वर्तमान प्रोटोकॉल अल्जाइमर रोग के एपीपी / पीएस 1 ट्रांसजेनिक माउस मॉडल में अमाइलॉइड-बीटा लोड को मापने के लिए धनु माउस मस्तिष्क वर्गों के ब्याज विश्लेषण के पूर्ण-क्षेत्र या उप-क्षेत्र को करने की प्रक्रिया का वर्णन और तुलना करता है।
अमाइलॉइड-बीटा (Aβ) सजीले टुकड़े का बाह्य संचय अल्जाइमर रोग (एडी) के प्रमुख रोग हॉलमार्क में से एक है, और एडी के लिए एकमात्र एफडीए-अनुमोदित रोग-संशोधित उपचार का लक्ष्य है तदनुसार, ट्रांसजेनिक माउस मॉडल का उपयोग जो अमाइलॉइड अग्रदूत प्रोटीन को ओवरएक्सप्रेस करता है और इस तरह सेरेब्रल एβ सजीले टुकड़े जमा करता है, चूहों में मानव एडी को मॉडल करने के लिए व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। इसलिए, एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (एलिसा) और इम्यूनोस्टेनिंग सहित इम्यूनोएसेस, आमतौर पर एडी ट्रांसजेनिक चूहों से प्राप्त मस्तिष्क के ऊतकों में एβ लोड को मापते हैं। यद्यपि Aβ का पता लगाने और परिमाणीकरण के तरीकों को अच्छी तरह से स्थापित और प्रलेखित किया गया है, इम्यूनोस्टेनिंग के बाद Aβ लोड माप पर मस्तिष्क के ऊतकों में चयनित ब्याज के क्षेत्र के आकार के प्रभाव की सूचना नहीं दी गई है। इसलिए, वर्तमान प्रोटोकॉल का उद्देश्य छवि विश्लेषण सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके ब्याज के पूर्ण और उप-क्षेत्रों में Aβ लोड माप की तुलना करना है। मस्तिष्क ऊतक की तैयारी, फ्री-फ्लोटिंग ब्रेन सेक्शन इम्यूनोस्टेनिंग, इमेजिंग और ब्याज के पूर्ण बनाम उप-क्षेत्रों में एβ लोड की मात्रा का ठहराव में शामिल चरणों को 13 महीने पुराने एपीपी / पीएस 1 डबल ट्रांसजेनिक नर चूहों से प्राप्त मस्तिष्क वर्गों का उपयोग करके वर्णित किया गया है। वर्तमान प्रोटोकॉल और परिणाम Aβ-पॉजिटिव क्षेत्र परिमाणीकरण पर ब्याज के क्षेत्र के आकार के प्रभाव के बारे में मूल्यवान जानकारी प्रदान करते हैं, और 13 महीने के पुरुष एपीपी / पीएस 1 चूहों से प्राप्त मस्तिष्क वर्गों के लिए ब्याज विश्लेषण के पूर्ण और उप-क्षेत्रों का उपयोग करके प्राप्त एβ-पॉजिटिव क्षेत्र के बीच एक मजबूत सहसंबंध दिखाते हैं जो व्यापक एβ बयान दिखाते हैं।
अल्जाइमर रोग (एडी), संयुक्त राज्य अमेरिका में मृत्यु का छठा प्रमुख कारण, एक सार्वजनिक स्वास्थ्य खतरा बना हुआ है, अनुमानित 6.2 मिलियन अमेरिकियों के साथ एडी के साथ रहना है। 