O presente protocolo descreve o modelo de retalho fascio-cutâneo suíno e seu potencial uso na pesquisa de tecidos compostos vascularizados.
Os aloenxertos compostos vascularizados (VCA), como o transplante de mão, face ou pênis, representam o tratamento de ponta para defeitos devastadores da pele, falhados pelos primeiros passos da escada reconstrutiva. Apesar dos resultados estéticos e funcionais promissores, o principal fator limitante continua sendo a necessidade de uma imunossupressão ao longo da vida drasticamente aplicada e seus riscos médicos bem conhecidos, impedindo indicações mais amplas. Portanto, levantar a barreira imunológica na VCA é essencial para inclinar a escala ética e melhorar a qualidade de vida dos pacientes usando as técnicas cirúrgicas mais avançadas. A criação de novo de um enxerto específico do paciente é o próximo avanço no transplante reconstrutivo. Usando técnicas de engenharia de tecidos, os VCAs podem ser liberados de células doadoras e personalizados para o receptor através de perfusão-descelularização-recelularização. Para desenvolver essas novas tecnologias, é necessário um modelo de VCA animal em larga escala. Assim, os retalhos fasciocutâneos suínos, compostos por pele, gordura, fáscia e vasos, representam um modelo ideal para estudos preliminares em VCA. No entanto, a maioria dos modelos de VCA descritos na literatura inclui músculo e osso. Este trabalho relata uma técnica confiável e reprodutível para a colheita de retalho fasciocutâneo de safena em suínos, uma ferramenta prática para diversos campos de pesquisa, especialmente a engenharia de tecidos compostos vascularizados.
Os aloenxertos compostos vascularizados (VCA) revolucionaram o tratamento de perdas de partes do corpo de difícil reparo, como mãos, face e pênis 1,2,3. Infelizmente, os primeiros resultados a longo prazo4 mostraram que a administração ao longo da vida de agentes imunossupressores de altas doses pode levar a condições médicas colaterais graves, incluindo diabetes, infecções, neoplasias e disfunção reno-vascular5. Ultimamente, equipes especializadas de VCA têm tido que gerenciar o risco de rejeição crônica que leva à perda do enxerto e realizar os primeiros casos de retransplante de face 6,7. Diferentes estratégias têm sido descritas para superar as limitações da imunossupressão na VCA. A primeira baseia-se no estabelecimento de tolerância do enxerto a longo prazo, induzindo um estado de quimerismo misto imune no receptor do aloenxerto 8,9. O segundo envolve a criação de novo de um enxerto específico do paciente através da engenharia de tecidos.
Recentemente, a descelularização perfusional de tecidos biológicos tem gerado andaimes de matriz extracelular nativa (MEC), permitindo a preservação da rede vascular e da arquitetura tecidual de órgãos inteiros10. Assim, a recelularização dessas ECM com células específicas do receptor criaria um enxerto personalizado livre de restrições imunológicas. Em pesquisas sobre bioengenharia de VCA, múltiplas equipes descelularizaram e obtiveram tal ECM preservando toda a arquitetura11,12,13. No entanto, o processo de recelularização continua desafiador e não tem sido bem-sucedido em modelos animais de grandeporte 14,15. O desenvolvimento dessas tecnologias inovadoras cria a necessidade de modelos confiáveis e reprodutíveis de tecidos compostos de grandes animais. Os modelos suínos representam a maior escolha no pipeline de desenvolvimento da bioengenharia, pois a pele suína apresenta as características anatômicas e fisiológicas mais próximas da pele humana16. O uso de retalhos fasciocutâneos (FCF) é ideal durante os primeiros passos para a criação de enxertos de tecido composto vascularizado ‘sob medida’. De fato, o FCF é um modelo elementar de VCA contendo pele, gordura, fáscia e células endoteliais. A descrição de retalhos miocutâneos suínos17 e retalhos osteomiocutâneos18 pode ser encontrada na literatura. No entanto, há uma falta de foco nas técnicas de colheita de retalhos fáscio-cutâneos.
Assim, este estudo tem como objetivo fornecer aos pesquisadores uma descrição detalhada de uma técnica de aquisição de FCF safena suína e descrever todas as características do retalho para sua utilização em muitos campos de pesquisa, especialmente na engenharia de tecidos compostos vascularizados.
Este artigo descreve um retalho fasciocutâneo confiável e reprodutível colhido em membros posteriores de suínos. Seguir este protocolo cirúrgico passo-a-passo permitirá a obtenção de dois retalhos em apenas um animal em menos de 2 h. A etapa mais crítica da cirurgia é a esqueletização do pedículo vascular dentro das fibras musculares do grácil, o que requer uma dissecção completa por um cirurgião qualificado. Fixar a pele à fáscia usando suturas cutâneas é uma dica crucial para evitar um efeito de ci…
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho foi financiado pelos subsídios Shriners Hospitals for Children #85127 (BEU e CLC) e #84702 (AA). Os autores gostariam de agradecer à fundação “Gueules Cassées” pelo apoio salarial aos bolsistas envolvidos nesse projeto.
18 G angiocatheter | BD Insyte Autoguard | 381409 | |
20 G angiocatheter | BD Insyte Autoguard | 381411 | |
Adson Tissue Forceps, 11 cm, 1 x 2 Teeth with Tying Platform | ASSI | ASSI.ATK26426 | |
Atropine Sulfate | AdvaCare | 212-868 | |
Bipolar cords | ASSI | 228000C | |
Buprenorphine HCl | Pharmaceutical, Inc | 42023-179-01 | |
Dilating Forceps | Fine science tools (FST) | 18131-12 | |
Endotrachel tube | Jorgensen Labs | JO615X | size from 6 to 15mm depending on the pig weight |
Ethilon 3-0 16 mm 3/8 | Ethicon | MPVCP683H | |
Euthasol | Virbac AH | 200-071 | |
Heparin Lock Flush Solution, USP, 100 units/mL | BD PosiFlush | 306424 | |
Isoflurane | Patterson Veterinary | 14043-704-06 | |
Jewelers Bipolar Forceps Non Stick 11 cm, straight pointed tip, 0.25 mm tip diameter | ASSI | ASSI.BPNS11223 | |
Metzenbaum scissors 180 mm | B Braun | BC606R | |
Microfil blue | Flow tech | LMV-120 | |
Microfil dilution | Flow tech | LMV-112 | colored filing solution |
Monopolar knife | ASSI | 221230C | |
N°15 scalpel blade | Swann Morton | NS11 | |
Omnipaque | General Electric | 4080358 | contrast product |
Perma-Hand Silk 3-0 | Ethicon | A184H | |
Small Ligaclip | Ethicon | MCM20 | |
Stevens scissors 115 mm | B Braun | BC008R | |
Telazol | Zoetis | 106-111 | |
Xylamed (xylazine) | Bimeda | 200-529 |