JoVE Journal > Biology
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Resultados
Discussion
Declarações
Acknowledgements
Materials
Referências
Tadução automática
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Biologia

Oksijene Bağlı Retinopati Fare Modelinde Retina Damarlarının Dinamik Büyümesinin İzlenmesi

Published: April 02, 2021
doi:
10.3791/62410
,
1State Key Laboratory of Ophthalmology, Zhongshan Ophthalmic Center,Sun Yat-Sen University

Summary

Bu protokol, farelerin retinal düz montajlarının hazırlanması ve immünofloresan boyanması ve analizi için ayrıntılı bir yöntemi açıklamaktadır. Floresein fundus anjiyografinin (FFA) fare yavruları ve görüntü işleme için kullanımı da ayrıntılı olarak açıklanmaktadır.

Abstract

Oksijene bağlı retinopati (OIR), prematüre retinopatisi (ROP), proliferatif diyabetik retinopati (PDR) ve retinal ven tıkanıklığı (RVO) dahil olmak üzere iskemik retina hastalıklarında anormal damar büyümesini incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Çoğu OIR çalışması retinal neovaskülarizasyonu belirli zaman noktalarında gözlemler; Bununla birlikte, OIR ile ilişkili damar hastalıklarını anlamak için gerekli olan bir zaman seyri boyunca canlı farelerde dinamik damar büyümesi yeterince çalışılmamıştır. Burada, OIR fare modelinin indüksiyonu için adım adım bir protokol açıklıyoruz, potansiyel tuzakları vurguluyoruz ve immünofloresan boyama kullanarak vazo-obliterasyon (VO) ve neovaskülarizasyon (NV) alanlarını hızlı bir şekilde ölçmek için geliştirilmiş bir yöntem sunuyoruz. Daha da önemlisi, OIR fare modelinde floresein fundus anjiyografi (FFA) yaparak P15’ten P25’e canlı farelerde damar büyümesini izledik. FFA’nın OIR fare modeline uygulanması, damar yeniden büyümesi sırasında yeniden şekillendirme sürecini gözlemlememizi sağlar.

Introduction

Yeni patolojik damarların mevcut retinal damarlardan kaynaklandığı bir durum olarak tanımlanan retinal neovaskülarizasyon (RNV), genellikle retinanın iç yüzeyi boyunca uzanır ve vitreusa (veya bazı koşullar altında subretinal boşluğa) doğru büyür1. Prematüre retinopatisi (ROP), retinal ven tıkanıklığı (RVO) ve proliferatif diyabetik retinopati (PDR)2 dahil olmak üzere birçok iskemik retinopatinin ayırt edici özelliği ve ortak özelliğidir.

Çok sayıda klinik ve deneysel gözlem iskeminin retinal neovaskülarizasyonun ana nedeni olduğunu göstermiştir 3,4. ROP’ta, yenidoğanlar hayatta kalma oranlarını arttırmak için kapalı inkübatörlerde yüksek seviyeli oksijene maruz kalırlar ve bu da vasküler büyümenin durması için önemli bir itici güçtür. Tedavi yapıldıktan sonra, yenidoğanların retinaları nispeten hipoksik bir dönemyaşar 5. RVO’da santral veya dal retinal venlerin tıkanmasında başka durumlar da görülmekte ve PDR2’de mikroanjiyopatinin neden olduğu retinal kılcal damarların hasarı da gözlenmektedir. Hipoksi, vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) gibi anjiyojenik faktörlerin, hipoksiye bağlı faktör-1α (HIF-1α) sinyal yolu aracılığıyla ekspresyonunu arttırır ve bu da vasküler endotel hücrelerini hipoksik alana büyümeye ve yeni damarlar oluşturmaya yönlendirir 6,7.

ROP, preterm bebeklerde bir tür vasküler proliferatif retinopatidir ve retina hipoksisi, retinal neovaskülarizasyon ve fibröz hiperplazi10,11,12 ile karakterize çocukluk çağı körlüğünün önde gelen bir nedeni 8,9’dur. 1950’lerde araştırmacılar, yüksek oksijen konsantrasyonunun prematüre bebeklerin solunum semptomlarını önemli ölçüde iyileştirebileceğini bulmuşlardır13,14. Sonuç olarak, oksijen tedavisi o zamanlar prematüre bebeklerde giderek daha fazla kullanılmaya başlandı15. Bununla birlikte, preterm bebeklerde oksijen tedavisinin yaygın kullanımı ile eş zamanlı olarak, ROP insidansı yıldan yıla artmıştır. O zamandan beri, araştırmacılar oksijeni ROP’a bağladılar ve ROP ve RNV16’nın patogenezini anlamak için çeşitli hayvan modellerini araştırdılar.