2060 तक इसके 13.8 मिलियन तक पहुंचने की उम्मीदहै। आज तक, कोलिनेस्टेरेज़ इनहिबिटर और मेमेंटाइन जैसी दवाओं के माध्यम से रोगसूचक प्रबंधन उपचार का प्राथमिक पाठ्यक्रम है2. एडी को न्यूरोपैथोलॉजिकल अभिव्यक्तियों की विशेषता है जैसे कि एमिलॉयड-बीटा (एβ) सजीले टुकड़े के बाह्य कोशिकीय जमाव और न्यूरोफाइब्रिलरी टंगल्स 3,4 के रूप में इंट्रासेल्युलर हाइपरफॉस्फोराइलेटेड ताऊ संचय। बीटा- और गामा-स्राव के माध्यम से एमिलॉयड अग्रदूत प्रोटीन (एपीपी) के एंडोप्रोटियोलाइटिक दरार द्वारा गठित, एβ ऑलिगोमर्स और फाइब्रिल बनाने के लिए समुच्चय करता है, जिससे न्यूरोटॉक्सिक प्रभावहोता है 5. 1980 के दशक से एक प्राथमिक रोग भूमिका निभाने के लिए Aβ की परिकल्पना की गई है, और ईस्वी6 के लिए एकमात्र एफडीए-अनुमोदित रोग-संशोधित चिकित्सा का चिकित्सीय लक्ष्य है। नतीजतन, ट्रांसजेनिक एडी माउस मॉडल जीन में उत्परिवर्तन को आश्रय देते हैं जिसके परिणामस्वरूप मजबूत सेरेब्रल एβ संचय होता है, 1990 के दशककी शुरुआत से प्रीक्लिनिकल एडी अनुसंधान के लिए व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।
इन एडी ट्रांसजेनिक माउस दिमाग में एβ प्रजातियों का पता लगाना आम तौर पर दो इम्यूनोसेस का उपयोग करके किया जाता है: एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (एलिसा) और इम्यूनोस्टेनिंग। पूर्व परख विभिन्न Aβ प्रजातियों के मात्रात्मक निर्धारण को सक्षम बनाता है और इम्यूनोस्टेनिंग की तुलना में कम समय लेने वाला है, जिसके लिए ऊतक सेक्शनिंग, इम्यूनोस्टेनिंग, इमेजिंग और परिमाणीकरण सहित कई अनुक्रमिक ऊतक प्रसंस्करण और इमेजिंग चरणों की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, इम्यूनोस्टेनिंग के बाद प्राप्त परिणाम अर्ध-मात्रात्मक8 हैं। हालांकि, स्थानिक रूप से स्थानीयकरण करने की क्षमता एβ मस्तिष्क के ऊतकों में एβ का पता लगाने के लिए इम्यूनोस्टेनिंग को एक आकर्षक दृष्टिकोण बनातीहै 8.
Aβ इम्यूनोस्टेनिंग का उपयोग करते समय, विभिन्न अनुसंधान समूहों द्वारा कई अलग-अलग परिमाणीकरण प्रतिमानों को नियोजित किया गया है। उदाहरण के लिए, कुछ शोध समूह ब्याज के पूरे क्षेत्र (कॉर्टेक्स या हिप्पोकैम्पस) में एβ लोड की मात्रा निर्धारित करते हैं, जबकि अन्य ब्याज के निर्दिष्ट उप-क्षेत्र (कॉर्टेक्स या हिप्पोकैम्पस का एक हिस्सा) 9,10,11 में एβ लोड की मात्रा निर्धारित करते हैं। यद्यपि Aβ का पता लगाने और परिमाणीकरण के तरीकों को अच्छी तरह से स्थापित और प्रलेखित किया गया है, इम्यूनोस्टेनिंग के बाद Aβ लोड माप पर ब्याज के क्षेत्र के आकार के प्रभाव की सूचना नहीं दी गई है। इसलिए, वर्तमान प्रोटोकॉल का उद्देश्य छवि विश्लेषण सॉफ़्टवेयर, इमेजजे का उपयोग करके ब्याज के पूर्ण और उप-क्षेत्रों में एβ लोड माप की तुलना करना है।
