A terapia gênica miocárdica para cardiopatia isquêmica é uma grande promessa para futuras terapêuticas. Aqui, apresentamos um modelo animal de grande porte para avaliar a eficácia da terapia gênica no coração isquêmico.
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Artigo de método
Modelo animal de grande porte para avaliação da eficácia da terapia gênica em coração isquêmico
Neste artigo
Resumo
Resumo
A doença arterial coronariana é uma das principais causas de mortalidade e morbidade no mundo. Apesar da progressão da terapêutica atual, uma proporção considerável de pacientes com doença arterial coronariana permanece sintomática. A angiogênese terapêutica mediada por terapia gênica oferece um novo método terapêutico para melhorar a perfusão miocárdica e aliviar os sintomas. A terapia gênica com diferentes fatores angiogênicos tem sido estudada em poucos ensaios clínicos. Devido à novidade do método, o progresso da terapia gênica miocárdica é um caminho contínuo da bancada até a beira do leito. Portanto, modelos animais de grande porte são necessários para avaliar a segurança e eficácia. Quanto mais o modelo animal de grande porte identifica a doença original e os desfechos usados em clínicas, mais previsíveis são os resultados dos ensaios clínicos. Aqui, apresentamos um modelo animal de grande porte para avaliar a eficácia da terapia gênica no coração isquêmico suíno. Utilizamos métodos de imagem clinicamente relevantes, como ultrassonografia e 15H2O-PET. Para direcionar as transferências gênicas para a área desejada, o mapeamento eletroanatômico é usado. O objetivo desse método é: (1) mimetizar a doença arterial coronariana crônica, (2) induzir angiogênese terapêutica em áreas hipóxicas do coração e (3) avaliar a segurança e eficácia da terapia gênica usando desfechos relevantes.
Introdução
A doença arterial coronariana é responsável pela grande proporção da mortalidade e carga de doença em todo omundo1. As estratégias atuais de tratamento são intervenções percutâneas, tratamento farmacológico e cirurgia de revascularização do miocárdio2. No entanto, apesar da progressão dessas terapêuticas atuais, muitos pacientes sofrem da chamada angina refratária, reforçando a necessidade não atendida de novas abordagens de tratamento3. A angiogênese terapêutica mediada pela terapia gênica poderia ter como alvo esse grupo de pacientes.
A terapia gênica miocárdica é mai....
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Protocolo
Os experimentos aqui apresentados são realizados com porcos domésticos fêmeas com cerca de 10 semanas de idade e são aprovados pelo Animal Experiment Board na Finlândia. Os animais pesam de 30 a 40 kg no início do protocolo, permitindo o mesmo equipamento de procedimento e modalidades de imagem possíveis para humanos. A isquemia crônica é induzida 14 dias antes da transferência gênica, e o tempo de seguimento após a transferência gênica depende do vetor viral utilizado. O protocolo do estudo é mostrado na Figura 1. Esse protocolo pode ser usado para realizar injeções de terapia gênica mediada por adenovírus ou AAV. O tempo de coleta da am....
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Resultados
O sucesso da operação de isquemia pode ser confirmado com esse protocolo por angiografia coronariana e pela determinação da área hipocinética por ultrassonografia transtorácica (Figura 1) antes de proceder à liberação do gene. O estado de oclusão coronariana pode ser avaliado por angiografia coronariana, e o mapeamento eletroanatômico assegura as áreas isquêmicas e hibernantes.
A eficácia da terapia gênica pode ser analisada medindo-se o strain circunferencial, a .......
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Discussão
Os tempos deste protocolo podem ser modificados de acordo com o vetor viral utilizado. Além disso, as análises imuno-histológicas podem ser selecionadas de acordo com o gene terapêutico. Também é possível adicionar mais pontos de tempo e pontos de extremidade ao protocolo, se necessário.
Esse protocolo é composto por etapas, que são essenciais para o sucesso e impossíveis de corrigir posteriormente. Primeiro, se não se induzir isquemia adequada, o animal deve ser excluído de outros procediment.......
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Divulgações
Os autores declaram não haver conflitos de interesse.
Agradecimentos
Os autores gostariam de agradecer a Maria Hedman, Tiina Laitinen, Tomi Laitinen, Pekka Poutiainen, Annika Viren e Severi Sormunen pela assistência e permissão de 15imagens de O-PET no Hospital Universitário de Kuopio; e Heikki Karhunen, Minna Törrönen e Riikka Venäläinen do National Laboratory Animal Center por sua assistência no trabalho com animais.
Este estudo é apoiado por bolsas da Academia Finlandesa, ERC e CardioReGenix EU Horizon 2020.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 1% PFA | VWR | VWRC28794.295 | Preparado a partir de paraformaldeído em pó |
| 15% de sacarose | VWR | VWRC27480.294 | Preparado a partir de sacarose sólida |
| 4% PFA | VWR | VWRC28794.295 | Preparado a partir de paraformaldeído em pó |
| Cateter pigtail 5 F | Cordis | 534-550S | |
| Cateter 6 F AR2 | Cordis | 670-112-00 | |
| Bainha introdutora 6 F | Cordis | 504-606X | |
| Bainha introdutora 8 F | Cordis | 504-608X | |
| Ácido | Produtor variável | ||
| Amiodarona | Produtor variável | ||
| Estação angiográfica | GE Healthcare | ||
| Conjunto de angiolaboratório | Mö lnlycke | projetado para as necessidades de nosso angiolaboratório, contém campos estéreis, copos e cotonetes | |
| Bisoprolol | Produtor variável | ||
| Cefuroxima | Produtor variável | ||
| Clopidogrel | Produtor variável | ||
| Stent Coroflex Blue | B.Braun Medical | 5029012 | O número de catálogo depende do tamanho do stent |
| Crile fórceps | |||
| Ciclotron | GE Healthcare | ||
| Dobutamina | Produtor variável | ||
| Sistema de mapeamento eletroanatômico | Biologics Delivery Systems, Johnson & Empresa | ||
| Enoxaparina | Produtor variável | ||
| Fentanil | Produtor variável | ||
| Cateter de injeção intramiocárdica | Johnson & Johnson | ||
| Agente de contraste de iodo | Iomeron | ||
| Faca | de cozinha Produtor variável | ||
| Lidocaína | Produtor variável | ||
| Nitrogênio | Produtor variável | ||
| MgSO4 | Produtor variável | ||
| Agulha 18 G | Cordis | 12-004943 | |
| Bomba | |||
| PET-CT scanner | Siemens Healthcare Tubo | ||
| politetrafluoretileno | |||
| Propofol | Produtor variável | ||
| Bisturi nº 11 | VWR | SWAN0503 | |
| Dinitrato sublingual | Takeda | ||
| Máquina de ultrassom | Philips |
Referências
- Naghavi, M., et al. Global, regional, and national age-sex specifc mortality for 264 causes of death, 1980-2016: A systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016. Lancet. 390 (10100), 1151-1210 (2017).
- Knuuti, J., et al.
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Reimpressões e permissões
