिए एक अच्छा संकेत प्राप्त करने में कठिनाइयों । अंत में, नरम सतहों की जांच करने से सतह का ठीक से पता नहीं लगाने और संपर्क के बिंदु से परे आगे बढ़ने के साथ एक चुनौती पेश हो सकती है, जब तक टूटना नहीं होता है। हालांकि यह आम तौर पर बैक्टीरियल नमूनों के साथ एक मुद्दा नहीं है, यह नरम नमूनों के माप पर हो सकता है । ऐसे मामलों में, नमूने के निकट सब्सट्रेट की साफ सतह पर संलग्न होने का प्रयास करने की सिफारिश की जाती है।
वर्णित प्रोटोकॉल का उपयोग कई प्रकार के जीवाणु अनुसंधान के लिए किया जा सकता है, जिसमें विभिन्न नमूनों के साथ-साथ उपकोशिकीय परीक्षा के बीच तुलनात्मक अध्ययन शामिल हैं। अनुसंधान के उद्देश्य के आधार पर एकल स्पेक्ट्रा और इमेजिंग तौर-तरीकों35के लिए केमोमेट्रिक दृष्टिकोणों का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण किया जा सकता है। इसके अलावा, प्रोटोकॉल को निर्धारण के अलावा अन्य जैविक सामग्री (जैसे कवक, खमीर, कोशिकाओं, आदि) में आवेदन के लिए भी संशोधित किया जा सकता है।
The authors have nothing to disclose.
हम उनके समर्थन के लिए ब्रूकर को स्वीकार करना चाहेंगे । इस काम को मोनाश यूनिवर्सिटी ने महिला सफलता अनुदान (के कोचन) को आगे बढ़ाने का समर्थन किया । A.Y.P एक ऑस्ट्रेलियाई राष्ट्रीय स्वास्थ्य और चिकित्सा अनुसंधान परिषद व्यवसायी फैलोशिप (APP1117940) से समर्थन स्वीकार करते हैं । यह काम एक ऑस्ट्रेलियाई अनुसंधान परिषद डिस्कवरी परियोजना DP180103484 द्वारा वित्त पोषित किया गया था । हम श्री फिनले शंक्स को उनके सहायक समर्थन और सुश्री ज़ेनिया कोस्तौलिया को नमूनों के साथ उनकी तकनीकी सहायता के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं ।
AFM metal specimen disc | PST ProSciTech Pty Ltd | GA530-15 | Recommended 15 mm |
Anasys AFM-IR nanoIR2 | Anaysys Instruments | 0 | model: nanoIR2 |
Contact mode NIR2 Probes for nanoIR 2 | Bruker / Anasys Instruments | – | Model: Model: PR-EX-NIR2 |
Heraeus Pico 17 Microcentrifuge | Thermo Scientific | – | – |
Matlab | Mathworks Inc | – | Multivariate data analysis software |
Micro-centrifuge tubes, 1.5 mL | Heathrow Scientific | HEA4323 | Can be replaced with any other micro-centrifuge tube |
NanoIR 2 instrument | Bruker / Anasys Instruments | – | – |
PLS toolbox | Mathworks Inc | – | GUI for Matlab |
Selected bacterial medium (e.g. HBA Columbia Plates) | Thermo Fisher | PP2001 | Provided type of medium is an example and can be replaced by others, depending on the type of experiment |
Selected bacterial strain | – | – | The source depends on the aim of research (patient isolates, ATCC strains, etc.) |
Substrate (e.g. Raman grade CaF2) | Crystran | CAFP13-2R | Recommended size: 13 mm Ø x 2.0 mm |
Tip pipette 1000 µl | Axygen | T-1000-B | – |
Tip pipette 200 µl | Axygen | T-200-C | – |
Tip pipette 0.5-10 µl | Axygen | T-300-R | – |
Ultrapure water | – | – | – |