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Artigo de método

Bioprospecção de microrganismos extreílicos para enfrentar a poluição ambiental

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DOI:

10.3791/63453

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30 de dezembro de 2021

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Neste artigo

Resumo

O isolamento de micróbios resistentes a metais pesados de fontes geotérmicas é um tema quente para o desenvolvimento de bioremediação e monitoramento ambiental de biossistemas. Este estudo fornece uma abordagem metodológica para isolar e identificar bactérias tolerantes a metais pesados a partir de fontes termais.

Resumo

As nascentes geotérmicas são ricas em vários íons metálicos devido à interação entre rocha e água que ocorre no aquífero profundo. Além disso, devido à variação sazonalidade do pH e da temperatura, a flutuação na composição do elemento é observada periodicamente dentro desses ambientes extremos, influenciando as comunidades microbianas ambientais. Microrganismos extreílicos que prosperam em aberturas térmicas vulcânicas desenvolveram mecanismos de resistência para lidar com vários íons metálicos presentes no ambiente, participando assim de ciclos biogeoquímicos metálicos complexos. Além disso, os extremófilos e seus produtos têm encontrado uma ampla base no mercado, e isso vale especialmente para suas enzimas. Nesse contexto, sua caracterização é funcional para o desenvolvimento de biossistemas e bioprocessos para monitoramento ambiental e bioremediação. Até o momento, o isolamento e o cultivo em condições laboratoriais de microrganismos extreílicos ainda representam um gargalo para a exploração plena de seu potencial biotecnológico. Este trabalho descreve um protocolo simplificado para o isolamento de microrganismos termofílicos de fontes termais, bem como sua identificação genotípica e fenotípica através das seguintes etapas: (1) Amostragem de microrganismos de sítios geotérmicos ("Pisciarelli", uma área vulcânica de Campi Flegrei em Nápoles, Itália); (2) Isolamento de microrganismos resistentes ao metal pesado; (3) Identificação de isolados microbianos; (4) Caracterização fenotípica dos isolados. As metodologias descritas neste trabalho podem ser geralmente aplicadas também para o isolamento de microrganismos de outros ambientes extremos.

Introdução

Os ambientes extremos do nosso planeta são excelentes fontes de microrganismos capazes de tolerar condições severas (ou seja, temperatura, pH, salinidade, pressão e metais pesados)1,2, sendo Islândia, Itália, EUA, Nova Zelândia, Japão, África Central e Índia, as áreas vulcânicas mais reconhecidas e estudadas 3,4,5,6,7,8,9 . Os termófilos evoluíram em ambientes severos em uma faix....

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Protocolo

1. Amostragem de microrganismos de sítios geotérmicos

  1. Escolha o local para amostragem usando como critério locais com temperatura e pH desejados. Meça os parâmetros físicos através de uma sonda termopar digital, inserindo-a nas piscinas ou lamas selecionadas.
  2. Coletar 20 g de amostras de solos (neste caso, de lama no sítio hidrotérmico de Pisciarelli Solfatara), recolhendo-os com uma colher esterilizada. Pegue pelo menos duas amostras para cada local escolhido.
  3. Coloque as amostras em tubos de polipropileno estéreis de 50 mL e feche imediatamente.
  4. Meça pH e temperatura com uma sonda termopar digital inserindo-a di....

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Resultados

Local de amostragem
Este protocolo ilustra um método para o isolamento de bactérias resistentes a metais pesados de uma fonte termal. Neste estudo, a área de Pisciarelli, um ambiente geotérmico ácido-sulfísico, foi utilizada como local de amostragem (Figura 1). Este ecossistema é caracterizado pelo fluxo de fluidos sulfúricos agressivos derivados de atividades vulcânicas. Foi demonstrado que as comunidades microbianas em sistemas geotérmicos ácido-sulfísi.......

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Discussão

As fontes termais contêm uma diversidade inexplorada de microbiomas com capacidades metabólicas igualmente diversas12. O desenvolvimento de estratégias para o isolamento de microrganismos que possam converter eficientemente metais pesados em compostos menos tóxicos10 representa uma área de pesquisa de crescente interesse em todo o mundo. Este artigo tem como objetivo descrever uma abordagem simplificada para a triagem e isolamento de micróbios com a capacidade de resistir a.......

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Divulgações

Os autores declaram que não têm conflitos de interesse.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado pelo ERA-NET Cofund MarTERA: "FLAshMoB: Functional Amyloid Chimera for Marine Biosensing", PRIN 2017-PANACEA CUP:E69E19000530001 e pela GoodbyWaste: Obtaingood produtos-exploram por produtos-reduzir resíduos, MIUR 2017-JTNK78.006, Itália. Agradecemos ao Dr. Monica Piochi e à Dra.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
AmpicilinaSigma AldrichA9393
Aura Minibio air s.c.r.l.Capuz biológico
BacitracinaSigma AldrichB0125
Cloreto de cádmioSigma Aldrich202908
CloranfenicolSigma AldrichC0378
CiprofloxacinaSigma Aldrich17850
Cloreto de cobaltoSigma AldrichC8661
Cloretode cobreSigma Aldrich224332
EritromicinaSigma AldrichE5389
Exernal ServiceDSMZLeibniz Institute DSMZ-Coleção Alemã de Microrganismos e Culturas de Células GmbH
Kit de Purificação de DNA GenômicoThermo Scientific#K0721
Sulfato de canamicinaSigma Aldrich60615
MaxQTM 4000 Agitador orbital de bancadaThermo ScientificSHKE4000
Cloreto de mercúrioSigma Aldrich215465
NanoDrop 1000 EspectrofotômetroThermo Scientific
Cloreto de níquelSigma Aldrich654507
Medidor de pH portátil Orion Star A221Thermo ScientificSTARA2218
Sódio (meta) arsenitoSigma AldrichS7400
Arseniato de sódio dibásico heptahidratadoSigma AldrichA6756
Cloreto de sódioSigma AldrichS5886
EstreptomicinaSigma AldrichS6501
TetraciclinaSigma Aldrich87128
Triptona BioChemicaApplichem PanreacA1553
VancomicinaSigma AldrichPHR1732
Extrato de levedura para biologia molecularApplichem Panreac  Resposta 3732

Referências

  1. Arora, N. K., Panosyan, H. Extremophiles: applications and roles in environmental sustainability. Environmental Sustainability. 2, 217-218 (2019).
  2. Gallo, G., Puopolo, R., Carbonaro, M., Maresca, E., Fiorentino, G.

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Reimpressões e permissões

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