Aqui, é apresentado um protocolo para a triagem eficiente e precisa dos genótipos do tabaco para resistência à Phytophthora nicotianae em mudas. Trata-se de uma abordagem prática para a reprodução de precisão, bem como para a pesquisa de mecanismos moleculares.
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Artigo de método
Triagem de Genótipos de Tabaco para Resistência de Phytophthora nicotianae
Neste artigo
Resumo
Resumo
A haste preta, causada pelos oomycetes Phytophthora nicotianae, é destrutiva para o tabaco, e este patógeno é altamente patogênico para muitas culturas solanáceos. P. nicotianae é bem adaptado a altas temperaturas; portanto, a pesquisa sobre esse patógeno está ganhando importância na agricultura mundial por causa do aquecimento global. As variedades resistentes à p. nicotianae de plantas de tabaco são comumente rastreadas pela inoculação com grãos de aveia colonizados por P. nicotianae e monitoramento dos sintomas da doença. No entanto, é difícil quantificar a intensidade da inoculação, uma vez que a inoculação precisa é crucial neste caso. Este estudo teve como objetivo desenvolver um método eficiente e confiável para avaliar a resistência do tabaco à infecção com P. nicotianae. Este método tem sido usado com sucesso para identificar variedades resistentes, e a eficiência da inoculação foi confirmada por PCR em tempo real. O método de avaliação de resistência apresentado neste estudo é eficiente e prático para a reprodução de precisão, bem como para a pesquisa de mecanismos moleculares.
Introdução
P. nicotianae é destrutivo para muitas culturas solanáceas. Pode causar tabaco "pernil preto"1, batata foliar e tuber rot2, tomate e pimenta doce coroa e raiz rot3, e goji colar e raiz rot4. P. nicotianae pode atacar todas as partes das plantas de tabaco, incluindo as raízes, caules e folhas em qualquer estágio de crescimento5. O sintoma mais comum da doença é a base negra do talo. As raízes são inicialmente visíveis como encharcadas de água e depois tornam-se necrosadas, e as folhas apresentam grandes lesões circu....
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Protocolo
1. Materiais
- Obter variedades de tabaco.
NOTA: Para este experimento "Beinhart1000-1" (uma seleção de Beinhart 1000) (BH) e "Xiaohuangjin1025" (XHJ) foram obtidos do Genbank Nacional de Médio Prazo do Recurso de Germplasma do Tabaco da China. BH é resistente, enquanto XHJ é suscetível à infecção por P. nicotianae16. Um isolamento de campo da P. nicotianae race 0, que foi preservada no Instituto de Pesquisa do Tabaco da Academia Chinesa de Ciências Agrícolas, foi usado para todas as vacinas ao longo do estudo.
2. Plantio de genótipos de tabaco para avaliação ....
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Resultados
Plantas de 4 semanas de idade da variedade resistente BH e variedade suscetível XHJ foram desafiadas com P. nicotianae utilizando o método apresentado neste artigo. O experimento foi projetado com três réplicas, cada uma com 8 plantas por grupo. A infecção por P. nicotianae das duas variedades de tabaco, BH e XHJ, é apresentada na Figura 2. Aos 3 dias após a inoculação, para XHJ, as lesões do caule cobriram aproximadamente metade da cintura do caule, e metade das folhas es.......
