Este artigo descreve uma técnica de manuseio em camundongos, a técnica de manuseio 3D, que facilita o manuseio rotineiro reduzindo comportamentos semelhantes à ansiedade e apresenta detalhes sobre duas técnicas relacionadas existentes (manuseio de túneis e caudas).
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Artigo de método
Técnicas de manuseio para reduzir o estresse em camundongos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Animais de laboratório são submetidos a múltiplas manipulações por cientistas ou prestadores de cuidados com animais. O estresse que isso causa pode ter efeitos profundos no bem-estar animal e também pode ser um fator de confusão para variáveis experimentais, como medidas de ansiedade. Ao longo dos anos, técnicas de manuseio que minimizam o estresse relacionado ao manuseio foram desenvolvidas com um foco especial em ratos, e pouca atenção aos ratos. No entanto, foi demonstrado que os ratos podem ser habituados a manipulações usando técnicas de manuseio. Habituar camundongos ao manuseio reduz o estresse, facilita o manuseio de rotina, melhora o bem-estar animal, diminui a variabilidade dos dados e melhora a confiabilidade experimental. Apesar dos efeitos benéficos do manuseio, a abordagem de captação de cauda, que é particularmente estressante, ainda é amplamente utilizada. Este artigo fornece uma descrição detalhada e demonstração de uma técnica recém-desenvolvida de manuseio de camundongos destinada a minimizar o estresse experimentado pelo animal durante a interação humana. Esta técnica manual é realizada ao longo de 3 dias (técnica de manuseio 3D) e foca na capacidade do animal de habituar ao experimentador. Este estudo também mostra o efeito das técnicas previamente estabelecidas de manuseio de túneis (usando um túnel de policarbonato) e da técnica de captação de cauda. Especificamente estudados são seus efeitos sobre comportamentos semelhantes à ansiedade, usando testes comportamentais (Elevated-Plus Maze e Novelty Suppressed Feeding), interação voluntária com experimentadores e medição fisiológica (níveis de corticosterona). A técnica de manuseio 3D e a técnica de manuseio do túnel reduziram fenótipos semelhantes à ansiedade. No primeiro experimento, usando camundongos machos de 6 meses de idade, a técnica de manuseio 3D melhorou significativamente a interação dos experimentadores. No segundo experimento, usando fêmea de 2,5 meses, reduziu os níveis de corticosterona. Como tal, o manuseio 3D é uma abordagem útil em cenários onde a interação com o experimentador é necessária ou preferida, ou onde o manuseio do túnel pode não ser possível durante o experimento.
Introdução
Camundongos e ratos são ativos essenciais para estudos pré-clínicos1,2 para múltiplos fins, incluindo estudos endocrinas, fisiológicos, farmacológicos ou comportamentais2. A partir do crescente número de estudos envolvendo animais, surgiu que variáveis ambientais descontroladas, incluindo a interação humana, influenciam vários desfechos em pesquisas biomédicas3,4,5. Isso é responsável pela variabilidade significativa observada em experimentos e laboratórios de pesquisa4,....
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Protocolo
Os procedimentos envolvendo os animais foram aprovados pelo comitê de cuidados com animais do CAMH e realizados em conformidade com as diretrizes do Conselho Canadense de Cuidados com Animais.
NOTA: O método de manuseio aqui descrito pode ser usado em várias cepas de camundongos, incluindo linhas não transgênicas (C57/BL6, BalbC, CD1, SV129, etc.) e linhas transgênicas. Também pode ser usado com camundongos jovens ou velhos, observando que camundongos adultos jovens (4-6 semanas de idade) tendem a ser um pouco mais ativos do que ratos adultos ou velhos, especialmente no primeiro dia.
1. Preparação experimental
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Resultados
Dois estudos separados foram realizados com camundongos C57BL/6. O estudo #1 incluiu homens de 6 meses de idade e #2 de estudo incluiu mulheres de 2,5 meses de idade (N=36/estudo) dos Laboratórios Jackson (Cat #000664). Os ratos chegaram à instalação aos 2 meses de idade. Enquanto o Estudo #2 fêmeas foram tratadas e testadas duas semanas após a chegada, o Estudo #1 os machos só foram tratados e testados aos 6 meses de idade (atraso devido à paralisação pandêmica global). Durante esse tempo, um rato de Study #2 morreu, an.......
