EcoHIV मस्तिष्क संक्रमण का एक चूहा मॉडल
Summary
यहां, हम चिमरिक एचआईवी (EcoHIV) का उपयोग करके सक्रिय एचआईवी संक्रमण का एक नया चूहा मॉडल स्थापित करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं, जो मस्तिष्क में एचआईवी-1 वायरल जलाशयों की हमारी समझ को बढ़ाने और एचआईवी से जुड़े न्यूरोकॉग्निटिव विकारों और संबद्ध comorbidities (यानी, नशीली दवाओं के दुरुपयोग) का अध्ययन करने के लिए एक प्रणाली की पेशकश के लिए महत्वपूर्ण है ।
Abstract
यह अच्छी तरह से अध्ययन किया गया है कि EcoHIV संक्रमित माउस मॉडल एचआईवी से जुड़े तंत्रिका संबंधी जटिलताओं की जांच में महत्वपूर्ण उपयोगिता का है । नशीली दवाओं के दुरुपयोग और न्यूरोकॉग्निटिव विकारों के अध्ययन के लिए इकोहिव संक्रमित चूहा मॉडल की स्थापना, न्यूरोहिव और एचआईवी-1 संबद्ध न्यूरोकॉग्निटिव विकारों (हाथ) के अध्ययन में फायदेमंद होगी। वर्तमान अध्ययन में, हम चिमरिक एचआईवी (EcoHIV) का उपयोग करके सक्रिय एचआईवी संक्रमण के चूहे मॉडल के सफल निर्माण को प्रदर्शित करते हैं। सबसे पहले, इकोहिव के लेंटीवियरल निर्माण को 48 घंटे के लिए सुसंस्कृत 293 फीट कोशिकाओं में पैक किया गया था। फिर, सशर्त माध्यम केंद्रित और titered था। इसके बाद, हमने F344/N चूहा मस्तिष्क ऊतक में EcoHIV-EGFP के द्विपक्षीय स्टीरियोटैक्सिक इंजेक्शन का प्रदर्शन किया । संक्रमण के एक सप्ताह बाद, संक्रमित मस्तिष्क ऊतक में EGFP फ्लोरेसेंस संकेतों का पता चला, यह दर्शाता है कि EcoHIV सफलतापूर्वक चूहों में एक सक्रिय एचआईवी संक्रमण लाती है । इसके अलावा माइक्रोग्लियल सेल मार्कर, आईबीए1 के लिए इम्यूनोस्टेटिंग का प्रदर्शन किया गया । परिणामों से संकेत मिलता है कि माइक्रोग्लिया प्रमुख सेल प्रकार इकोहिव को शरण देते थे। इसके अलावा, इकोहिव चूहों ने अस्थायी प्रसंस्करण में परिवर्तन का प्रदर्शन किया, जो संक्रमण के आठ सप्ताह बाद हाथ के संभावित अंतर्निहित न्यूरोबिहेवियरल तंत्र के साथ-साथ सिनैप्टिक डिसफंक्शन भी है। सामूहिक रूप से, वर्तमान अध्ययन एचआईवी-1 संक्रमण के EcoHIV मॉडल को मस्तिष्क में एचआईवी-1 वायरल जलाशयों के साथ-साथ नशीली दवाओं के दुरुपयोग जैसे हाथ और संबद्ध comorbidities का अध्ययन करने के लिए एक मूल्यवान जैविक प्रणाली की पेशकश चूहे के लिए फैली हुई है ।
Introduction
जैविक प्रणालियों ने एचआईवी-1 संबद्ध न्यूरोकॉग्निटिव विकारों (हाथ) और उनके अंतर्निहित तंत्रिका तंत्र2के बारे में हमारी समझ को बढ़ाया है । यह निर्धारित करना कि किसी भी अध्ययन के लिए कौन सी जैविक प्रणाली सबसे उपयुक्त है , यह अक्सर ब्याज के प्रश्न पर निर्भर करता है2. मेजबान पशु मॉडल की सीमा की सीमा एचआईवी-1 रोग विकास के अध्ययन को चुनौती देता है। एचआईवी-1 वायरल प्रतिकृति और रोगजनन की जांच करने के लिए, पोटाश एट अल3 ने सक्रिय एचआईवी-1 संक्रमण का एक माउस मॉडल बनाया, एचआईवी सतह लिफाफा ग्लाइकोप्रोटीन, gp120 के कोडिंग क्षेत्र की जगह, इकोट्रॉपिक एमएलवी जीपी 80 के साथ, जिसके कारण चूहों में सफल वायरल प्रतिकृति4। चिमरिक एचआईवी (इकोएचआईवी) चूहों में पूंछ नस इंजेक्शन के बाद, एचआईवी-1 सेरोपॉजिटिव व्यक्तियों (उदाहरण के लिए, संक्रमित लिम्फोसाइट्स और मैक्रोफेज, एंटीवायरल प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं और सूजन3,5,6)के समान कई विशेषताओं को देखा गया।