İnsanlarda, retinal vaskülatür gelişiminin çoğu doğumdan önce tamamlanırken, kemirgenlerde retinal vaskülatür doğumdan sonra gelişir ve retinal vaskülatürdeki anjiyogenezi incelemek için erişilebilir bir model sistemi sağlar2. Araştırmanın sürekli ilerlemesiyle birlikte, oksijene bağlı retinopati (OIR) modelleri, iskemiye bağlı patolojik anjiyogenezi taklit etmek için önemli modeller haline gelmiştir. OIR modelinin çalışmasında belirli bir hayvan türü yoktur ve model, yavru kedi17, sıçan18, fare19, beagle köpek yavrusu 20 ve zebra balığı21 dahil olmak üzere çeşitli hayvan türlerinde geliştirilmiştir. Tüm modeller, erken retinal gelişim sırasında hiperoksiye maruz kaldıkları ve daha sonra normoksik ortama geri döndükleri aynı mekanizmayı paylaşırlar. Smith ve ark., fare yavrularını 5 gün boyunca P7’den hiperoksiye maruz bırakmanın, merkezi retinada aşırı bir damar regresyonu formuna neden olduğunu ve onları P12’deki oda havasına geri getirmenin, yavaş yavaş vitreus gövdesine doğru büyüyen neovasküler tutamları tetiklediğini gözlemlemiştir19. Bu, Smith modeli olarak da adlandırılan standartlaştırılmış bir OIR fare modeliydi. Connor ve ark. protokolü daha da optimize etti ve 2009 yılında VO (vazo-obliterasyon) ve NV (neovaskülarizasyon) alanını ölçmek için evrensel olarak uygulanabilir bir yöntem sağladı ve bu da model22’nin kabulünü ve kullanımını artırdı. OIR fare modeli, küçük boyutu, hızlı üremesi, net genetik arka planı, iyi tekrarlanabilirliği ve yüksek başarı oranı nedeniyle şu anda hala en yaygın kullanılan modeldir.

Farelerde, retinal vaskülarizasyon doğumdan sonra damarların optik sinir kafasından iç retinaya ora serrata’ya doğru büyümesiyle başlar. Normal retinal gelişim sırasında, ilk retinal damarlar doğum sırasında optik sinir başından filizlenir ve doğum sonrası 7 (P7) 23 civarında çevreye ulaşan genişleyen bir ağ (primer pleksus) oluşturur. Daha sonra damarlar derin bir tabaka oluşturmak, retinaya nüfuz etmek ve insan24’te olduğu gibi iç nükleer tabakanın (INL) etrafında laminer bir ağ oluşturmak için retinaya doğru büyümeye başlar. Üçüncü doğum sonrası haftanın (P21) sonunda, daha derin pleksus gelişimi neredeyse tamamlanır. OIR fare modeli için, hiperoksiye maruz kalma sırasında merkezi bölgedeki çok sayıda olgunlaşmamış vasküler ağın hızlı dejenerasyonu nedeniyle vasküler tıkanıklık her zaman merkezi retinada görülür. Bu nedenle, patolojik neovaskülarizasyonun büyümesi, perfüzyon dışı alanın ve vasküler alanın sınırı olan orta periferik retinada da meydana gelir. Bununla birlikte, insan retina damarları neredeyse doğumdan önce oluşmuştur. Prematüre bebeklere gelince, periferik retina hiperoksiye maruz kaldığında tamamen vaskülarize değildir25,26. Bu nedenle vasküler oklüzyon ve neovaskülarizasyon esas olarak periferik retinada görülür27,28. Bu farklılıklara rağmen, fare OIR modeli, iskemiye bağlı neovaskülarizasyon sırasında ortaya çıkan patolojik olayları yakından özetlemektedir.