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Discussão
Este estudo e o desenvolvimento de métodos baseiam-se na observação de que as técnicas de manuseio em camundongos ainda são negligenciadas pela comunidade científica, e que alguns laboratórios ainda estão relutantes em implementar técnicas de habitação ou manuseio para reduzir o estresse e a reatividade de seus animais antes dos experimentos. Ao mesmo tempo em que representa um compromisso de tempo, o manejo animal proporciona efeitos benéficos aos animais que podem contribuir para o sucesso dos experimentos a serem real.......
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Divulgações
Os autores não têm conflito de interesses para divulgar.
Agradecimentos
Os autores agradecem ao Comitê de Cuidados Com Animais da CAMH por apoiar este trabalho, bem como aos cuidadores de animais do CAMH que forneceram amplo feedback sobre a utilidade do procedimento, motivando a execução dos experimentos descritos e a apresentação do protocolo detalhado para outros usuários. Este trabalho foi parcialmente financiado pelo CAMH BreakThrough Challenge, concedido ao TP, e por fundos internos da CAMH.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 23 G x 1 pol. Agulha hipodérmica estéril de uso geral BD PrecisionGlide. Tipo de parede regular e chanfro regular. | BD | 2546-CABD305145 | Agulhas para coleta de sangue |
| BD Vacutainer® Coleta de Sangue Venoso Tubos EDTA com Lavanda BD Hemogard™ fechamento, 2,0 ml (13x75 mm), 100 / pk | BD | 367841 | Tubos revestidos com EDTA para coleta de sangue |
| Leito' o espigas ¼ ” Cama para animais de laboratório de espiga de milho | Bed-O-Cobs | BEDO1/4 | Roupa de cama nova para alimentação suprimida de novidade |
| Centrífuga | Eppendorf | Centrífuga 5424 R | Para centrifugação de sangue. |
| Kit Corticosterona ELISA | Arbor Assays | K003-H1W | |
| Câmera Digital | Panasonic | HC-V770 | Câmera para gravar interações EPM/Experimenter |
| Labirinto Elevado Plus | Home Made | n/a | Labirinto personalizado feito de quatro braços de acrílico preto (dois braços abertos (29 cm de comprimento por 7 cm de largura) e dois braços fechados (29 cm de comprimento x7 cm de largura com paredes de 16 cm de altura)) que formam uma forma de cruz com os dois braços abertos opostos um ao outro mantido a 55 cm acima do chão |
| Etanol | Medstore House Marca | 39753-P016-EA95 | Diluir a 70% com água destilada, para limpeza |
| Ethovision XT 15 | Noldus | n/a | Software automatizado de rastreamento de animais |
| Dieta de roedores de laboratório | LabDiet | Dieta de roedores 5001 | Dieta padrão de roedores |
| Cartão de memória | Kingstone Technology | SDA3/64GB | Para gravação de vídeo e a |
| novidade suprimiu a novidade que alimenta | a câmara feita em casa | n/a | câmara feita sob encomenda do teste do plexiglás com assoalhos e paredes desobstruídos 62cm por muito tempo, por 31cm largamente por 40cm altos. |
| Tubos de carbonato de parlicarbonato caseiros | n/a | 13 cm de comprimento e 5 cm de diâmetro | |
| Purina Yesterday' s notícias jornal reciclado roupa de cama | Purina | n / a | Espectrofotômetro de cama padrão |
| Biotek | Epoch Microplate Reader |
Referências
- Deacon, R. M. Housing, husbandry and handling of rodents for behavioral experiments. Nature Protocols. 1 (2), 936(2006).
- Bryda, E. C. The Mighty Mouse: the impact of rodents on advances in biomedical research. Missouri Medicine. 110
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Reimpressões e permissões
