Kronisk pankreatitt (CP) er en sykdom preget av betennelse og fibrose i bukspyttkjertelen, ofte forbundet med intractable magesmerter. Denne artikkelen fokuserer på å raffinere teknikken for å generere en musemodell av CP via gallekanalinfusjon med 2,4,6 -trinitrobenzensulfonsyre (TNBS).
Kronisk pankreatitt (CP) er en kompleks sykdom som involverer bukspyttkjertelbetennelse og fibrose, kjertelatrofi, magesmerter og andre symptomer. Flere gnagermodeller er utviklet for å studere CP, hvorav gallekanalen 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonsyre (TNBS) infusjonsmodell replikerer egenskapene til nevropatisk smerte sett i CP. Imidlertid er gallekanalinfusjon hos mus teknisk utfordrende. Denne protokollen demonstrerer prosedyren for gallekanal TNBS-infusjon for generering av en CP-musemodell. TNBS ble infundert i bukspyttkjertelen gjennom ampulla av Vater i tolvfingertarmen. Denne protokollen optimalisert narkotika volum, kirurgiske teknikker, og narkotika håndtering under prosedyren. TNBS-behandlede mus viste egenskaper ved CP som reflektert av kroppsvekt og vektreduksjoner i bukspyttkjertelen, endringer i smerterelatert atferd og unormal morfologi i bukspyttkjertelen. Med disse forbedringene var dødeligheten forbundet med TNBS-injeksjon minimal. Denne prosedyren er ikke bare kritisk for å generere kreft i bukspyttkjertelen sykdom modeller, men er også nyttig i lokal bukspyttkjertel narkotika levering.
Kronisk pankreatitt (CP) er en kronisk inflammatorisk sykdom preget av atrofi i bukspyttkjertelen, fibrose, magesmerter og eventuelt tap av både eksokrine og endokrine funksjoner1. Nåværende medisinske og kirurgiske behandlinger er ikke kurative, men utføres for å lindre symptomer som er konsekvensen av sykdommen: ildfaste magesmerter, endokrine og eksokrine dysfunksjon. Derfor er det nødvendig med mer effektive behandlinger2. Dyremodeller gir et viktig verktøy for å utvikle en bedre forståelse av sykdommen og undersøke potensielle terapeutiskestoffer 3. Flere musemodeller for CP er utviklet, hvorav cerulein- og /eller alkoholmodeller ofte brukes. Cerulein, en oligopeptid stimulerende bukspyttkjertel sekresjon, har vist seg å reprodusere en CP-modell med pankreas atrofi, fibrose, blant andre4. En annen vanlig modell bruker serielle injeksjoner av L-arginin, som produserer eksokrininsuffisiens lik den som observeres hos humane pasienter5. CP kan også induseres ved fullstendig eller delvis ligasjon i bukspyttkjertelen, i tillegg til hypertensjon i bukspyttkjertelen6,7. Til tross for mangfoldet av dyremodeller som er tilgjengelige for CP, reproduserer ingen av disse modellene effektivt magesmerter som oppleves av CP-pasienter8.
Tidligere studier viste at lokal pankreas injeksjon av 2,4,6 -trinitrobenzen sulfonsyre (TNBS) gjenskaper vedvarende smerte opplevd av CP pasienter9,10,11. TNBS-behandlede mus viste abdominal overfølsomhet og økt smerterelatert atferd samt en “generalisert overfølsomhet” for smertefulle stimuli, et fenomen som har blitt observert hos CP-pasienter10. I tillegg til nøyaktig etterligning av CP-smerte, replikerer TNBS-modellen også andre patologiske egenskaper ved den menneskelige tilstanden som fibrose, mononukleær celleinfiltrasjon og erstatning av acinarceller med fettvev10,12. TNBS-infusjon via gallekanal er imidlertid en teknisk utfordrende prosedyre hos mus som kan forårsake død. Så vidt vi vet er det ingen visuell protokoll for å vise hvordan gallekanalinfusjon utføres. I denne artikkelen demonstrerer vi prosedyren for galleduksjonsinfusjonen av TNBS for å generere en CP-musemodell. Denne prosedyren vil bidra til å generere verdifulle dyremodeller for studiet av CP og andre bukspyttkjertelsykdommer og kan brukes til å tilføre andre materialer (f.eks. virus, celler) i bukspyttkjertelen13.
Gallekanalinfusjon av TNBS for å indusere kronisk pankreatitt er teknisk utfordrende hos mus, da opptil 22,5% av musene kan dø innen 3-4 dager etter legemiddelinfusjon10. Her raffinerte denne rapporten prosedyren basert på tidligere studier og reduserte tidlig musedødelighet til <10%. For eksempel kan det økte legemiddelvolumet (fra 35 μL til 50μL) sikre at stoffene når hele bukspyttkjertelen. Bruk av en insulinsprøyte og en mindre nålstørrelse (31G) reduserer potensiell skade på buksp…
The authors have nothing to disclose.
Denne studien ble støttet av Department of Veterans Affairs (VA-ORD BLR&D Merit I01BX004536), og National Institute of Health grants # 1R01DK105183, DK120394 og DK118529 til HW. Vi takker Dr. Hongju Wu for å dele teknisk erfaring.
10% Neutral buffered formalin v/v | Fisher Scientific | 23426796 | |
Alcohol prep pads, sterile | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
Animal Anesthesia system | VetEquip, Inc. | 901806 | |
Buprenorphine hydrochloride, injection | Par Sterile Products, LLC | NDC 42023-179-05 | |
Centrifuge tubes, 15 mL | Fisher Scientific | 0553859A | |
Ethanol, absolute (200 proof), molecular biology grade | Fisher Scientific | BP2818500 | |
Extra fine Micro Dissecting scissors 4” straight sharp | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5882 | |
Graefe forceps 4” extra delicate tip | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5136 | |
Heated pad | Amazon | B07HMKMBKM | |
Hegar-Baumgartner Needle Holder 5.25” | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-7850 | |
Insulin syringe with 31-gauge needle | BD | 324909 | |
Iodine prep pads | Fisher Scientific | 19-027048 | |
Isoflurane | Piramal Critical Care | NDC 66794-017-25 | |
Micro clip applying forceps 5.5” | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5410 | |
Micro clip, straight strong curved 1x6mm | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5433 | |
Micro clip, straight, 0.75mm clip width | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5420 | |
Picrylsulfonic acid solution, TNBS, 1M in H2O | Millipore Sigma | 92822-1ML | |
Polypropylene Suture 4-0 | Med-Vet International | MV-8683 | |
Polypropylene Suture 5-0 | Med-Vet International | MV-8661 | |
Sodium chloride, 0.9% intravenous solution | VWR | 2B1322Q | |
Surgical drape, sterile | Med-Vet International | DR1826 | |
Tissue Cassette | Fisher Scientific | 22-272416 | |
Von Frey filaments | Bioseb | EB2-VFF |