पित्त वाहिनी TNBS जलसेक के माध्यम से क्रोनिक अग्नाशयशोथ के लिए एक माउस मॉडल
Summary
क्रोनिक अग्नाशयशोथ (सीपी) एक ऐसी बीमारी है जो अग्न्याशय की सूजन और फाइब्रोसिस की विशेषता है, जो अक्सर असभ्य पेट दर्द से जुड़ी होती है। यह लेख 2,4,6 -त्रिनीट्रोबेनजेन सल्फोनिक एसिड (टीएनबीएस) के साथ पित्त वाहिनी जलसेक के माध्यम से सीपी के माउस मॉडल को उत्पन्न करने की तकनीक को परिष्कृत करने पर केंद्रित है।
Abstract
क्रोनिक अग्नाशयशोथ (सीपी) एक जटिल बीमारी है जिसमें अग्नाशय की सूजन और फाइब्रोसिस, ग्रंथि शोष, पेट दर्द और अन्य लक्षण शामिल हैं। सीपी का अध्ययन करने के लिए कई कृंतक मॉडल विकसित किए गए हैं, जिनमें से पित्त वाहिनी 2,4,6 -त्रिनीट्रोबेनजेन सल्फोनिक एसिड (टीएनबीएस) जलसेक मॉडल सीपी में देखे गए न्यूरोपैथिक दर्द की विशेषताओं को दोहराता है। हालांकि, चूहों में पित्त वाहिनी दवा जलसेक तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है। यह प्रोटोकॉल सीपी माउस मॉडल की पीढ़ी के लिए पित्त वाहिनी टीएनबीएस जलसेक की प्रक्रिया को दर्शाता है। टीएनबीएस को डुओडेनम में वेटर के एम्पुला के माध्यम से अग्न्याशय में संचार किया गया था। इस प्रोटोकॉल ने प्रक्रिया के दौरान दवा की मात्रा, शल्य चिकित्सा तकनीकों और दवा हैंडलिंग को अनुकूलित किया। TNBS-इलाज चूहों सीपी की विशेषताओं के रूप में शरीर के वजन और अग्न्याशय वजन में कटौती, दर्द से जुड़े व्यवहार में परिवर्तन, और असामान्य अग्नाशय आकृति विज्ञान से परिलक्षित दिखाया । इन सुधारों के साथ, टीएनबीएस इंजेक्शन से जुड़ी मृत्यु दर कम थी। यह प्रक्रिया न केवल अग्नाशय रोग मॉडल पैदा करने में महत्वपूर्ण है बल्कि स्थानीय अग्नाशय की दवा वितरण में भी उपयोगी है।
Introduction
क्रोनिक अग्नाशयशोथ (सीपी) एक पुरानी भड़काऊ बीमारी है जो अग्न्याशय, फाइब्रोसिस, पेट दर्द, और एक्सोक्राइन और एंडोक्राइन दोनों कार्यों के अंतिम नुकसान की शोष द्वारा विशेषता है1। वर्तमान चिकित्सा और शल्य चिकित्सा उपचार उपचारात्मक नहीं हैं, लेकिन रोग का परिणाम हैं कि लक्षणों को दूर करने के लिए शुरू कर रहे हैं: रिफ्रैक्टरी पेट दर्द, अंतःस्रावी और एक्सोक्राइन रोग। इसलिए, अधिक प्रभावी उपचार की तत्काल आवश्यकता है2. पशु मॉडल रोग की बेहतर समझ विकसित करने और संभावित चिकित्सीय की जांच करने के लिए एक आवश्यक उपकरण प्रदान करते हैं3. सीपी के लिए कई माउस मॉडल विकसित किए गए हैं, जिनमें से सेरूलिन और/या अल्कोहल मॉडल आमतौर पर उपयोग किए जाते हैं । सेरूलिन, अग्न्याशय के स्राव को उत्तेजित करने वाला एक ओलिगोपेप्टाइड, को एक सीपी मॉडल को पुन: उत्पन्न करने के लिए दिखाया गया है जिसमें अग्नाशय शोष, फाइब्रोसिस, अन्य4के बीच है। एक अन्य आम मॉडल एल-आर्जिनिन के सीरियल इंजेक्शन का उपयोग करता है, जो मानव रोगियों में देखे गए एक्सोक्राइन अपर्याप्तता का उत्पादन करता है5। सीपी को पूर्ण या आंशिक अग्नाशय वाहिनी लिगेशन, साथ ही अग्नाशय वाहिनी उच्च रक्तचाप6,7से भी प्रेरित किया जा सकता है। सीपी के लिए उपलब्ध पशु मॉडलों की विविधता के बावजूद, इनमें से कोई भी मॉडल प्रभावी रूप से सीपी रोगियों द्वारा अनुभव किए गए पेट दर्द को पुन: उत्पन्न नहीं करता है8।
