In vivo Métodos para avaliar a função e estrutura do gânglio de gânglios da retina e da estrutura em animais grandes

Resumo

Aqui demostramos vários testes in vivo (flash visual evocado potencial, eletroretinograma padrão e tomografia de coerência óptica) em cabra e macaque rhesus para entender a estrutura e função do nervo óptico e seus neurônios.

Resumo

O nervo óptico coleta sinais de axônios das células gânglios da retina e transmite sinal visual para o cérebro. Grandes modelos animais de lesão do nervo óptico são essenciais para traduzir novas estratégias terapêuticas desde modelos de roedores até aplicação clínica devido às suas semelhanças mais próximas com os humanos em tamanho e anatomia. Aqui descrevemos alguns métodos in vivo para avaliar a função e estrutura das células gânglios da retina (RGCs) e nervo óptico (ON) em animais de grande porte, incluindo potencial visual evocado (VEP), eletroretinograma padrão (PERG) e tomografia de coerência óptica (OUT). Tanto o primata de cabra quanto o não-humano foram empregados neste estudo. Ao apresentar esses métodos in vivo passo a passo, esperamos aumentar a reprodutibilidade experimental entre diferentes laboratórios e facilitar o uso de grandes modelos animais de neuropatias ópticas.

Introdução

O nervo óptico (ON), que consiste em axônios das células gânglios da retina (RGC), transmite sinal visual da retina para o cérebro. Doenças on, como glaucoma, neuropatia óptica traumática ou isquêmica, muitas vezes causaram degeneração irreversível on/RGC e perda visual devastadora. Embora existam atualmente muitos avanços na regeneração ON e na proteção do RGC em modelos de roedores1,2,3,4,5,6, os tratamentos clínicos para a maioria das doenças ON permaneceram essencialmente os mesmos ao longo do último meio século com resultados insatisfatórios7,8

Protocolo

Os experimentos foram realizados estritamente de acordo com as diretrizes da ARRIVE e o guia dos Institutos Nacionais de Saúde para o cuidado e uso de animais de laboratório, e seguem os protocolos aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais na Universidade Médica de Wenzhou (WMU) e pelo Laboratório Joinn (Suzhou). As cabras Saanen machos, com idades entre 4 e 6 meses com peso de 19 a 23 kg, estavam alojadas na instalação de animais da OMH. Os macaques Rhesus machos, com idades entre 5 e 6 anos com peso de 5 a 7 kg, estavam alojados na instalação de animais de Joinn. Todos os animais foram mantidos em uma sala climatizado com temperatura controlad....

Resultados

Figura 1A mostra resultados representativos da FVEP em cabra. Embora as formas de onda na mesma intensidade flash tenham relativa semelhança, ainda recomendamos examinar as formas de onda duas vezes. Ondas eletromagnéticas geradas por dispositivos eletrônicos interferirão com os sinais elétricos coletados, resultando em alto ruído de linha de base e baixa repetibilidade da forma de onda. Portanto, recomenda-se garantir que não haja dispositivos eletrônicos redundantes conectados ao ambiente .......

Discussão

Neste estudo, apresentamos um protocolo de VEP, PERG e OCT em cabra e rhesus macaque. Esses métodos in vivo podem ser aplicados em grandes modelos animais de várias neuropatias ópticas, como glaucoma, neuropatia isquêmica ou óptica traumática e neurite ^óptica9.

PvEP é mais estável e sensível que o ^FVEP17; no entanto, não pode ser provocado em ^cabra9. Como tal, a FVEP é realizada em cabra e pvep é realizada em rhes.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Monitores de 47,6 x 26,8 cm	DELL Inc.	E2216HV	Os estímulos visuais de tabuleiros de xadrez preto-branco de reversão de contraste foram exibidos em telas tubo
traqueal de 6,0 mm	Henan Tuoren Medical Device Co., Ltd	PVC 6.0	garantir o
clipe
atropina	Guangdong Jieyang Longyang Animal pharmaceutical Co., Ltd.		reduzir a secreção brônquica e proteger o coração da ativação do nervo vago
Carbomer Eye Gel	Fabrik GmbH Subsidiária da Bausch & Lomb		umedecer a córnea e estabilizar os eletrodos de registro Eletrodos
de gravação ERG-Jet	Roland Consult Stasche& Finger GmbH	2300 La Chaux-De-Fonds	ERG espéculo ocular de gravação
	Shanghai Jinzhong Medical Device Co., Ltd	ZYD020	fissura palpebral aberta
Heidelberg Spectralis OCT system	Heidelberg Engineering		OCT system
Imaging			( https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf)
isoflurano	RWD Life Science Co., Ltd	R510-22	isoflurano anestesia
cabras Saanen machos	Caimu Livestock Company, país (Hangzhou, China)		As cabras Saanen machos, com idade entre 4 e 6 meses com peso de 19–
Eléctrodo de agulha	Roland Consult Stasche& Uso de Finger GmbH	U51-426-G-D	para eletrodo de aterramento FVEP e eletrodos de referência PERG
cateter venoso periférico por via intravenosa	BD shanghai Medical Device Co., Ltd	383019	acesso intravenoso para atropina e propofol
propofol	Xian Lipont Enterprise Union Management Co., Ltd.		induzir anestesia de isoflurano em
cabra Tropicamida Phenylephrine Eye Drops	SANTEN OY, Japão		5% tropicamida e 5% cloridrato de fenilefrina
dispositivo de eletrofisiologia visual	Gotec Co., Ltd	Uso GT-2008V-III	para FVEP & Produtos Co
. da saúde animal de Huamu do	xilazine		anestesia com xilazina: injeção intramuscular de xilazina 3mg/kg
zoletil50	Virbac		induz anestesia com isoflurano em macaco

jacaré das vias aéreas de 23 kg de PERG, Ltd.