OIR modelinin indüksiyonu iki faza ayrılabilir29: faz 1’de (hiperoksi faz), retinal vasküler gelişim, VEGF’deki düşüş ve endotel hücrelerinin apoptozu 24,30’un bir sonucu olarak kan damarlarının tıkanması ve gerilemesi ile durdurulur veya geciktirilir; faz 2’de (hipoksi faz), retinal oksijen kaynağı, nöral gelişim ve homeostaz19,31 için gerekli olan oda hava koşulları29 altında yetersiz kalacaktır. Bu iskemik durum genellikle düzenlenmemiş, anormal neovaskülarizasyon ile sonuçlanır.

Şu anda, yaygın olarak kullanılan modelleme yöntemi alternatif olarak yüksek / düşük oksijene maruz kalmaktadır: Anneler ve yavruları P7’de 5 gün boyunca% 75 oksijene maruz kalmaktadır, ardından P17, OIR fare modeli indüksiyonunun son noktası olankarşılaştırılabilir sonuçlar 22’yi gösterene kadar oda havasında 5 gün beklemektedir. (Şekil 1). ROP’u simüle etmenin yanı sıra, bu iskemi aracılı patolojik neovaskülarizasyon, diğer iskemik retina hastalıklarını incelemek için de kullanılabilir. Bu modelin ana ölçümleri, immünofloresan boyama veya FITC-dekstran perfüzyonu ile retinal düz montajlardan analiz edilen VO ve NV alanının ölçülmesini içerir. Her fare, ölümcül operasyon nedeniyle sadece bir kez incelenebilir. Günümüzde, vasküler regresyon ve patolojik anjiyogenez sürecinde retinal vaskülatürün dinamik değişikliklerini sürekli olarak gözlemlemek için birkaç yöntem vardır32. Bu yazıda, OIR model indüksiyonunun ayrıntılı bir protokolünü, retinal düz montajların analizini ve fareler üzerinde floresein fundus anjiyografi (FFA) iş akışını sunuyoruz ve bu da OIR fare modelinin iki aşamasında vasküler dinamik değişikliklerin daha kapsamlı bir şekilde anlaşılmasına yardımcı olacaktır.

Protocol

Farelerin kullanımını içeren tüm prosedürler, Zhongshan Oftalmik Merkezi, Sun Yat-sen Üniversitesi, Çin’in hayvan deney etik komitesi (yetkili numara: 2020-082) tarafından ve Zhongshan Oftalmik Merkezi Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi’nin onaylanmış kılavuzlarına ve Görme ve Oftalmolojide Araştırma Derneği (ARVO) Oftalmik ve Görme Araştırmalarında Hayvanların Kullanımı Beyanı’na uygun olarak onaylanmıştır. 1. Fare OIR modelinin indüksiyonu Gözleri…

Representative Results

OIR fare modelinde, en önemli ve temel sonuç, VO ve NV alanının nicelleştirilmesidir. P7’den 5 gün boyunca hiperoksi ortamında yaşadıktan sonra, yavruların merkezi retinası en büyük perfüzyon dışı alanı gösterdi. 5 gün içinde hipoksinin uyarılması altında, retinal neovaskülarizasyon yavaş yavaş üretildi ve bu da normal damarları çevreleyen normal damarlardan daha yoğun bir şekilde floresan oldu. P17’den sonra, patolojik neovaskülarizasyonun floresan sinyali, retinanın yeniden şekillenme…

Discussion

Farelerin OIR’ye duyarlılığı birçok faktörden etkilenir. Farklı genetik geçmişe ve suşlara sahip yavrular karşılaştırılamaz. BALB / c albino farelerde, damarlar VO bölgesine hızla yeniden büyür ve önemli ölçüde azalmış neovasküler tutamlar38 ile araştırmaya bazı zorluklar getirir. C57BL/6 farelerde, BALB/cJ fare suşu39,40 ile karşılaştırıldığında fotoreseptör hasarı artmıştır. Aynı şey farklı t…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Laboratuvarımızdan ve Zhongshan Oftalmik Merkezi Oftalmik Hayvan Laboratuvarından tüm üyelere teknik yardımları için teşekkür ederiz. Ayrıca deneysel destek için Prof. Chunqiao Liu’ya teşekkür ederiz. Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı’ndan (NSFC: 81670872; Pekin, Çin), Guangdong Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı, Çin (Hibe No.2019A1515011347) ve Zhongshan Oftalmik Merkezi’ndeki Devlet Anahtar Oftalmoloji Laboratuvarı’ndan Yüksek Düzey hastane inşaatı projesi (Hibe No. 303020103; Guangzhou, Guangdong Eyaleti, Çin).