पिछले अध्ययनों से पता चला है कि 2,4,6 – त्रिनीट्रोबेनजेन सल्फोनिक एसिड (टीएनबीएस) का स्थानीय अग्नाशय इंजेक्शन सीपी रोगियों द्वारा अनुभव किए गए लगातार दर्द को दोहराता है9,10,11। TNBS-इलाज चूहों पेट अतिसंवेदनशीलता और वृद्धि हुई दर्द से संबंधित व्यवहार के रूप में के रूप में अच्छी तरह से दर्दनाक उत्तेजनाओं के लिए एक “सामांयीकृत अतिसंवेदनशीलता” का प्रदर्शन किया, एक घटना है कि सीपी रोगियों में देखा गया है10। सीपी दर्द की सटीक नकल करने के अलावा, टीएनबीएस मॉडल मानव स्थिति की अन्य रोग विशेषताओं जैसे फाइब्रोसिस, मोनोन्यूक्लियर सेल घुसपैठ और फैटी ऊतक10, 12के साथ acinar कोशिकाओं केप्रतिस्थापनको भी दोहराता है। हालांकि, पित्त वाहिनी के माध्यम से TNBS जलसेक चूहों में एक तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण प्रक्रिया है कि मौत का कारण हो सकता है । हमारे ज्ञान के लिए, यह दिखाने के लिए कोई दृश्य प्रोटोकॉल नहीं है कि पित्त वाहिनी जलसेक कैसे किया जाता है। इस लेख में, हम सीपी माउस मॉडल उत्पन्न करने के लिए टीएनबीएस के पित्त डुक्शन जलसेक की प्रक्रिया को प्रदर्शित करते हैं। यह प्रक्रिया सीपी और अन्य अग्नाशय के रोगों के अध्ययन के लिए मूल्यवान पशु मॉडल उत्पन्न करने में मदद करेगी और इसका उपयोग अग्न्याशय13में अन्य सामग्रियों (जैसे वायरस, कोशिकाओं) को डालने के लिए किया जा सकता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
क्रोनिक अग्नाशयशोथ को प्रेरित करने के लिए टीएनबीएस का पित्त वाहिनी जलसेक चूहों में तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है, क्योंकि दवा जलसेक 10 के 3-4 दिनों के भीतर चूहों का22.5%तक मर सकता है। यहां, इस रिपोर्?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस अध्ययन को दिग्गजों मामलों के विभाग (VA-ORD BLR&D मेरिट I01BX004536) द्वारा समर्थित किया गया था, और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान # 1R01DK105183, DK120394, और DK118529 HW के लिए अनुदान । हम तकनीकी अनुभव साझा करने के लिए डॉ होंगजू वू को धन्यवाद देते हैं ।
Materials
| 10% Neutral buffered formalin v/v | Fisher Scientific | 23426796 | |
| Alcohol prep pads, sterile | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
| Animal Anesthesia system | VetEquip, Inc. | 901806 | |
| Buprenorphine hydrochloride, injection | Par Sterile Products, LLC | NDC 42023-179-05 | |
| Centrifuge tubes, 15 mL | Fisher Scientific | 0553859A | |
| Ethanol, absolute (200 proof), molecular biology grade | Fisher Scientific | BP2818500 | |
| Extra fine Micro Dissecting scissors 4” straight sharp | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5882 | |
| Graefe forceps 4” extra delicate tip | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5136 | |
| Heated pad | Amazon | B07HMKMBKM | |
| Hegar-Baumgartner Needle Holder 5.25” | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-7850 | |
| Insulin syringe with 31-gauge needle | BD | 324909 | |
| Iodine prep pads | Fisher Scientific | 19-027048 | |
| Isoflurane | Piramal Critical Care | NDC 66794-017-25 | |
| Micro clip applying forceps 5.5” | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5410 | |
| Micro clip, straight strong curved 1x6mm | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5433 | |
| Micro clip, straight, 0.75mm clip width | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5420 | |
| Picrylsulfonic acid solution, TNBS, 1M in H2O | Millipore Sigma | 92822-1ML | |
| Polypropylene Suture 4-0 | Med-Vet International | MV-8683 | |
| Polypropylene Suture 5-0 | Med-Vet International | MV-8661 | |
| Sodium chloride, 0.9% intravenous solution | VWR | 2B1322Q | |
| Surgical drape, sterile | Med-Vet International | DR1826 | |
| Tissue Cassette | Fisher Scientific | 22-272416 | |
| Von Frey filaments | Bioseb | EB2-VFF |
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