वर्तमान अध्ययन में 13 महीने के एपीपी / पीएस 1 डबल ट्रांसजेनिक नर चूहों का उपयोग किया गया था, जो एडी12 की शुरुआती शुरुआत को मॉडल करने के लिए एक चिमेरिक माउस / मानव एपीपी और एक उत्परिवर्ती प्रेसेनिलिन 1 व्यक्त करते हैं। Aβ जमा 6-7 महीने की उम्र तक विकसित होने लगते हैं, और12 साल की उम्र के 9-10 महीने तक इन चूहों के प्रांतस्था और हिप्पोकैम्पस दोनों में प्रचुर मात्रा में Aβ संचय देखा जाता है। ट्रांसजेनिक अमाइलॉइड पेप्टाइड्स और होलोप्रोटीन को 6 ई 10-इम्यूनोस्टेनिंग13 द्वारा पता लगाया जा सकता है, जिससे यह वर्तमान प्रोटोकॉल के लिए एक वांछनीय पशु मॉडल बन जाता है। यहां कवर की गई प्रक्रिया में मस्तिष्क के ऊतकों की तैयारी, फ्री-फ्लोटिंग सेक्शन की इम्यूनोस्टेनिंग, इमेजिंग और ब्याज के पूर्ण बनाम उप-क्षेत्रों में एβ लोड का परिमाणीकरण शामिल है। विश्लेषण पूर्ण और उप-क्षेत्रीय परिमाणीकरण के बीच एक मजबूत सहसंबंध दिखाता है, जो 13 महीने पुराने एपीपी / पीएस 1 नर चूहों से प्राप्त मस्तिष्क ऊतक वर्गों में इन दो विधियों के बीच मजबूत समझौते का संकेत देता है जो प्रचुर मात्रा में एβ जमा दिखाते हैं।
यहां वर्णित प्रोटोकॉल धनु सेक्शनिंग के लिए हेमी-मस्तिष्क की तैयारी की प्रक्रिया को रेखांकित करता है, फ्री-फ्लोटिंग सेक्शन पर 6 ई 10 एंटीबॉडी का उपयोग करके एβ जमा के इम्यूनोफ्लोरोसेंट धुंधला, एक छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग करके कॉर्टेक्स में एβ जमा की मात्रा का ठहराव और माउस मस्तिष्क ऊतक के हिप्पोकैम्पस के बाद एβ दाग वाले मस्तिष्क वर्गों की इमेजिंग। जबकि मस्तिष्क ऊतकअनुभाग8,10 में Aβ लोड की मात्रा निर्धारित करने के लिए प्रकाशित प्रोटोकॉल हैं, यह प्रोटोकॉल पूरे आईएसओ-कॉर्टेक्स (कॉर्टेक्स के रूप में संदर्भित) और हिप्पोकैम्पस में Aβ लोड की मात्रा का ठहराव में शामिल चरणों का वर्णन करता है, जब यह वांछित हो सकता है। ब्याज विश्लेषण के पूर्ण बनाम उप-क्षेत्रों के बीच सहसंबंध भी प्रदान किया गया है।
प्रोटोकॉल में कई महत्वपूर्ण कदम हैं। सबसे पहले, वर्णित प्रोटोकॉल मुक्त-फ्लोटिंग इम्यूनोस्टेनिंग के अधीन 20 μm मोटी मस्तिष्क ऊतक वर्गों के लिए है, जिसके परिणामस्वरूप ऊतक अनुभाग18 के भीतर इष्टतम एंटीबॉडी प्रवेश होता है। फ्री-फ्लोटिंग तकनीक को इम्यूनोफ्लोरोसेंट धुंधला होने के दौरान विभिन्न समाधानों के बीच ऊतक वर्गों को मैन्युअल रूप से स्थानांतरित करने की आवश्यकता हो सकती है, और प्रक्रिया के दौरान ऊतक वर्गों की सावधानीपूर्वक हैंडलिंग हो सकती है। यह विशेष रूप से महत्वपूर्ण है जब