Materials

1 mL sterile syringe Solarbio YA0550 For preparation of retinal flat mounts and intraperitoneal injection
1× Phosphate buffered saline (PBS) Transgen Biotech  FG701-01 For preparation of retinal flat mounts
2 ml Microcentrifuge Tube Corning MCT-200-C For preparation of retinal flat mounts
48 Well Clear TC-Treated Multiple Well Plates Corning 3548 For preparation of retinal flat mounts
Adhesive microscope slides Various For preparation of retinal flat mounts
Adobe Photoshop CC 2019 Adobe Inc. For image analysis
Carbon dioxide gas Various For sacrifice
Cover slide Various For preparation of retinal flat mounts
Curved forceps World Precision Instruments 14127 For preparation of retinal flat mounts
DAPI staining solution Abcam ab228549 For labeling nucleus on retinal flat mounts
Dissecting microscope Olmpus SZ61 For preparation of retinal flat mounts
Fluorescein sodium Sigma-Aldrich F6377 For in vivo imaging
Fluorescent Microscope  Zeiss AxioImager.Z2 For acquisition of fluorescence images of retinal flat mounts
Fluoromount-G Mounting media SouthernBiotech  0100-01 For preparation of retinal flat mounts
Hydroxypropyl Methylcellulose Maya 89161 For in vivo imaging
Isolectin B4 594 antibody Invitrogen I21413 For labeling retinal vasculature on retinal flat mounts
Mice C57/BL6J GemPharmatech of Jiangsu Province For OIR model induction
Micro dissecting scissors-straight blade World Precision Instruments 503242 For preparation of retinal flat mounts
No.4 straight forceps World Precision Instruments  501978-6 For preparation of retinal flat mounts
Normal donkey serum Abcam ab7475 For preparation of retinal flat mounts
O2 sensor Various For monitoring the level of O2
OxyCycler Biospherix A84XOV For OIR model induction
Paraformaldehyde (PFA) Sigma P6148-1KG For tissue fixation
Pentobarbital sodium Various For anesthesia
Soda lime Various For absorbing excess CO2 in the oxygen chamber
SPECTRALIS HRA+OCT Heidelberg HC00500002 For in vivo imaging
SPSS Statistics 22.0 IBM For statistical analysis
Tansference decloring shaker Kylin-Bell ZD-2008 For preparation of retinal flat mounts
Tissue culture dish (Low attachment) Corning 3261-20EA For preparation of retinal flat mounts
Transfer pipettes Various For preparation of retinal flat mounts
Triton X-100 Sigma-Aldrich  SLBW6818 For preparation of retinal flat mounts
Tropicamide Various For in vivo imaging
ZEN Imaging Software ZEISS For image acquisition and export
DOWNLOAD MATERIALS LIST