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Discussão
Múltiplas fontes de resistência têm sido usadas para melhorar a resistência à P. nicotianae no tabaco cultivado. Os genes R dominantes únicos, Php e Phl, foram introgressados de Nicotiana plumbaginifolia e Nicotiana longiflora, respectivamente10. A variedade de tabaco de charuto Beinhart 1000 tem o maior nível de resistência quantitativa relatado a P. nicotianae13. Experimentos de mapeamento de intervalo múltiplos sugere.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Esta pesquisa foi financiada pela Fundação Nacional de Ciência Natural da China (31571738) e pelo Programa de Inovação em Ciência e Tecnologia Agrícola da China (ASTIP-TRIC01).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| (NH4)2SO4 | Sinopharm | 10002917 | Reagente Analítico( |
| NH4)6 Mo7O24• 2 H2O | Sinopharm | XW131067681 | Reagente Analítico |
| 1,5 ml Tubos de Microcentrífuga com trava | Eppendorf | 30120086 | Usado para Extração de Amostras |
| Tubos de Microcentrífuga com trava Segura de 2 ml | Eppendorf | 30120094 Usado para Exaustão de Amostras | |
| Ágar | MDBio, Inc | 9002-18-0 | Materiais do Meio de Cultura |
| Analítico Equilíbrio | AOHAOSI | AX2202ZH | Equipamento |
| Autoclave | Yamatuo | SQ510C | Equipamento |
| Autoclave | YAMATUO | SQ510C | Equipamento |
| Copo Bio Melhor | DHSB-2L | Materiais de Cultura | |
| Incubadora Biológica | JINGHONG | SHP-250 | Equipamento |
| Ca(NO3)2• 4 H2O | Sinopharm | 80029062 | Reagente Analítico |
| CaCl2 | Sinopharm | 10005817 | Reagente Analítico |
| CuSO4• 5 H2O | Sinopharm | 10008218 | Reagente Analítico |
| Forno Eletromagnético | Bio Melhor | Equipamento | DHDCL |
| FeSO4• 7 H2O | Sinopharm | 10002918 | Reagente Analítico |
| Papel de Filtro | Bio Melhor | DHLZ-9CM | Material |
| Fluorescência Ração PCR Instrumento | Roche | LightCycler96 | Equipamento |
| Gaze | Bio Melhores | 17071202 Materiais do Meio de Cultura | |
| H3BO3 | Fitotectose | B210-500G | Reagente Analítico |
| Hemocitômetro | Solarbio | 17072801 | Material para identificação resistente a doenças |
| K2SO4 | Sinopharm | 10017918 | Reagente Analítico |
| KNO3 | Sinopharm | Reagente Analítico | |
| 10017218 Folha de Espuma KT | Bio Melhor | DHKTB | para Mudas |
| Incubadora Baixa Constante | Jinghong | SHP-250 | |
| Equipamento Cilindro de Medição | Bio Melhor | DHBLLT-1000ML | Materiais do Meio de Cultura |
| MgSO4• 7 H2O | Sinopharm | 10013080 | Reagente Analítico |
| ECHO | RVL-100-G | Equipamento | |
| MnCl2• 4 H2O | Sinopharm | G5468154 | Reagente Analítico |
| Na2-EDTA | Sinopharm | G21410-250 | Reagente Analítico |
| NaH2PO4• 2 H2O | Sinopharm | 20040717 | Reagente Analítico |
| NH4NO3 | Sinopharm | B64586-100g | Reagente Analítico |
| Aveia | Bio Melhor | DHYMP-1.5KG | Materiais de Meio de Cultura Placa |
| de Petri | Bio Melhor | DHPYM-9CM | para identificação resistente a doenças |
| Pipettor | THERMO | S1 | Equipment |
| Potting | Bio Melhor | DHYCXHP-12CM | Material para Solo de Plantio de Mudas |
| Bio Melhor | DHYMJZ-50L | Material de Mudas | |
| Punch | Bio Melhor | Material | DHDKW |
| Placa qRT-PCR | Monad | MQ50401S | qRT-PCR |
| Plate SYBR Pré-mistura Verde Pro Taq Kit de qPCR HS | Accurate Biology | AG11718 | PCR Reagent |
| Toothpick | Bio Best | DHYQ-900 | Material |
| Total RNA Kit II | Omega | R6934-01 | PCR Reagent |
| TransScript® Remoção de gDNA em uma etapa II e síntese de cDNA SuperMix | Transgen | AH311-02 | Bandejas de reagentes de PCR |
| Bio Melhor | DHYMTP-90G | para | |
| vermiculita | Bio Melhor | DHZS | Material de Purificação |
| de Água Sistema de Purificação de Água | HEAL FORCE | HSE68-2 | Equipamento |
| ZnSO4• 7 H2O | Sinopharm | 10024018 | Reagente Analítico |
Referências
- Antonopoulos, D. F., Melton, T., Mila, A. L. Effects of chemical control, cultivar resistance, and structure of cultivar root system on black shank incidence of tobacco. Plant Disease. 94 (5), 613-620 (2010).
- Taylor, R. J., Pasche, J. S., Gallup, C. A., Shew, H. D., Gudmestad, N. C.
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Reimpressões e permissões
