La pancréatite chronique (PC) est une maladie caractérisée par une inflammation et une fibrose du pancréas, souvent associée à des douleurs abdominales intraitables. Cet article se concentre sur le raffinement de la technique pour générer un modèle murin de CP par perfusion de voies biliaires avec de l’acide 2,4,6 -trinitrobenzène sulfonique (TNBS).
La pancréatite chronique (PC) est une maladie complexe impliquant une inflammation pancréatique et une fibrose, une atrophie glandulaire, des douleurs abdominales et d’autres symptômes. Plusieurs modèles de rongeurs ont été développés pour étudier la PC, dont le modèle de perfusion d’acide sulfonique 2,4,6-trinitrobenzène (TNBS) des voies biliaires reproduit les caractéristiques de la douleur neuropathique observées dans la PC. Cependant, la perfusion de médicaments pour les voies biliaires chez la souris est techniquement difficile. Ce protocole démontre la procédure de perfusion de TNBS des voies biliaires pour la génération d’un modèle murin CP. Le TNBS a été perfusé dans le pancréas par l’ampoule de Vater dans le duodénum. Ce protocole a optimisé le volume de médicaments, les techniques chirurgicales et la manipulation des médicaments pendant la procédure. Les souris traitées par TNBS ont montré des caractéristiques de LA PC reflétées par des réductions de poids corporel et du pancréas, des changements dans les comportements associés à la douleur et une morphologie pancréatique anormale. Avec ces améliorations, la mortalité associée à l’injection de TNBS était minime. Cette procédure est non seulement essentielle pour générer des modèles de maladie pancréatique, mais est également utile dans l’administration locale de médicaments pancréatiques.
La pancréatite chronique (PC) est une maladie inflammatoire chronique caractérisée par l’atrophie du pancréas, la fibrose, les douleurs abdominales et la perte éventuelle des fonctions exocrine et endocrinienne1. Les traitements médicaux et chirurgicaux actuels ne sont pas curatifs mais sont entrepris pour soulager les symptômes qui sont la conséquence de la maladie: douleurs abdominales réfractaires, dysfonctionnement endocrinien et exocrinien. Par conséquent, des traitements plus efficaces sont nécessaires de toute urgence2. Les modèles animaux constituent un outil essentiel pour développer une meilleure compréhension de la maladie et étudier les traitements potentiels3. Plusieurs modèles murins pour la PC ont été développés, dont des modèles de céruléine et / ou d’alcool sont couramment utilisés. Il a été démontré que la céruléine, un oligopeptide stimulant la sécrétion pancréatique, induit de manière reproductible un modèle CP présentant une atrophie pancréatique, une fibrose, entre autres4. Un autre modèle courant utilise des injections en série de L-arginine, qui produit une insuffisance exocrine similaire à celle observée chez les patients humains5. La PC peut également être induite par une ligature complète ou partielle du canal pancréatique, ainsi que par une hypertension du canal pancréatique6,7. Malgré la variété des modèles animaux disponibles pour la PC, aucun de ces modèles ne reproduit efficacement la douleur abdominale ressentie par les patients atteints dePC 8.
Des études antérieures ont montré que l’injection pancréatique locale d’acide 2,4,6-trinitrobenzène sulfonique (TNBS) reproduit la douleur persistante ressentie par les patients atteints dePC 9,10,11. Les souris traitées par TNBS ont démontré une hypersensibilité abdominale et une augmentation des comportements liés à la douleur ainsi qu’une « hypersensibilité généralisée » aux stimuli douloureux, un phénomène qui a été observé chez les patients atteints de PC10. En plus d’imiter avec précision la douleur CP, le modèle TNBS reproduit également d’autres caractéristiques pathologiques de la condition humaine telles que la fibrose, l’infiltration de cellules mononucléaires et le remplacement des cellules acineuses par du tissu adipeux10,12. Cependant, la perfusion de TNBS par les voies biliaires est une procédure techniquement difficile chez la souris qui peut causer la mort. À notre connaissance, il n’existe aucun protocole visuel pour montrer comment la perfusion dans les voies biliaires est effectuée. Dans cet article, nous démontrons la procédure de perfusion de TNBS pour générer un modèle murin CP. Cette procédure aidera à générer des modèles animaux précieux pour l’étude de la PC et d’autres maladies du pancréas et peut être utilisée pour infuser d’autres matériaux (par exemple, virus, cellules) dans le pancréas13.
L’infusion de TNBS dans les voies biliaires pour induire une pancréatite chronique est techniquement difficile chez la souris, car jusqu’à 22,5% des souris peuvent mourir dans les 3-4 jours suivant la perfusion du médicament10. Ici, ce rapport a affiné la procédure sur la base d’études antérieures et a réduit la mortalité précoce des souris à <10%. Par exemple, l’augmentation du volume de médicaments (de 35 μL à 50 μL) peut garantir que les médicaments atteignent l’ensemb…
The authors have nothing to disclose.
Cette étude a été soutenue par le ministère des Anciens Combattants (VA-ORD BLR&D Merit I01BX004536) et les subventions # 1R01DK105183, DK120394 et DK118529 à HW. Nous remercions le Dr Hongju Wu d’avoir partagé son expérience technique.
10% Neutral buffered formalin v/v | Fisher Scientific | 23426796 | |
Alcohol prep pads, sterile | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
Animal Anesthesia system | VetEquip, Inc. | 901806 | |
Buprenorphine hydrochloride, injection | Par Sterile Products, LLC | NDC 42023-179-05 | |
Centrifuge tubes, 15 mL | Fisher Scientific | 0553859A | |
Ethanol, absolute (200 proof), molecular biology grade | Fisher Scientific | BP2818500 | |
Extra fine Micro Dissecting scissors 4” straight sharp | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5882 | |
Graefe forceps 4” extra delicate tip | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5136 | |
Heated pad | Amazon | B07HMKMBKM | |
Hegar-Baumgartner Needle Holder 5.25” | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-7850 | |
Insulin syringe with 31-gauge needle | BD | 324909 | |
Iodine prep pads | Fisher Scientific | 19-027048 | |
Isoflurane | Piramal Critical Care | NDC 66794-017-25 | |
Micro clip applying forceps 5.5” | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5410 | |
Micro clip, straight strong curved 1x6mm | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5433 | |
Micro clip, straight, 0.75mm clip width | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5420 | |
Picrylsulfonic acid solution, TNBS, 1M in H2O | Millipore Sigma | 92822-1ML | |
Polypropylene Suture 4-0 | Med-Vet International | MV-8683 | |
Polypropylene Suture 5-0 | Med-Vet International | MV-8661 | |
Sodium chloride, 0.9% intravenous solution | VWR | 2B1322Q | |
Surgical drape, sterile | Med-Vet International | DR1826 | |
Tissue Cassette | Fisher Scientific | 22-272416 | |
Von Frey filaments | Bioseb | EB2-VFF |