卵巣組織における細菌の特性評価と機能予測
Summary
免疫組織化学染色と16SリボソームRNA遺伝子(16S rRNA遺伝子)シーケンシングを行い、癌性および非癌性卵巣組織の細菌を発見し、その場で区別した。バクテリアの組成と機能の違いは、未観測状態の再構築によるBugBaseおよび系統的なコミュニティの調査(PICRUSt)を用いて予測した。
Abstract
「無菌」の女性の上部生殖管の理論は、細菌検出の進歩のためにますます反対に遭遇しています。しかし、卵巣に細菌が含まれているかどうかはまだ確認されていません。本明細書では、卵巣組織における細菌を検出する実験が導入された。我々は、癌群の卵巣癌患者と対照群の非癌性患者を選んだ。16S rRNA遺伝子シーケンシングは、卵巣組織の細菌を癌および対照群と区別するために使用された。さらに、BugBaseおよびPICRUStを用いて、同定された細菌の機能組成を予測した。近年、多くの臓器が細菌を収容することが証明されているので、この方法は他の内臓や組織にも使用することができます。内臓および組織における細菌の存在は、科学者が癌および正常組織を評価するのに役立ち、癌の治療に役立つ可能性がある。
Introduction
近年、腎臓、脾臓、肝臓、卵巣1、2などの腹部固形内臓内に細菌の存在を証明する記事が増えている。Gellerら.膵臓腫瘍に細菌が見つかり、これらの細菌は化学療法薬2であるゲムシタビンに耐性があった。S. マンフレド・ヴィエイラら. エンテロコッカスガリナルムはリンパ節、肝臓および脾臓に移植可能であり、自己免疫を駆動することができると結論付けた。
子宮頸部は防御体としての役割を果たすため、子宮、卵管、卵巣を含む上部の女性生殖管内の細菌は最小限に研究されてきた。しかし、近年、いくつかの新しい理論が確立されています。細菌は、月経周期の間に、ムチン4,5の変化により子宮腔にアクセスできる。さらに、ツェルボマノラキスらは、子宮が卵管と共に、卵巣の内分泌系によって制御される蠕動性ポンプであることを確認し、この配置により細菌が子宮内膜、卵管、および卵巣6に入ることを可能にする。
細菌検出法の開発により、上部の生殖管はもはや謎ではありません。Verstraelenら.バーコード付き対端シーケンシング法を用いて、16S RNA遺伝子7のV1-2超可変領域を標的にして子宮細菌を発見した。Fangら.子宮内膜ポリープ患者にバーコードシーケンシングを採用し、多様な子宮内細菌8の存在を明らかにした。さらに、16S RNA遺伝子を用いることによって、Miles et al.と Chenら.それぞれ5,9 サルピンゴ卵巣摘出術と子宮摘出術を受けた女性の生殖器系に細菌が見つかった。
近年、腫瘍組織の細菌が注目を集めています。Banerjeeら.マイクロバイオームシグネチャが卵巣癌患者とコントロール10の間で異なっていることを発見した。ノキシナトロナムシビリカムは腫瘍期に関連しており、卵巣癌11の診断にはメサノサルシナ・バクオラタが用いられる。卵巣癌に加えて、胃、肺、前立腺、乳房、子宮頸部、および子宮内膜などの他の癌は、細菌12、13、14、15、16、17、18と関連することが証明されている。Pooreらは、初期段階の癌スクリーニング19を予見して、微生物に基づく腫瘍学診断の新しいクラスを提案した。本プロトコルでは、これら2つの組織における細菌の組成と機能を比較することにより、癌性と正常な卵巣組織の違いを調べた。
免疫体化学染色および16S rRNA遺伝子シーケンシングを行い、卵巣内の細菌の存在を確認した。癌性および非癌性卵巣組織における卵巣細菌の差異および予測機能を研究した。結果は、卵巣組織における細菌の存在を示した。 アノキシナトロナムシビリカム と メサノサルシナ・バクオラタ は、それぞれ卵巣癌の段階および診断に関連していた。両群に存在していた46個の有意に異なるKEGG経路を比較した。
Protocol
Representative Results
Discussion
卵巣癌は女性の生殖能力に顕著な影響を及ぼす 25.ほとんどの卵巣癌患者は後期段階で診断され、5年生存率は30%未満である18.肝臓、膵臓、脾臓を含む腹部固形内臓の細菌の確認が発表されている。子宮頸部が2、3、4、5を囲んでいないために、上の女性の生殖管に細菌が存在することが起こる。<sup…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は、中国西安交通大学第一付属病院臨床研究賞(XJTU1AF-2018-017、XJTU1AF-CRF-2019-002)、陝西省科学技術部自然科学の主要基礎研究プロジェクト(2018JM7073、 2017ZDJC-11)、陝西省科学技術部の主要研究開発プロジェクト(2017ZDXM-SF-068、2019QYPY-138)、陝西省共同技術イノベーションプロジェクト(2)017XT-026、2018XT-002)、西安社会開発誘導計画の医学研究プロジェクト(2017117SF/YX011-3)。資金提供者は、研究デザイン、データ収集と分析、出版の決定、原稿の作成に何の役割も持っていませんでした。
西安交通大学第一付属病院婦人科の同僚がサンプル収集に貢献してくれたことに感謝します。
Materials
| 2200 TapeStation Software | Agilgent United States |
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| AmpliSeq for Illumina Library Prep, Indexes, and Accessories | Illumina | ||
| Image-pro plus 7 | Media Cybernetics | ||
| Leica ASP 300S | Leica Biosystems Division of Leica Microsystems | ||
| Leica EG 1150 | Leica Biosystems Division of Leica Microsystems | ||
| Leica RM2235 | Leica Biosystems Division of Leica Microsystems | ||
| LPS Core monoclonal antibody, clone WN1 222-5 | Hycult Biotech | ||
| Mag-Bind RxnPure Plus magnetic beads | Omega Biotek | M1386-00 | |
| Mag-Bind Universal Pathogen 96 Kit | Omega Biotek | M4029-01 | |
| MiSeq | Illumina | SY-410-1003 | |
| Silva database | Max Planck Institute for Marine Microbiology and Jacobs University | ||
| the QuantiFluor dsDNA System | Promega | E2670 | |
| Trimmomatic | Björn Usadel | ||
| ZytoChem Plus (HRP) Anti-Rabbit (DAB) Kit | Zytomed Systems | HRP008DAB-RB |
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