Ma souris est-elle enceinte? Évaluation par ultrasons à haute fréquence
Summary
Les ultrasons à haute résolution peuvent aider à rationaliser les expériences nécessitant des souris enceintes chronométré en déterminant l’état de la grossesse, l’âge gestationnel et les pertes de grossesse. Présenté ici est un protocole pour illustrer des méthodes pour évaluer des grossesses de souris aussi bien que des pièges potentiels (artefacts d’image) qui peuvent imiter la grossesse.
Abstract
La souris est le modèle animal mammifère de choix pour de nombreuses maladies humaines et processus biologiques. La biologie du développement exige souvent que les souris enceintes étagés déterminent les processus en évolution à divers moments. De plus, l’élevage optimal et efficace de souris modèles nécessite une évaluation des grossesses chronométré. Le plus souvent, les souris sont accouplées pendant la nuit et la présence d’un bouchon vaginal est déterminée; cependant, la valeur prédictive positive de cette technique est sous-optimale, et il faut attendre de savoir si la souris est vraiment enceinte. La biomicroscopie ultrasonore à haute résolution est un outil efficace et efficient pour l’imagerie: 1) Si une souris est enceinte; 2) Quel stade gestationnel la souris a atteint; et 3) S’il y a des pertes intra-utérines. En plus des embryons et des fœtus, l’investigateur doit également identifier des artefacts communs dans la cavité abdominale afin de ne pas les confondre avec un utérus gravide. Cet article fournit un protocole pour l’imagerie avec des exemples illustratifs.
Introduction
La souris est le modèle de mammifère préféré pour de nombreuses maladies humaines et processus biologiques1,2,3,4. La recherche en biologie du développement nécessite souvent des souris enceintes en phase pour déterminer les processus évolutifs à divers points de temps5,6,7,8. De plus, la reproduction optimale et efficace de souris modèles nécessite une évaluation des grossesses chronométré, en particulier lorsque les chercheurs étudient les effets d’une mutation génétique sur le développement. Typiquement, les enquêteurs accouplent des souris hétérozygotes pendant la nuit, cherchent un bouchon vaginal tôt le lendemain matin et espèrent qu’une grossesse s’ensuit9. La détermination de la perte intra-utérine commence généralement par la vérification d’une portée néonatale pour les ratios mendéliens de génotypes, puis par le travail à l’envers en sacrifiant des souris gravides à divers stades gestationnels et en récupérant les embryons. Les investigateurs peuvent déterminer la prise de poids comme mesure d’une grossesse positive10,11; cependant, en particulier avec les souris génétiquement modifiées, les portées peuvent être très petites et par la suite résorbées lorsqu’il y a perte intra-utérine en raison de laquelle le gain de poids peut ne pas être évident (en particulier au début de la grossesse, ~ E6,5-8,5). Une souris peut sembler faussement enceinte en raison, par exemple, d’une tumeur abdominale bénigne. En substance, on travaille « aveugle ».
La biomicroscopie ultrasonore à haute résolution permet la visualisation directe de l’utérus gravide et le développement d’embryons de souris12,13,14,15,16. Bien que nous ayons initialement développé des méthodes pour évaluer la physiologie cardiovasculaire embryonnaire de la souris16,17,nous avons reconnu l’utilité de cette modalité d’imagerie pour rationaliser notre élevage de souris. Plus précisément, nous n’avions plus à attendre pour « voir » si une souris était enceinte, en fonction du gain de poids évident ou de la livraison d’une portée; nous pourrions déterminer l’état gravide et réapprisser rapidement les souris si la mère n’était pas enceinte. De plus, les pertes intra-utérines pourraient également être facilement iées, et une chronologie des pertes pourrait être déterminée sans sacrifier la souris (voir la figure 1 pour un schéma). Du temps, des souris modèles précieuses et des fonds peuvent ainsi être économisés.
Protocol
Representative Results
Discussion
La première étape la plus importante de l’imagerie consiste à identifier le vagin, puis à déterminer la bifurcation de la corne utérine à gauche et à droite. En suivant chaque corne utérine, l’imageur est moins susceptible de mal identifier les boucles de l’intestin comme l’utérus. De plus, il est important de comprendre les variations de l’apparence de l’intestin (avec/sans matières fécales) pour les distinguer de l’utérus; à l’occasion, les « boules » fécales dans les boucles intestinal…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
aucun.
Materials
| Depilatory cream | |||
| Ethanol, 70% | |||
| Fur clippers | |||
| Gauze or KimWipes | |||
| Isoflurane | |||
| Medical oxygen (optional) | |||
| Medical tape | |||
| Mouse imaging system (including anesthesia set-up and imaging platform) | Fujifilm Visual Sonics | Various | Any system with 40 MHz center-frequency ultrasound transducer probe |
| Razor blade (not a safety razor) | |||
| Scale (to weigh mouse) | |||
| Ultrasound gel |
Referências
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