मल्टीपल स्क्लेरोसिस के Lysolecithin चूहा मॉडल में मायलिन सामग्री के वीवो मापने के लिए पॉजिट्रॉन एमिशन टोमोग्राफी इमेजिंग
Summary
इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य मल्टीपल स्क्लेरोसिस के एक पशु मॉडल में पॉजिट्रॉन उत्सर्जन टोमोग्राफी (पीईटी) इमेजिंग द्वारा वीवो मायलिन परिवर्तन (डिमाइलिनेशन और रेमीलिलिनेशन) में निगरानी करना है।
Abstract
मल्टीपल स्क्लेरोसिस (एमएस) केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में एक्सोनल और न्यूरोनल डिजनरेशन और डिमाइलेशन के विस्तार के साथ एक न्यूरोइंफ्लैमेटरी बीमारी है, जिससे एमएस प्रगति के दौरान मोटर डिस्फंक्शन, मानसिक विकलांगता और संज्ञानात्मक हानि होती है। पॉजिट्रॉन उत्सर्जन टोमोग्राफी (पीईटी) एक इमेजिंग तकनीक है जो वीवो सेलुलर और आणविक परिवर्तनों में मात्रा निर्धारित करने में सक्षम है।
अक्षुण्ण myelin के लिए आत्मीयता के साथ रेडियोट्रेस समय के साथ myelin सामग्री परिवर्तन के वीवो इमेजिंग में इस्तेमाल किया जा सकता है। मायलिन सामग्री में वृद्धि या कमी का पता लगाना संभव है, इसका क्या मतलब है कि यह इमेजिंग तकनीक केंद्रीय तंत्रिका तंत्र की जनसांख्यिकी और पुनर्मीलन प्रक्रियाओं का पता लगा सकती है। इस प्रोटोकॉल में हम प्रदर्शित करते हैं कि लिसोलेसिथिन चूहा मॉडल में मायलिन परिवर्तनों का पता लगाने के लिए पीईटी इमेजिंग का उपयोग कैसे करें, जो फोकल डेमिलिनेशन घाव (स्टीरियोटैक्टिक इंजेक्शन द्वारा प्रेरित) (यानी, मल्टीपल स्क्लेरोसिस रोग का एक मॉडल) का एक मॉडल है। 11 सी-पीआईबी पीईटी इमेजिंग बेसलाइन पर किया गया था, और 1 सप्ताह और 4 सप्ताह के बाद लिसोलिथिन के स्टीरियोटैक्सिक इंजेक्शन 1% सही स्ट्राटम (4 माइक्रोन) और चूहे के मस्तिष्क के कॉर्पस कैलोसम (3 माइक्रोन) में, फोकल डेमियोलेशन (इंजेक्शन साइट 1 सप्ताह के बाद) और पुनर्मीलिपन प्रक्रिया (इंजेक्शन साइट) की मात्रा की अनुमति देता है।
मायलिन पीईटी इमेजिंग मायलिन सामग्री में वीवो परिवर्तनों में निगरानी के लिए एक दिलचस्प उपकरण है जो रोग प्रगति और चिकित्सीय प्रतिक्रिया की निगरानी के लिए उपयोगी हो सकता है।
Introduction
मल्टीपल स्क्लेरोसिस (एमएस) एक न्यूरोइंफ्लैमेटरी बीमारी है जो केंद्रीय तंत्रिका तंत्र को प्रभावित करती है, सूजन, डिमाइलेशन और एक्सोनल लॉस1की विशेषता है। इस बीमारी का पूर्वानुमान उपचार में प्रगति के साथ भी परिवर्तनीय है, और यह युवा लोगों में न्यूरोलॉजिकल घाटे के सबसे आम कारणों में से एक है1। एमएस का निदान नैदानिक अभिव्यक्ति के मानदंडों और चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई)2,3द्वारा विशिष्ट घावों के दृश्य पर आधारित है।
पॉजिट्रॉन उत्सर्जन टोमोग्राफी (पीईटी) एमएस प्रगति और चिकित्सीय प्रभावों की वीवो निगरानी में एक उपयोगी उपकरण हो सकता है। कार्बन-11 (11 सी-पीआईबी) के साथ लेबल किए गए पिट्सबर्ग यौगिक बी रेडियोट्रेसर(पीआईबी)का व्यापक रूप से β-एमिलॉयड सजीले टुकड़े को निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाता है; हालांकि, पिछले दशक में, यह myelin सामग्री की मात्रा निर्धारित करने और गतिशील demyelination और remyelination4,5,6दिखाने के लिए अध्ययन किया गया है ।
विभिन्न एमिलॉयड पीईटी ट्रेसर(11सी-पीआईबी, 18एफ-फ्लोर्बेटाबेन,18एफ-फ्लोर्बेटापीर, 18एफ-फ्लूटमेटामोल) का उपयोग मायलिन को निर्धारित करने और रोग प्रगति और चिकित्सीय प्रतिक्रिया के बारे में महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान करने के लिए किया जा सकता है, जिससे न्यूरोइंफ्लेमेशन के हस्तक्षेप के बिना, डेमिएलेशन और रेमाइलेशन प्रक्रियाओं की पहचान की अनुमति दी जा सकती है, जो पारंपरिक चुंबकीय अनुनाद छवियों (एमआरआई)7के साथ हो सकती है । एमिलॉयड पीईटी इमेजिंग ने गैर-सक्रिय रोगियों की तुलना में सक्रिय एमएस रोगियों में कम ट्रेसर तेज दिखाया, जिसे सक्रिय रोगियों में शुरुआती सफेद पदार्थ क्षति द्वारा समझाया जा सकता है8। लोअर एमिलॉयड ट्रेसर तेज भी एक अनुवर्ती अध्ययन में संज्ञानात्मक गिरावट के साथ जुड़ा हुआ था, इस तकनीक को बीमारी और नैदानिक परिणामों9के रोगविज्ञान का अध्ययन करने के लिए एक मूल्यवान उपकरण होने के लिए दिखा रहा था।
