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Artigo de método

Um Contraste de Três Técnicas de Inoculação usado para determinar a raça do fusarium desconhecido oxysporum f.sp. niveum Isolados

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DOI:

10.3791/63181

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28 de outubro de 2021

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* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Gerenciar o murmúrio fusarium de melancia requer o conhecimento das raças patógenas presentes. Aqui, descrevemos os métodos de inoculação de root-dip, infestado de kernel e métodos modificados de inoculação de mergulho de bandeja para demonstrar sua eficácia na digitação racial do fungo patogênico Fusarium oxysporum f. sp niveum (Fon).

Resumo

Fusarium murcha de melancia (Citrullus lanatus), causada por Fusarium oxysporum f. sp. niveum (Fon), ressurgiu como uma grande restrição de produção no sudeste dos EUA, especialmente na Flórida. A implantação de estratégias integradas de manejo de pragas, como cultivares resistentes à raça, requer informações sobre a diversidade e densidade populacional do patógeno nos campos dos produtores. Apesar de alguns progressos no desenvolvimento de ferramentas de diagnóstico molecular para identificar isolados de patógenos, a determinação racial muitas vezes requer abordagens de bioensação.

A digitação de raça foi conduzida por inoculação de mergulho radicular, método de semeadura infestada de kernel, e o método modificado de mergulho de bandeja com cada um dos quatro diferenciais de melancia (Diamante Negro, Cinza Charleston, Calhoun Grey, Plant Introduction 296341-FR). Os isolados recebem uma designação de raça por cálculo da incidência da doença cinco semanas após a inoculação. Se menos de 33% das plantas para uma cultivar específica fossem sintomáticas, elas eram categorizadas como resistentes. As cultivares com incidência superior a 33% foram consideradas suscetíveis. Este artigo descreve três métodos diferentes de inoculação para determinar raça, mergulho radicular, núcleo infestado e inoculação modificada de mergulho de bandeja, cujas aplicações variam de acordo com o design experimental.

Introdução

Os fungos soilborne que compõem o complexo de espécies de oxisporo fusarium oxysporum (FOSC) são patógenos hemibiotrópicos impactantes que podem causar doenças graves e perda de rendimento em uma variedade diversificada de culturas1. O murche fusarium de melancia, causado por F. oxysporum f. sp. niveum (Fon), vem aumentando em escopo, incidência e gravidade em todo o mundo nas últimas décadas 2,3. Nas mudas, os sintomas do murche fusarium muitas vezes se assemelham a amortecimento. Em plantas mais antigas, a folhagem se torna cinza, clorolítica e necr....

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Protocolo

1. Determinando a raça por método de mergulho raiz (RDM)

  1. Preparação do ambiente experimental
    1. Como a expressão dos sintomas é altamente dependente das condições ambientais, mantenha plantas em uma área controlada. Monitore a umidade relativa, temperatura, fotoperíodo e intensidade da luz (Figura 1).
      1. Coloque a temperatura entre 26-28 °C, umidade relativa do ar para 50-75%, e estabeleça um fotoperíodo de 16 horas para garantir o crescimento adequado da planta e a saúde.
        NOTA: Para evitar a hipóxia, a murcha das mudas e/ou apodrecimento de sementes, não sobrea água ou deixe água parada ao redor da....

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Resultados

Esses experimentos ajudam a definir a resistência relativa de cultivares comumente cultivadas (Tabela 1). Essas informações podem então ser usadas para orientar recomendações de gerenciamento com base nas populações locais de Fon. Em outras palavras, se a raça 0 ou 1 é conhecida por estar presente em um campo comercial, então o agricultor pode estar inclinado a crescer uma variedade "resistente" como Calhoun Gray, Sunsugar, ou equivalente. Os resultados dos bioensativos utilizando todos os métodos mostra.......

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Discussão

Três métodos de digitação racial foram apresentados. Cada um desses métodos é mais adequado para questões particulares e condições experimentais. O método de inoculação de kernel infestado (infestação do solo) é talvez mais simples e simples, tornando-o especialmente útil para a avaliação da patogenicidade30. Usar este método para digitação de raça simples é altamente eficaz. No entanto, a aplicação do método para determinar a resistência de uma cultivar específica pode ser um desafio, uma vez que.......

