私のマウスは妊娠していますか?高周波超音波評価
Summary
高解像度超音波は、妊娠、妊娠年齢、妊娠喪失の状態を決定することによって、時限妊娠マウスを必要とする実験を合理化するのに役立ちます。ここで提示されるは、マウスの妊娠だけでなく、妊娠を模倣する可能性のある潜在的な落とし穴(画像アーティファクト)を評価する方法を説明するためのプロトコルです。
Abstract
マウスは、多くのヒト疾患および生物学的プロセスに適した哺乳類動物モデルである。発生生物学では、多くの場合、様々な時点で進化するプロセスを決定するために、段階的な妊娠マウスが必要です。さらに、モデルマウスの最適かつ効率的な繁殖には、時効妊娠の評価が必要です。最も一般的には、マウスは一晩で交配され、膣プラグの存在が決定される。しかし、この技術の正の予測値は最適ではなく、マウスが本当に妊娠しているかどうかを知るのを待つ必要があります。高解像度超音波バイオ顕微鏡は、イメージングのための効果的かつ効率的なツールです: 1) マウスが妊娠しているかどうか;2)マウスが到達した妊娠段階。3)子宮内損失があるかどうか。胚および胎児に加えて、研究者はまた、これらを重力子宮と間違えないように、腹腔内の一般的な人工物を認識しなければならない。この記事では、例示の例と共に、イメージング用のプロトコルを提供します。
Introduction
マウスは、多くのヒト疾患および生物学的プロセス1、2、3、4に好ましい哺乳類モデルである。発生生物学の研究では、多くの場合、様々な時点点5、6、7、8で進化するプロセスを決定するために、段階的妊娠マウスが必要です。さらに、モデルマウスの最適かつ効果的な繁殖は、特に研究者が遺伝子変異が発症に及ぼす影響を研究している場合に、時限妊娠の評価を必要とする。典型的には、研究者は一晩ヘテロ接合マウスを交尾し、翌朝早く膣プラグを探し、妊娠が9を続けることを望む。子宮内損失の決定は、通常、遺伝子型のメンデリア比の新生児ごみをチェックし、様々な妊娠段階で妊娠中のマウスを犠牲にして後方に働き、胚を回復させることから始まります。研究者は、体重増加を陽性妊娠10、11の指標として決定することができる。しかし、特に遺伝子操作されたマウスでは、体重増加が明らかにならない可能性があるために子宮内損失がある場合(特に妊娠初期の~E6.5~8.5)に、ごみは非常に小さく、その後再起する可能性があります。マウスは、例えば良性腹部腫瘍のために誤って妊娠しているように見えることがある。本質的に、人は「盲目」を働く。
高解像度超音波バイオ顕微鏡は、グラビッド子宮の直接可視化を可能にし、マウス胚を開発12、13、14、15、16。我々は、最初に胚マウス心血管生理学16、17を評価する方法を開発したが、我々は我々のマウスの繁殖を合理化するために、このイメージングモダリティの有用性を認識した。具体的には、明らかな体重増加またはごみの送達に基づいて、マウスが妊娠しているかどうかを「見る」のを待つ必要がなくなりました。ダムが妊娠していない場合、私たちはグラビッド状態を決定し、すぐにマウスを再嵌合することができました。さらに、子宮内損失を容易に画像化することができ、マウスを犠牲にすることなく損失のタイムラインを決定することができます(図1を参照)。時間、貴重なモデルマウス、資金を節約することができます。
Protocol
Representative Results
Discussion
画像化における最も重要な最初のステップは、膣を識別し、次に左右に子宮角の分岐を決定することです。各子宮ホーンに従うことによって、イメージャーは子宮として腸のループを誤って識別する可能性が低い。さらに、腸の外観の変化を理解することは重要です(便の有無にかかわらず)これらは子宮と区別する必要があります。時折、腸ループの便「ボール」は、グラビッド(妊娠)子宮を…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
何一つ。
Materials
| Depilatory cream | |||
| Ethanol, 70% | |||
| Fur clippers | |||
| Gauze or KimWipes | |||
| Isoflurane | |||
| Medical oxygen (optional) | |||
| Medical tape | |||
| Mouse imaging system (including anesthesia set-up and imaging platform) | Fujifilm Visual Sonics | Various | Any system with 40 MHz center-frequency ultrasound transducer probe |
| Razor blade (not a safety razor) | |||
| Scale (to weigh mouse) | |||
| Ultrasound gel |
Referências
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