Transplante de ilhotas cobertas de gordura usando tecido adiposo branco epididimal

Resumo

Este método de transplante de ilhotas cobertas de gordura é adequado para a detecção de ilhotas enxertadas na cavidade intraperitoneal. Notavelmente, não requer o uso de agentes bioligantes ou sutura.

Resumo

O transplante de ilhotas é uma terapia de reposição celular para diabetes mellitus grave. A cavidade intraperitoneal é tipicamente o local de transplante para este procedimento. No entanto, o transplante de ilhotas intraperitoneais tem algumas limitações, incluindo baixa eficácia do transplante, difícil capacidade de detecção do enxerto e falta de capacidade de enxertectomia para análise pós-transplante. Neste artigo, o "transplante de ilhotas cobertas de gordura", um método de transplante de ilhotas intraperitoneais que utiliza tecido adiposo branco epididimal, é usado para avaliar os efeitos terapêuticos de ilhotas de bioengenharia. A simplicidade do método reside na semeadura de ilhotas no tecido adiposo branco epididimal e no uso do tecido para cobrir as ilhotas. Embora este método possa ser categorizado como uma técnica de transplante de ilhotas intraperitoneais, ele compartilha características com o transplante de ilhotas de tecido adiposo. O método de transplante de ilhotas cobertas de gordura demonstra efeitos terapêuticos mais robustos do que o transplante de ilhotas de tecido adiposo, no entanto, incluindo a melhoria dos níveis de glicose no sangue e insulina plasmática e o potencial para a remoção do enxerto. Recomenda-se a adoção deste método para avaliar os mecanismos de enxerto de ilhotas em tecido adiposo branco e os efeitos terapêuticos de ilhotas de bioengenharia.

Introdução

O transplante de ilhotas é uma terapia de reposição celular para pacientes com diabetes mellitus grave. Relatórios recentes têm mostrado que as taxas de independência de insulina em três anos após o transplante melhoram até 44%¹ e que aproximadamente 80% dos receptores que recebem mais de 600.000 equivalentes totais de ilhotas atingem a independência da insulina². Além disso, no mais recente relatório do Registro Colaborativo de Transplante de Ilhotas, foi revelado que os níveis de glicose no sangue em jejum foram mantidos em 60-140 mg / dL por um período de 5 anos em mais de 70% dos pacientes que foram submetidos apenas....

Protocolo

O procedimento a seguir é executado em três etapas. O primeiro passo inclui a indução de diabetes nos camundongos receptores e o isolamento das ilhotas doadoras. A segunda etapa envolve a preparação de ilhotas antes do transplante. Na terceira etapa, é realizado o transplante de ilhotas no tecido adiposo epididimal e a cobertura das ilhotas utilizando o tecido adiposo. Em seguida, os efeitos terapêuticos foram avaliados. O manuseio dos camundongos e os procedimentos experimentais realizados neste estudo estão em conformidade com os ''Princípios de Cuidados com Animais de Laboratório'' (Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório, National Institutes of Health ....

Resultados

Para comparar a eficácia do transplante do transplante de ilhotas cobertas de gordura com a do transplante de ilhotas intraperitoneais, o mesmo número de ilhotas foi implantado no peritônio no espaço paracólico esquerdo dos animais diabéticos receptores de controle. Observou-se que os níveis de glicose no sangue de camundongos com transplante de ilhotas cobertas de gordura diminuíram gradual e significativamente em comparação com camundongos transplantados de ilhotas intraperitoneais (p = 0,0023; Fig.......

Discussão

O método de transplante de ilhotas cobertas de gordura incorpora técnicas de duas técnicas de transplante diferentes: transplante de ilhotas intraperitoneais e transplante de ilhotas de tecido adiposo. Como a membrana superficial do tecido adiposo branco epididimal é considerada o tecido adiposo branco que é coberto pelo peritônio e que está ligado ao epidídimo, o método de transplante de ilhotas cobertas de gordura pode ser anatomicamente categorizado como um tipo de transplante de ilhotas intraperitoneais. A técnica pe.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
4-0 Nylon	Alfresa	ER2004NA45-KF2	Abdômen de fechamento
Alexa 488-conjugado burro anti-cobaia	Jackson Immunoresearch	706-546-148	Anticorpo secundário para anticorpo de insulina
Alexa 647-conjugado burro anti-coelho	Jackson Immunoresearch	711-606-152	Anticorpo secundário para anticorpo do fator von Willebrand
DMEM, baixa glicose, piruvato	ThermoFisher Scientific	11885084	ilhotas de cultura, ilhotas transplantadas
Eosin	Fujifilm Wako Chemicals	051-06515	Usando para coloração de tecido por eosina
Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1.5 mL	Eppendorf	30120086	Ilhotas coletoras
Tubos de Centrífuga Cônicos Falcon 15 mL	Corning	352095	Ilhotas Coletoras
Falcon 40 µ m Cell Strainer	Falcon	352340	Usando para separar ilhotas de outros tecidos pancreáticos
Falcon 50 mL Tubos de centrífuga cônicos	Corning	352070	Descartando meio excessivo / tampão
cobaia anti-insulina	Agilent Technologies Japan, Ltd. (Dako)	IR002	Anticorpo primário para insulina murina
Hematoxilina	Muto Pure Chemicals Co., Ltd.	30002	Usando-se para manchar o tecido pela
solução 10%	Shionogi &Co.	sem número de catálogo	Usando para desinfecção
Isoflurano	Fujifilm Wako Chemicals	095-06573	Usando para anestesia
Labcon 1000 µ L ZapSilk Pontas de Pipeta de Baixa Retenção	Labcon	1177-965-008	Usando para separar ilhotas de outros tecidos pancreáticos
Labcon 200 µ L ZapSilk Pontas de Pipeta de Baixa Retenção	Labcon	1179-965-008	Uso para semear ilhotas no tecido adiposo branco epididimal
Mintsensor	Sanwa Kagaku Kenkyusho Co. Ltd.,	8AEB02E	Usando para monitorar a glicose no sangue
Pipetteman P-1000	Gilson	F123602	Usando para separar ilhotas de outro tecido pancreático
Pipeman P-200	Gilson	F123601	Usando-se para semear ilhotas no tecido adiposo branco epididimal
Coelho anti-vWF	Abcam	ab6994	Anticorpo primário para o fator de von Willebrand murino

da isodina da hematoxilina, Ltd.