ऊतक वर्गों को वर्तमान प्रोटोकॉल में एंटीजन पुनर्प्राप्ति के लिए 70% फॉर्मिक एसिड समाधान में डुबोया जाता है, जिससे पतले वर्गों के लिए ऊतक नाजुकता बढ़ जाती है। वर्णित प्रोटोकॉल के वैकल्पिक दृष्टिकोण में मोटे ऊतक वर्गों (जैसे, 30-40 μm) का उपयोग करना या ऊतक वर्गों का उपयोग करना शामिल है जो इम्यूनोफ्लोरोसेंट धुंधला होने से पहले सीधे सकारात्मक रूप से चार्ज किए गए स्लाइड पर घुड़सवार होते हैं। दूसरा, यहां वर्णित प्रोटोकॉल फ्लोरोसेंटली-लेबल 6 ई 10 एंटीबॉडी का उपयोग करता है। फ्लोरोसेंटली-लेबल 6 ई 10 एंटीबॉडी का उपयोग करने के अलावा, गैर-फ्लोरोसेंट 6 ई 10 एंटीबॉडी (जैसे, हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज-संयुग्मित 6 ई 10 एंटीबॉडी) का उपयोग मस्तिष्क ऊतक वर्गों में एβ लोड का पता लगाने के लिए भी किया जा सकता है, और वर्तमान प्रोटोकॉल को मस्तिष्क ऊतक वर्गों में एβ-पॉजिटिव इम्यूनोकेमिकल दाग को मापने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है जैसा कि पहले वर्णित है8 . तीसरा, Aβ लोड परिमाणीकरण के लिए परिणामों की सटीकता विश्लेषण सॉफ्टवेयर में उपयुक्त थ्रेशोल्ड चयन पर निर्भर करेगी, जो ऊतक पृष्ठभूमि और सिग्नल तीव्रता पर निर्भर है। थ्रेशोल्ड चयन अंतिम उपयोगकर्ता द्वारा किया जाना चाहिए जैसे कि परिमाणीकरण के लिए केवल Aβ-सकारात्मक दाग का चयन किया जाता है। थ्रेशोल्ड सेटिंग की सटीकता को आश्वस्त करने के लिए सभी छवियों पर लागू की जा सकने वाली विशिष्ट थ्रेशोल्ड को अनुकूलित करने के लिए एंड-यूज़र हस्तक्षेप की आवश्यकता होती है। चौथा, चूंकि ब्याज विश्लेषण के उप-क्षेत्र को ऊतक अनुभाग में रुचि के एक छोटे से क्षेत्र का चयन करने की आवश्यकता होती है, इसलिए इस विश्लेषण के लिए दो स्वतंत्र पाठकों का उपयोग किया गया था। डेटा संग्रह के दौरान स्वतंत्रता और अंधेरे को बनाए रखने के लिए, सभी छवियों को नंबर कोडित किया गया था; छवि विश्लेषण अनुक्रम पाठकों के बीच यादृच्छिक था जैसे कि विभिन्न पाठकों ने किसी भी समय अलग-अलग छवियों का विश्लेषण किया, और डेटा प्रत्येक सप्ताह के अंत में प्रस्तुत किया गया था। ब्याज विश्लेषण के उप-क्षेत्र में ब्याज चयन के क्षेत्र में अंतर-पाठक परिवर्तनशीलता की बढ़ती संभावना के कारण, पाठकों को डेटा संग्रह शुरू करने से पहले प्रांतस्था और हिप्पोकैम्पस में क्षेत्र चयन को अनुकूलित करने के लिए कई नमूना छवियों का उपयोग करके प्रशिक्षित किया गया था। यह प्रशिक्षण अंतर-पाठक परिवर्तनशीलता को कम करने के लिए महत्वपूर्ण है, और जैसा कि देखा जा सकता है (चित्रा 5 ए, बी), दोनों पाठकों द्वारा रिपोर्ट किया गया 6 ई 10-पॉजिटिव क्षेत्र वर्तमान अध्ययन में एक मजबूत सापेक्ष समझौता दिखाता है।