यद्यपि चूहे और चूहे दोनों मुरीडी के सदस्य हैं, लेकिन मौलिक प्रजातियों के अंतर विशिष्ट प्रयोगात्मक प्रश्नों के लिए उनकी उपयुक्तता को प्रभावित कर सकते हैं7। इसलिए, चूहों के लिए इकोहिव संक्रमण मॉडल का विस्तार (आमतौर पर नशीली दवाओं के दुरुपयोग और न्यूरोकॉग्निटिव विकारों के अध्ययन में उपयोग किया जाता है) न्यूरोहिव के अध्ययन में लाभप्रद होगा। उदाहरण के लिए, उनका बड़ा आकार दवा स्व-प्रशासन प्रक्रियाओं के लिए जुगुलर कैथेटर प्रत्यारोपण को अधिक व्यावहारिक8बनाता है। चूहों में दवा स्व-प्रशासन तकनीकों का उपयोग एचआईवी-19में प्रेरणा का मूल्यांकन करने के लिए किया गया है। इसके अलावा, कई न्यूरोकॉग्निटिव/व्यवहार कार्यों को शुरू में चूहों10के लिए डिजाइन किया गया था । यहां, हम इकोहिव संक्रमण मॉडल का विस्तार करने के लिए चूहों में इकोहीव के स्टीरियोटैक्सिक इंजेक्शन के उपयोग की रिपोर्ट करते हैं और न्यूरोहिव और हैंड से संबंधित उपन्यास प्रश्नों को संबोधित करने का एक महत्वपूर्ण अवसर प्रदान करते हैं।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस प्रोटोकॉल में, हमने चूहों में एक इकोहिव-प्रेरित एचआईवी संक्रमण मॉडल स्थापित किया। विशेष रूप से, हमने कॉर्टेक्स में इकोहीव के एक द्विपक्षीय स्टीरियोटैक्सिक इंजेक्शन का वर्णन किया जो सफलतापूर्वक च?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को एनआईएच ग्रांट HD043680, MH106392, DA013137 और NS100624 द्वारा वित्त पोषित किया गया था ।
Materials
| 293FT cells | ThermoFisher Scientific | R70007 | |
| Antibiotic-Antimycotic solution | Cellgro | 30004CI | 100X |
| Corning BioCoatGelatin 75cm² Rectangular Canted Neck Cell Culture Flask with Vented Cap | Life Technologies | 354488 | |
| Corning DMEM with L-Glutamine, 4.5 g/L Glucose and Sodium Pyruvate | Life Technologies | 10013CV | |
| Cover glass | VWR | 637-137 | |
| drill | |||
| Dumont #5 Forceps | World Precision Instruments | 14095 | |
| Dumont #7 Forceps | World Precision Instruments | 14097 | |
| Eppendorf Snap-Cap Microcentrifuge Biopur Safe-Lock Tubes | Life Technologies | 22600028 | |
| Ethicon Vicryl Plus Antibacterial, 4-0 Polyglactin 910 Suture, 27in. FS-2 | Med Vet International | VCP422H | |
| Hamilton syringe | Hamilton | 1701 | |
| Invitrogen Lipofectamine 3000 Transfection Reagent | Life Technologies | L3000015 | |
| Iris Forceps | World Precision Instruments | 15914 | |
| Iris Scissors | World Precision Instruments | 500216 | |
| Lentivirus-Associated p24 ELISA Kit | Cell Biolabs, inc. | VPK-107-5 | |
| Lenti-X Concentrator | Takara | PT4421-2 | |
| Opti-MEM I Reduced Serum Medium | Life Technologies | 11058021 | |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127-500G | |
| Paraformaldehyde | Sigma | P6148 | |
| ProLong Gold | Fisher Scientific | P36930 | |
| Sevoflurane | Merritt Veterinary Supply | 347075 | |
| stereotaxic apparatus | Kopf Instruments | Model 900 | |
| SuperFrost Plus Slides | Fisher Scientific | 12-550-154% | |
| Vannas Scissors | World Precision Instruments | 500086 |
Referências
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