Este protocolo descreve o procedimento para remover o lobo ventral do fígado em zebrafish adulto para permitir o estudo da regeneração hepática.
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Artigo de método
Hepatectomia Parcial em Zebrafish Adulto
Neste artigo
Resumo
Resumo
A insuficiência hepática é uma das principais causas de morte em todo o mundo, e a mortalidade por doença hepática crônica está aumentando acentuadamente nos Estados Unidos. Fígados saudáveis são capazes de se regenerar de danos tóxicos, mas em doença hepática avançada, a capacidade natural do fígado de se regenerar é prejudicada. Os zebrafish emergiram como um poderoso sistema experimental para estudar a regeneração. São um modelo ideal para estudar a regeneração hepática a partir da hepatectomia parcial, procedimento com relevância clínica direta em que parte do fígado é removida cirurgicamente, deixando o resto intacto. Não há protocolo padrão para hepatectomia parcial; estudos anteriores utilizando este modelo têm usado protocolos ligeiramente diferentes e relatado resultados diferentes. Descrito aqui é um protocolo eficiente e reprodutível para a realização de uma hepatectomia parcial em zebrafish adulto. Usamos esta técnica para demonstrar que os zebrafish são capazes de regeneração epimórfica do lobo ressecado. Este protocolo pode ser usado para interrogar ainda mais os mecanismos necessários para a regeneração hepática em zebrafish.
Introdução
Entre os órgãos sólidos em humanos, o fígado é o único órgão capaz de regenerar1. Isso é crítico, pois o fígado é um órgão essencial, responsável pelas principais funções metabólicas, armazenamento de energia, desintoxicação sanguínea, secreção de proteínas plasmáticas e produção de bile2. Hepatócitos perdidos devido a danos tóxicos ou inflamatórios são substituídos principalmente por divisão dos hepatócitos restantes1. Um modelo experimental clássico para estudar a regeneração hepática é a hepatectomia parcial, onde os lobos individuais do fígado são removidos, deixando os lóbulos restantes intac....
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Protocolo
Os zebrafish foram criados e criados de acordo com os procedimentos padrão. Os experimentos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais do Hospital Brigham e da Mulher (2016N000405). Os zebrafish adultos foram jejuados por 24 horas antes do início do protocolo. A água do sistema refere-se à água em tanques de carcaça de zebrafish na instalação aquática.
1. Preparação e anestesia
- Prepare 0,016% solução tricaine em água do sistema.
ATENÇÃO: Tricaine é um irritante se entrar em contato com os olhos, pele ou trato respiratório. - Prepare uma esponja para segurar zebrafish anestesiado durante o pro....
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Resultados
Para examinar o potencial regenerativo do fígado de zebrafish adulto, realizamos hepatectomia parcial (PHX) em zebrafish adulto. Em geral, foram selecionados adultos grandes (30-40 mm de comprimento), variando de 1,5 a 2,5 anos. Dentro de experimentos individuais, os animais foram selecionados do mesmo tanque, e tinham idade e tamanho compatível. Como controle adequado, utilizamos cirurgias falsas nas quais o animal foi anestesiado e recebeu uma grande incisão na parede do corpo ventral, mas foi recuperado sem remover ne.......
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Discussão
As diferenças anatômicas entre zebrafish e modelos mamíferos para regeneração hepática apresentam desafios únicos à ressecção hepática. O fígado em zebrafish está próximo do coração e do intestino; inadvertidamente danificar qualquer órgão resulta em aumento da mortalidade. O fígado de zebrafish não é encapsulado, tornando mais difícil separar-se do intestino. O fígado recebe sangue rico em nutrientes do intestino através de veias portal. Nos mamíferos, veias que saem do intestino convergem em uma veia portal primária qu.......
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Divulgações
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.
Agradecimentos
I.M.O. é apoiado pela NIAAA (F32AA027135). W.G. é suportado por R01DK090311, R01DK105198, R24OD017870 e pelo Programa Claudia Adams Barr de Excelência em Pesquisa do Câncer. W.G. é um estudioso de Ciências Biomédicas.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Solução aquosa de paraformaldeído a 16%, ciências de | microscopia eletrônica | 15700 | |
| Tubos de centrífuga Falcon de 50 mL, polipropileno, | Corning | estéril 352098 | |
| AS 82/220.R2 PLUS Balança Analítica | Bay State Scale & Sistemas, INC. | WL-104-1051 | |
| Dumont # 55 Fórceps | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| EMS Kuehne Coverglass / Espécime Fórceps | Microscopia Eletrônica Ciências | 72997-07 | |
| Microscópio de epifluorescência | Zeiss | Discovery.V8 | |
| Mastertop Esponja de limpeza de celulose | Amazon | B07CBSM53Z | |
| PBS10X Liquid Conc 4L | EMD Millipore | 6505-4L | |
| , 3 1/4" retos | Instrumentos de Pesquisa Biomédica | 11-1020 | |
| Tricaine metanossulfonato | Syndel | TRIC-M-GR-0010 | |
| Tween 20, Fisher BioReagents | Fischer Scientific | BP337-500 |
Referências
- Michalopoulos, G. K. Principles of liver regeneration and growth homeostasis. Comprehensive Physiology. 3, 485-513 (2013).
- Wang, S., Miller, S. R., Ober, E. A., Sadler, K. C. Making it new again: insight into liver ....
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Reimpressões e permissões