Referências

  1. Vavvas, D. G., Miller, J. W. Chapter 26 – Basic Mechanisms of Pathological Retinal and Choroidal Angiogenesis. Retina (Fifth Edition). 1, 562-578 (2013).
  2. Selvam, S., Kumar, T., Fruttiger, M. Retinal vasculature development in health and disease. Progress in Retinal and Eye Research. 63, 1-19 (2018).
  3. Shimizu, K., Kobayashi, Y., Muraoka, K. Midperipheral fundus involvement in diabetic retinopathy. Ophthalmology. 88 (7), 601-612 (1981).
  4. Ashton, N. Retinal vascularization in health and disease: Proctor Award Lecture of the Association for Research in Ophthalmology. American Journal of Ophthalmology. 44 (4), 7-17 (1957).
  5. Hellström, A., Smith, L. E., Dammann, O. Retinopathy of prematurity. Lancet. 382 (9902), 1445-1457 (2013).
  6. Xu, Y., et al. Melatonin attenuated retinal neovascularization and neuroglial dysfunction by inhibition of HIF-1α-VEGF pathway in oxygen-induced retinopathy mice. Journal of Pineal Research. 64 (4), 12473 (2018).
  7. Cavallaro, G., et al. The pathophysiology of retinopathy of prematurity: an update of previous and recent knowledge. Acta Ophthalmologica. 92 (1), 2-20 (2014).
  8. Gilbert, C., Rahi, J., Eckstein, M., O’Sullivan, J., Foster, A. Retinopathy of prematurity in middle-income countries. Lancet. 350 (9070), 12-14 (1997).
  9. Chen, J., Smith, L. E. Retinopathy of prematurity. Angiogenesis. 10 (2), 133-140 (2007).
  10. Fielder, A., Blencowe, H., O’Connor, A., Gilbert, C. Impact of retinopathy of prematurity on ocular structures and visual functions. Archives of Disease in Childhood. Fetal and Neonatal Edition. 100 (2), 179-184 (2015).
  11. Moshfeghi, D. M. Presumed transient reactive astrocytic hyperplasia in immature retina. Retina. 26, 69-73 (2006).
  12. Kandasamy, Y., Hartley, L., Rudd, D., Smith, R. The association between systemic vascular endothelial growth factor and retinopathy of prematurity in premature infants: a systematic review. British Journal of Ophthalmology. 101 (1), 21-24 (2017).
  13. Shah, P. K., et al. Retinopathy of prematurity: Past, present and future. World Journal of Clinical Pediatrics. 5 (1), 35-46 (2016).
  14. Kinsey, V. E. Retrolental fibroplasia; cooperative study of retrolental fibroplasia and the use of oxygen. AMA Archives of Ophthalmology. 56 (4), 481-543 (1956).
  15. Tin, W., Gupta, S. Optimum oxygen therapy in preterm babies. Archives of Disease in Childhood. Fetal and Neonatal Edition. 92 (2), 143-147 (2007).
  16. Liu, C. H., Wang, Z., Sun, Y., Chen, J. Animal models of ocular angiogenesis: from development to pathologies. FASEB Journal : Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 31 (11), 4665-4681 (2017).
  17. Ashton, N., Ward, B., Serpell, G. Effect of oxygen on developing retinal vessels with particular reference to the problem of retrolental fibroplasia. The British Journal of Ophthalmology. 38 (7), 397-432 (1954).
  18. Penn, J. S., Tolman, B. L., Lowery, L. A. Variable oxygen exposure causes preretinal neovascularization in the newborn rat. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 34 (3), 576-585 (1993).
  19. Smith, L. E., et al. Oxygen-induced retinopathy in the mouse. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 35 (1), 101-111 (1994).
  20. McLeod, D. S., Brownstein, R., Lutty, G. A. Vaso-obliteration in the canine model of oxygen-induced retinopathy. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 37 (2), 300-311 (1996).
  21. Cao, R., Jensen, L. D., Söll, I., Hauptmann, G., Cao, Y. Hypoxia-induced retinal angiogenesis in zebrafish as a model to study retinopathy. PLoS One. 3 (7), 2748 (2008).
  22. Connor, K. M., et al. Quantification of oxygen-induced retinopathy in the mouse: a model of vessel loss, vessel regrowth and pathological angiogenesis. Nature Protocols. 4 (11), 1565-1573 (2009).
  23. Fruttiger, M. Development of the mouse retinal vasculature: angiogenesis versus vasculogenesis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 43 (2), 522-527 (2002).
  24. Stahl, A., et al. The mouse retina as an angiogenesis model. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 51 (6), 2813-2826 (2010).
  25. Rivera, J. C., et al. Ischemic retinopathies: oxidative stress and inflammation. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2017, 3940241 (2017).
  26. Bashinsky, A. L. Retinopathy of prematurity. North Carolina Medical Journal. 78 (2), 124-128 (2017).
  27. Flynn, J. T., et al. Retinopathy of prematurity. Diagnosis, severity, and natural history. Ophthalmology. 94 (6), 620-629 (1987).
  28. Aguilar, E., et al. Chapter 6. Ocular models of angiogenesis. Methods in Enzymology. 444, 115-158 (2008).