लिसोलेसिसिथिन (एलपीसी) चूहा मॉडल मल्टीपल स्क्लेरोसिस का एक रासायनिक प्रेरित मॉडल है, जहां इंजेक्शन टॉक्सिन, एलपीसी, मैक्रोफेज की एक उच्च प्रतिक्रिया को प्रेरित करता है जिसके परिणामस्वरूप सूजन में वृद्धि होती है और नतीजतन, डिमाइलेशन10,11। लगभग 4 हफ्तों में डिमाइलेशन तेजी से उलट जाता है, जो कृंतक में डिमाइलेशन और पुनर्जंमीकरण प्रक्रियाओं के मूल्यांकन के लिए यह एक अच्छा मॉडल बनाता है। इस मॉडल को पहले से ही पीईटी इमेजिंग का उपयोग करके मूल्यांकन किया गया है, अच्छे परिणाम और पोस्टमार्टम निबंध12के साथ संबंध के साथ ।
यहां हम lysolecithin चूहा मॉडल में 11सी-PIB के साथ myelin पीईटी इमेजिंग के लिए प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं, इस इमेजिंग तकनीक को myelin सामग्री के वीवो माप में एक उपयोगी उपकरण होने के लिए दिखाते हैं।
Protocol
Representative Results
Discussion
मल्टीपल स्क्लेरोसिस का अध्ययन करने के लिए लिसोलेसिथिन मॉडल का उपयोग करने का सबसे बड़ा लाभ डिमाइलिनेशन (लगभग 1 सप्ताह) और रेमाइलेशन (लगभग 4 सप्ताह) के लिए14होने के लिए तेजी से समय रेखा है। इस मॉडल ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
β क्यूब उपकरण (मोलेक्यूब्स एनवी, बेल्जियम) को साओ पाउलो रिसर्च फाउंडेशन, एफएपीईएसपी-ब्राजील (#2018/15167-1) द्वारा समर्थित किया गया था। LES FAPESP से पीएचडी छात्र छात्रवृत्ति है-ब्राजील (#2019/15654-2) ।
Materials
| Analytical Balance | Marte | AUWZZOD | max: 220 g- min: 1 mg |
| Anestesia vaporizer | Nanitech | 15800 | |
| Beta-cube | Molecubes | ||
| Bulldog clamp | Stoelting | 5212043P | |
| clorexidine | Rioquimica | 0.5%/100 mL | |
| Cotton swabs | johnson e johnson | ||
| Dose calibrator | Capintech | ||
| Drill | Kinzo powertools | 352901 | Model Q0M-DC3C |
| Eppendorf tube | Eppendorf | 30125150 | 1.5 mL |
| Eye lubricant | ADVFARMA | 30049099 | vaseline 15 g (pharmaceutical purity) |
| Fine forceps | Stoelting | 52102-38P | |
| Gloves | Descarpack | 212101 | 6.5 size |
| Heating pad | Softhear | ||
| Injection Syringe | Hamilton | 80314 | 10µ, 32ga, model 701 |
| Insuline syringe | BD | 328328 | 1 mL insulin syringes with needle |
| Isoflurane | Cristália | 410525 | 100 mL , concentration 1 mL/1 mL |
| Ketoprofen or other analgesic | Sanofi | 100 mg/2 mL | |
| lidocaine | Hipolabor | 1.1343.0102.001-5 | 2%/20mL |
| L-α-Lysophosphatidylcholine from egg yolk | Sigma-aldrich | L-4129 | 25 mg – ≥99%, Type I, powder |
| Needle holder | Stoelting | 5212290P | |
| Oxygen | White Martins | 7782-44-7 | Compressed gas |
| PMOD software | PMOD technologies | Version 4.1 | module fuse it |
| Rat anesthesia mask | KOPF | Model 906 | |
| Saline | Farmace | 0543325/ 14-8 | 0.9% sodium chloride for injection, 10 mL |
| Scapel blades | Stoelting | 52173-10 | |
| Scapel handles | Stoelting | 52171P | |
| Scissor | Stoelting | 52136-50P | |
| Semi-analytical Balance | Quimis | BK-3000 | max:3,100 g; min:0.2 g |
| shaver | Mega profissional | AT200 model | |
| Stereotactic Apparatus | KOPF | Nodel 900 | |
| Universal holder with needle support | KOPF | Model 1772-F1 | Hamilton support for 5 and 10 µL |
Referências
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