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Divulgações

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Agradecimentos

Gostaríamos de reconhecer o Dr. Ali e o Laboratório de Diagnóstico Molecular vegetal, bem como o Dr. Pingsheng Ji da Universidade da Geórgia, cuja liderança e apoio ajudaram a estabelecer nosso programa Fon.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
100% mais cheio' s EarthSigma-AldrichF200-5KG
1 L frasco de vidro ErlenmeyerPYREX4980-1L
15 mL tubos de falcãoFisher Scientific14-959-49B
50 mL cilindro graduadoFornecimento de Segurança de Laboratório41121805
50 mL Eppendorf Tubos CônicosFisher Scientific05-413-921
Embalagemde folha de alumínioReynolds Wrap720
BleachWalmart587192290
Bico de BunsenFisher Scientific03-391-301
CaCO3sigma-Aldrich239216
espalhadores de célulasFisher Scientific08-100-11
GazeclothLions Services, Inc8305-01-125-0725
Pratos de plástico transparenteVisions Wave999RP6CLSS~15 cm de diâmetro
Tubo de vinil transparente para braçadeiras de saco de cogumeloShroom Supply6" para saco pequeno, 8" para saco médio, 10" para saco grande
Bolas de AlgodãoFisherbrand22-456-885Etanol Estéril
Fisher ChemicalA4094100%, depois combine com água para fazer 70% para uso
Luzes de tubo fluorescenteMaxLumeModelo T52800 K Temperatura de cor, ágar granulado de 24'' ou 48'' de comprimento
VWR International90000-786
Garrafa de spray portátilCapacidade Umde 24122002~0,95 L
Fisher Scientific02-671-55AHemacitômetro de duas câmaras
Bandejas delaboratórioFisher Scientific15-236-2A
Sacos plásticos grandes e seláveisZiploc43080538 cm x 38 cm
Mister / regadorBar5FB10H22
Grampo de Saco de CogumeloShroom Supply6" para saco pequeno, 8" para saco médio, 10" para saco grande
Luvas de NitriloFisher Scientific19-130-1597D
Orgânico Rye BerriesShroom SupplySacos de 0,5 galão ou 25 lb
Pipeta e pontas P1000 PlacasFisher Scientific14-388-100
FisherbrandFB0875713Redondo, 100 mm de diâmetro, 15 mm de altura
Meio de plantioJolly GardenerPro-Line C/B
Jarro de PlásticoBrandTechUX06008501 L ou maior
Vasos de plantio de plásticoNeo/SCI01-1177~15 cm de diâmetro e ~10 cm
de altura Contentor de plástico, seguro para autoclaveThermo ScientificUX06010223 L
Meio de ágar dextrose de batata de um quarto de forçaCole-ParmerUX1420028Use pó em combinação com a receita da Balança Científica QPDA
, medindo em gOhaus30208458Qualquer escala precisa que possa conter e medir 200g funcionará
Tamanho #4 furo de cortiçaCole-ParmerNC9585352
Pequeno saco de cultivo de cogumelosFiltro Shroom Supply0.5 micron, também vem em tamanhos médios e grandes
Espátula de soloWalmart563876946
Planos de isopor (6 x 12 células)Modelo SpeedlingTR72A
Planos de isopor (8 x 16 células)SpeedlingModelo TR128A
Seringa (5 ou 10 mL)fisher Scientific14-829-19C
TimerWalmartTM-01
V8 Original 100% Suco de VegetaisWalmart564638212
vortexFisher Scientific02-215-418
Semente de Melancia - Black DiamondWillhite Seed Inc17
Semente de melancia - Calhoun GrayHolmes Seed Company4440
Semente de melancia - Charleston GrayBonnie Plants7.15339E+11
Semente de melancia - PI 296341-FREntre em contato com os autoresEntre em contato com os autores
Grãos de trigo (Maxie var.) (opcional)Alachua County Feed & Semente
hemacitômetro de Petri

Referências

  1. Edel-Hermann, V., Lecomte, C. Current status of Fusarium oxysporum formae speciales and races. Phytopathology. 109 (4), 512-530 (2019).
  2. Everts, K. L., Himmelstein, J. C. Fusarium wilt of watermelon: Towards sustainable management of a re-emerging plant dise....

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Reimpressões e permissões

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