성인 얼룩말 피시의 부분 간 절제술
Summary
이 프로토콜은 간 재생의 연구를 가능하게 하기 위하여 성인 얼룩말물고기에 있는 간의 복부 엽을 제거하기 위한 절차를 기술합니다.
Abstract
간 부전은 전 세계적으로 사망의 주요 원인 중 하나이며, 만성 간 질환으로 인한 사망률은 미국에서 급격히 증가하고 있습니다. 건강한 간은 독성 손상에서 재생할 수 있지만, 고급 간 질환에서, 재생 간 자연 능력이 손상된다. Zebrafish는 재생을 연구하기위한 강력한 실험 시스템으로 부상했습니다. 그들은 부분 간 절제술에서 간 재생을 연구하기위한 이상적인 모델입니다, 간 의 일부가 수술로 제거되는 직접 임상 관련성을 가진 절차, 그대로 나머지를 떠나. 부분 간 절제술에 대한 표준 프로토콜은 없습니다. 이 모델을 사용한 이전 연구는 약간 다른 프로토콜을 사용하고 이질적인 결과를 보고했습니다. 여기에 설명된 것은 성인 얼룩말피에서 부분 적인 간 절제술을 수행하기위한 효율적이고 재현 가능한 프로토콜입니다. 우리는 제브라피쉬가 절제된 로브의 상형 재생이 가능한지 보여주기 위해 이 기술을 사용합니다. 이 프로토콜은 제브라피시의 간 재생에 필요한 메커니즘을 더 심문하는 데 사용할 수 있습니다.
Introduction
인간에서 고체 기관 중, 간은 재생 할 수있는 유일한기관이다 1. 이것은 중요 한, 간 필수 장기, 주요 신진 대사 기능에 대 한 책임, 에너지 저장, 혈액 해독, 혈 장 단백질의 분 비, 그리고 담 즙 생산2. 독성 또는 염증 성 손상으로 인해 손실 된 간구는 주로 나머지 간세포1의분할을 통해 대체됩니다. 간 재생을 연구하기위한 하나의 고전적인 실험 모델은 부분 간 절제술이며, 간의 개별 엽을 제거하여 나머지 로브를 그대로남겨 둡니다 3. 이 절차는 처음에 간 질량의 대략 2/3이 제거되는 쥐에서 개발되었습니다. 포유류의 부분 적인 간 절제술 후, 보상 재생은 간이 초기 질량을 회복 할 때까지 나머지 엽에서 발생합니다. 특히, 포유류 간은 누락 된 엽을 대체하지 않습니다.
제브라피쉬(다리오리리오)는성인 장기 재생4를연구하기 위한 가기관 모델을 나타낸다. 제브라피쉬 간은 포유류 간과 구조적으로 다르지만 동일한 세포 유형으로 구성되며 포유류2와동일한 기능을 제공합니다. 그것은 3 개의 엽으로 구성 되며, 두 개의 등산 엽과 내장을 따라 평평 하 게 단일 복부 엽. 부분 간 절제술은 이전에 재생의 정확한 모드에 관해서는 상반되는 계정과 함께, 제브라피시에서 수행되었습니다. 전형적으로, 1/3 부분 간 절제술은 전체 복부 엽의 제거에 의해 수행된다. 초기 보고서는 복부 엽의 제거 후, 그것은 완전히 주 내에 재생 되었다 지적5,6,7,포유류 간반대로, 제브라피시 간 은 상형 재생 할 수 있음을 시사. 후속 연구는 복부 엽의 제거가 누락 된 복부 엽의 재생보다는 등쪽 엽에서 보상 재생을 초래하고 궁극적으로 주8,9이내에 간 질량의 회복을 초래했다는 것을 입증했다. 복부 엽의 절제술에 따른 등산 엽의 전사 프로파일링은 보상재생(10)과관련된 중요한 변화를 드러냈다. 간 재생 모드가 부상의 정도에 따라 다를 수 있음을 감안할 때8,우리는 결과에서 불일치가 연구 그룹 사이의 부분 적인 간 절제술 프로토콜의 기술적 변화에 기인 할 수 있다고 추측.
이 프로토콜은 복부 엽을 제거하여 성인 얼룩말에 1/3 부분 간 절제술을 수행하는 절차를 설명합니다. 이 기술은 간 재생의 메커니즘을 평가하는 데 유용 할 것입니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
간 재생을 위한 제브라피시와 포유류 모형 사이 해부학적인 다름은 간 절제술에 유일한 도전을 제시합니다. 제브라피시의 간은 심장과 창자에 가깝습니다. 실수로 어느 장기를 손상 증가 사망률에 결과. 제브라피시 간은 캡슐화되지 않아 장과 분리하기가 더 어려워지다. 간은 포털 정맥을 통해 창자에서 영양이 풍부한 혈액을 받습니다. 포유류에서, 창자를 떠나는 정맥은 간12로…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
I.M.O.는 NIAAA (F32A027135)에 의해 지원됩니다. W.G.는 R01DK090311, R01DK105198, R24OD017870, 암 연구의 우수성을 위한 클라우디아 아담스 바 프로그램에 의해 지원됩니다. W.G.는 생물 의학 과학분야의 퓨 학자입니다.
Materials
| 16% Paraformaldehyde Aqueous Solution, EM Grade | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
| 50 mL Falcon Centrifuge Tubes, Polypropylene, Sterile | Corning | 352098 | |
| AS 82/220.R2 PLUS Analytical Balance | Bay State Scale & Systems, INC. | WL-104-1051 | |
| Dumont #55 Forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| EMS Kuehne Coverglass/Specimen Forceps | Electron Microscopy Sciences | 72997-07 | |
| Epifluorescence microscope | Zeiss | Discovery.V8 | |
| Mastertop Cellulose Cleaning Scrub Sponge | Amazon | B07CBSM53Z | |
| PBS10X Liquid Conc 4L | EMD Millipore | 6505-4L | |
| Super Fine Micro Scissors, 3 1/4" straight | Biomedical Research Instruments | 11-1020 | |
| Tricaine methanesulfonate | Syndel | TRIC-M-GR-0010 | |
| Tween 20, Fisher BioReagents | Fischer Scientific | BP337-500 |
Referências
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