Modelo de sangramento da transeção da veia da cauda em hemofilia totalmente anestesiada um camundongo

Ariadna Carol Illa; Sarah Baumgarten; Dennis Danielsen; Karin Larsen; Torben Elm; Peter B. Johansen; Tom Knudsen; Brian Lauritzen; Mikael Tranholm; Carsten  D. Ley

doi:10.3791/62952

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Artigo de método

Modelo de sangramento da transeção da veia da cauda em hemofilia totalmente anestesiada um camundongo

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DOI:

10.3791/62952

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30 de setembro de 2021

Ariadna Carol Illa¹^,² , Sarah Baumgarten¹ , Dennis Danielsen¹ , Karin Larsen³ , Torben Elm¹ , Peter B. Johansen⁴ , Tom Knudsen⁵ , Brian Lauritzen¹ , Mikael Tranholm⁶ , Carsten D. Ley¹

¹Global Drug Discovery, Novo Nordisk A/S, ²Department of Veterinary and Animal Sciences, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, ³Department of Biomedical Sciences, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, ⁴Independent consultant, ⁵Catalyst Biosciences, ⁶Værløse Dyreklinik

Neste artigo

Resumo

O modelo de sangramento de veia traseira refinada (TVT) em camundongos anestesiados é um método in vivo sensível para a avaliação do sangramento hemofílico. Este modelo de sangramento otimizado da TVT usa perda de sangue e tempo de sangramento como pontos finais, refinando outros modelos e evitando a morte como ponto final.

Resumo

Modelos de sangramento de cauda são ferramentas importantes na pesquisa de hemofilia, especificamente para a avaliação de efeitos procoagulantes. O modelo de sobrevivência da veia traseira (TVT) tem sido preferido em muitas configurações devido à sensibilidade a doses clinicamente relevantes de FVIII, enquanto outros modelos estabelecidos, como o modelo de clipe de cauda, requerem níveis mais elevados de compostos procoagulantes. Para evitar o uso da sobrevivência como ponto final, desenvolvemos um modelo de TVT estabelecendo perda de sangue e tempo de sangramento como pontos finais e anestesia completa durante todo o experimento. Brevemente, camundongos anestesiados são posicionados com a cauda submersa em soro fisiológico temperado (37°C) e dosados com o composto de teste na veia lateral direita da cauda. Após 5 minutos, a veia lateral esquerda é transectada usando um guia de modelo, a cauda é devolvida ao soro fisiológico, e todos os episódios de sangramento são monitorados e registrados por 40 minutos durante a coleta do sangue. Se não ocorrer sangramento em 10 min, 20 min ou 30 min após a lesão, o coágulo é desafiado suavemente limpando o corte duas vezes com um cotonete de gaze molhada. Após 40 min, a perda de sangue é quantificada pela quantidade de hemoglobina sangrada no soro fisiológico. Este procedimento rápido e relativamente simples resulta em sangramentos consistentes e reprodutíveis. Em comparação com o modelo de sobrevivência da TVT, utiliza um procedimento mais humano sem comprometer a sensibilidade à intervenção farmacológica. Além disso, é possível utilizar ambos os sexos, reduzindo o número total de animais que precisam ser criados, em adesão aos princípios das 3R's. Uma limitação potencial nos modelos sanguíneos é a natureza estocástica da hemostase, que pode reduzir a reprodutibilidade do modelo. Para combater isso, a interrupção manual do coágulo garante que o coágulo seja desafiado durante o monitoramento, impedindo que a hemostasia primária (plaqueta) pare de sangrar. Esta adição ao catálogo de modelos de lesão hemorrágida fornece uma opção para caracterizar efeitos procoagulantes de forma padronizada e humana.

Introdução

Modelos animais são essenciais para compreender a patogênese da hemofilia e desenvolver e testar regimes e terapias de tratamento. O rato-nocaute Fator VIII (F8-KO) é um modelo amplamente utilizado para o estudo da hemofilia A ^1,2. Esses camundongos recapitulam características-chave da doença e têm sido amplamente utilizados para o desenvolvimento de tratamentos, como produtos FVIII recombinantes ^3,4,5 e estratégias de terapia genética ^6,7.