Modelagem da Hemorragia Intraventricular Neonatal Através da Injeção Intraventricular de Hemoglobina

Resumo

Apresentamos um modelo de hemorragia intraventricular neonatal utilizando filhotes de ratos que mimetiza a patologia observada em humanos.

Resumo

A hemorragia intraventricular neonatal (IVH) é uma consequência comum do parto prematuro e leva a lesão cerebral, hidrocefalia pós-hemorrágica (HPH) e déficits neurológicos ao longo da vida. Embora a PHH possa ser tratada por procedimentos de desvio temporários e permanentes do líquido cefalorraquidiano (LCR) (reservatório ventricular e shunt ventriculoperitoneal, respectivamente), não há estratégias farmacológicas para prevenir ou tratar lesão cerebral induzida por IV e hidrocefalia. Modelos animais são necessários para entender melhor a fisiopatologia da IVH e testar tratamentos farmacológicos. Embora existam modelos existentes de HVI neonatal, aqueles que resultam de forma confiável em hidrocefalia são frequentemente limitados pela necessidade de injeções de grande volume, o que pode complicar a modelagem da patologia ou introduzir variabilidade no fenótipo clínico observado.

Estudos clínicos recentes implicaram hemoglobina e ferritina na causa de aumento ventricular após IVH. Aqui, desenvolvemos um modelo animal simples que imita o fenótipo clínico da PHH utilizando injeções intraventriculares de pequeno volume do produto de degradação do sangue hemoglobina. Além de induzir de forma confiável o aumento ventricular e a hidrocefalia, esse modelo resulta em lesão da substância branca, inflamação e infiltração de células imunes nas regiões periventricular e da substância branca. Este trabalho descreve este método clinicamente relevante e simples para modelar a HPH-IV em ratos neonatais usando injeção intraventricular e apresenta métodos para quantificar o tamanho do ventrículo após a injeção.

Introdução

A IVH neonatal origina-se da matriz germinativa, um local de rápida divisão celular adjacente aos ventrículos laterais do cérebro em desenvolvimento. Essa estrutura altamente vascular é vulnerável à instabilidade hemodinâmica relacionada ao parto prematuro. O sangue é liberado nos ventrículos laterais na hemorragia da matriz germinativa (GMH)-IVH quando os vasos sanguíneos frágeis dentro da matriz germinativa se rompem. No caso da IV IV de grau IV, o infarto hemorrágico periventricular também pode contribuir para a liberação de hemoderivados dentro do cérebro. ¹ A combinação de GMH-IVH pode causar HPH, particularmente após hemorragia de alto gr....

Protocolo

NOTA: Todos os protocolos de animais foram aprovados pelo Comitê de Cuidado e Uso de Animais das instituições. Consulte a Tabela de Materiais para obter detalhes sobre todos os materiais, reagentes, equipamentos e softwares usados neste protocolo.

1. Preparação de soluções de hemoglobina e LCR

1. Preparar uma solução estéril de LCR artificial (aCSF) adicionando 500 μL da solução de aCSF a um microtubo de 1,5 ml e conservar em gelo.
2. Preparar uma solução estéril de hemoglobina de 150 mg/mL adicionando 75 mg de hemoglobina a 500 μL de aCSF em um microtubo de 1,5 mL e armazenar no gelo.

Resultados

O sucesso da injeção foi confirmado por meios radiológicos e imuno-histoquímicos. Os animais submetidos à injeção de hemoglobina desenvolveram ventriculomegalia aguda moderada quando avaliados por RM (Figura 2A), com ventrículos laterais significativamente maiores às 24 h e 72 h após a injeção de hemoglobina em comparação aos animais injetados no LCR (Figura 2B,C). Embora não tenha havido diferença significativa no volume do ventrículo lateral e.......

Discussão

Este modelo de IVH utilizando injeção de hemoglobina permite o estudo da patologia da IVH especificamente mediada pela hemoglobina. Para estudos complementares, a hemoglobina também pode ser facilmente administrada in vitro e não confunde ensaios bioquímicos para proteínas produzidas por micróglias / macrófagos que estão presentes no sangue total.

As principais teorias da HIF-IV incluem a obstrução mecânica da circulação do LCR, a ruptura dos cílios que revestem as paredes ependimária.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Seringa de insulina de 0,3 mL	BD Microfine + Seringa de Insulina	230-4533	As sinringas de 0,3-0,5 mL funcionarão
Microtubo de 1,5 mL	USA Scientific	1615-5500	Lote nº K194642H -3 511
4.7T MRI	Agilent/Varian	4.7T/33 cm	Agilent/Varian DirectDrive 4.7-T (200-MHz) Sistema de ressonância magnética
6-0 sutura de monofilamento	ETHICON	667G
9.4T MRI	Bruker	BioSpec 94/20	Usado neste protocolo sem a criossonda
Balança analítica	CCURIS Instruments	W3200-320
Artificial CSF (aCSF)	Tocris Bioscience	3525	Nº do lote: 72A
Betadine	Purdue Products L.P.	301005-00	NDC 67618-150-09
Carprofeno (injetável)	Zoetis Inc.	PI 4019448	Rimadyl
Ethanol	Decon Laboratories	2701
Almofada de aquecimento	Sunbeam	E12107-819	UL 612A, Z-1228-001
Hemoglobina	MP Biomedicals	100714	LOTE NO. SR02321
Isoflurano	Piramal Critical Care NDC	66794-017-25
Vaporizador de isoflurano	VETEQUIP	911103
Luz para instrumentos estereotáxicos	Dolan-Jenner industries	Fiber-Lite MI-150
Bomba de seringa de microinjeção	World Precision Instruments	MICRO21	Serial 184034 T08K
Software de ressonância magnética	Bruker BioSpin	Paravision 360 3.2
Oxygen	Airgas Healthcare	UN1072	NÚMERO DO LOTE S1432080XA02
Ratos	Sprague DawleyCharles River Laboratories	Código da cepa: 001
Instrumento estereotáxico	KOPF Instuments	Modelo 900LS Lazy Susan
Aplicador estéril com ponta de algodão	Fischerbrand	23-400-118
Lâmina cirúrgica	covetrus	#10
Antibiótico triplo tópico	Pomada antibiótica tripla	NDC 51672-2120-1
Software de quantificação do volume ventricular	ITK-SNAP	ITK-SNAP 4.0.0 beta

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