  29. Liegl, R., Priglinger, C., Ohlmann, A. Induction and readout of oxygen-induced retinopathy. Methods in Molecular Biology. 1834, 179-191 (2019).
  30. Lutty, G. A., McLeod, D. S. Retinal vascular development and oxygen-induced retinopathy: a role for adenosine. Progress in Retinal and Eye Research. 22 (1), 95-111 (2003).
  31. Vähätupa, M., et al. Oxygen-induced retinopathy model for ischemic retinal diseases in rodents. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (163), (2020).
  32. Kim, C. B., D’Amore, P. A., Connor, K. M. Revisiting the mouse model of oxygen-induced retinopathy. Eye and Brain. 8, 67-79 (2016).
  33. Gammons, M. V., Bates, D. O. Models of oxygen induced retinopathy in rodents. Methods in Molecular Biology. 1430, 317-332 (2016).
  34. Xiao, S., et al. Fully automated, deep learning segmentation of oxygen-induced retinopathy images. Journal of Clinical Investigation Insight. 2 (24), (2017).
  35. McLeod, D. S., D’Anna, S. A., Lutty, G. A. Clinical and histopathologic features of canine oxygen-induced proliferative retinopathy. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 39 (10), 1918-1932 (1998).
  36. Penn, J. S., Johnson, B. D. Fluorescein angiography as a means of assessing retinal vascular pathology in oxygen-exposed newborn rats. Current Eye Research. 12 (6), 561-570 (1993).
  37. Mezu-Ndubuisi, O. J., et al. In vivo retinal vascular oxygen tension imaging and fluorescein angiography in the mouse model of oxygen-induced retinopathy. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 54 (10), 6968-6972 (2013).
  38. Zeilbeck, L. F., Müller, B., Knobloch, V., Tamm, E. R., Ohlmann, A. Differential angiogenic properties of lithium chloride in vitro and in vivo. PLoS One. 9 (4), 95546 (2014).
  39. Walsh, N., Bravo-Nuevo, A., Geller, S., Stone, J. Resistance of photoreceptors in the C57BL/6-c2J, C57BL/6J, and BALB/cJ mouse strains to oxygen stress: evidence of an oxygen phenotype. Current Eye Research. 29 (6), 441-447 (2004).
  40. Zhang, Q., Zhang, Z. M. Oxygen-induced retinopathy in mice with retinal photoreceptor cell degeneration. Life Sciences. 102 (1), 28-35 (2014).
  41. Okamoto, N., et al. Transgenic mice with increased expression of vascular endothelial growth factor in the retina: a new model of intraretinal and subretinal neovascularization. The American Journal of Pathology. 151 (1), 281-291 (1997).
  42. Ohlmann, A., et al. Norrin promotes vascular regrowth after oxygen-induced retinal vessel loss and suppresses retinopathy in mice. The Journal of Neuroscience. 30 (1), 183-193 (2010).
  43. Fang, L., Barber, A. J., Shenberger, J. S. Regulation of fibroblast growth factor 2 expression in oxygen-induced retinopathy. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 56 (1), 207-215 (2014).
  44. Chan, C. K., et al. Differential expression of pro- and antiangiogenic factors in mouse strain-dependent hypoxia-induced retinal neovascularization. Laboratory Investigation. 85 (6), 721-733 (2005).
  45. Stahl, A., et al. Postnatal weight gain modifies severity and functional outcome of oxygen-induced proliferative retinopathy. The American Journal of Pathology. 177 (6), 2715-2723 (2010).
  46. Vanhaesebrouck, S., et al. Association between retinal neovascularization and serial weight measurements in murine and human newborns. European Journal of Ophthalmology. 23 (5), 678-682 (2013).
  47. Gerschman, R., Nadig, P. W., Snell, A. C., Nye, S. W. Effect of high oxygen concentrations on eyes of newborn mice. The American Journal of Physiology. 179 (1), 115-118 (1954).
  48. Lange, C., et al. Kinetics of retinal vaso-obliteration and neovascularisation in the oxygen-induced retinopathy (OIR) mouse model. Graefe’s Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 247 (9), 1205-1211 (2009).
  49. Huang, S., et al. Comparison of dextran perfusion and GSI-B4 isolectin staining in a mouse model of oxygen-induced retinopathy. Eye Science. 30 (2), 70-74 (2015).
  50. Paques, M., et al. Panretinal, high-resolution color photography of the mouse fundus. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 48 (6), 2769-2774 (2007).
  51. Fletcher, E. L., et al. Animal models of retinal disease. Progress in Molecular Biology and Translational Science. 100, 211-286 (2011).

Tags

Retinal VesselsOxygen-induced RetinopathyMouse ModelRetinal Whole MountingRetinal VasculatureRetinal SeparationEye Dissection
check_url/pt/62410?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Citar este artigo
Ma, Y., Li, T. Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model. J. Vis. Exp. (170), e62410, doi:10.3791/62410 (2021).
Baixar citação
Reimpressões e Permissões

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image