वर्तमान प्रोटोकॉल और परिणाम Aβ-सकारात्मक क्षेत्र परिमाणीकरण पर ब्याज आकार के क्षेत्र के प्रभाव के बारे में मूल्यवान जानकारी प्रदान करते हैं। ब्याज का एक बड़ा क्षेत्र ब्याज के एक छोटे से क्षेत्र से अधिक ऊतक का प्रतिनिधित्व करने की उम्मीद है। इसलिए, ऊतकों में Aβ भार को सटीक रूप से मापने के लिए एक बड़े ऊतक का नमूना लेना वांछनीय है। हालांकि, ऊतक के भीतर समरूप एβ लोड वितरण के मामले में, एक छोटे नमूना क्षेत्र को आमतौर पर विश्लेषण के तहत बड़े ऊतक का एक अच्छा प्रतिनिधित्व माना जाता है। वर्तमान अध्ययन के परिणाम इसकी पुष्टि करते हैं, और पूरे प्रांतस्था और हिप्पोकैम्पस में एβ लोड प्रांतस्था और हिप्पोकैम्पस (चित्रा 5 सी, डी) के एक चयनित उप-क्षेत्र में एβ लोड का एक मजबूत सहसंबंध था। ब्याज विश्लेषण के पूर्ण और उप-क्षेत्रों के बीच समझौते की पुष्टि करने के लिए, कॉर्टेक्स और हिप्पोकैम्पस में औसत 6 ई 10-पॉजिटिव क्षेत्र की तुलना की गई थी, और दो तरीकों (चित्रा 5 ई) के बीच कोई अंतर नहीं पाया गया था। यह पुष्टि करता है कि इनमें से कोई भी विधि (पूर्ण- या उप-क्षेत्र विश्लेषण) तुलनीय Aβ लोड माप उत्पन्न करती है।
वर्तमान प्रोटोकॉल की कुछ सीमाएं हैं। दो विधियों (पूर्ण-क्षेत्र बनाम उप-क्षेत्र विश्लेषण) का उपयोग हमेशा परस्पर विनिमय के लिए नहीं किया जा सकता है। पूर्ण या उप-क्षेत्र विश्लेषण का उपयोग करने का विकल्प ऊतक के भीतर Aβ के क्षेत्रीय वितरण पर निर्भर करेगा, जो एडी माउस मॉडल की आयु, लिंग और तनाव से प्रभावित होता है। 13 महीनों में, एβ लोड एपीपी / पीएस 1 चूहों के प्रांतस्था और हिप्पोकैम्पस में वितरित किया जाता है। हालांकि, 6 महीनों में, Aβ जमा प्रांतस्था तक सीमित हैं, और हिप्पोकैम्पस12 में न्यूनतम जमा देखे जाते हैं। ऐसी स्थितियों के तहत, ब्याज विश्लेषण का पूर्ण क्षेत्र ऊतक नमूना क्षेत्र को बढ़ाने के लिए वांछित दृष्टिकोण हो सकता है और इस तरह एβ सिग्नल। दूसरी ओर, उप-क्षेत्र विश्लेषण पसंद की विधि हो सकती है जब एक विशिष्ट मस्तिष्क क्षेत्र में एβ लोड ब्याज की होती है, (उदाहरण के लिए, सोमैटोसेंसरी कॉर्टेक्स)। इसके अतिरिक्त, 13 महीनों में, एपीपी / पीएस 1 पुरुष चूहों तीव्र 6 ई 10-पॉजिटिव दाग प्रदर्शित करते हैं, और इम्यूनोफ्लोरोसेंट धुंधला होने के परिणामस्वरूप बहुत कम पृष्ठभूमि के साथ एक उत्कृष्ट संकेत होता है, जिससे वर्तमान प्रोटोकॉल दी गई स्थितियों के तहत मात्रा का ठहराव के लिए बहुत उपयुक्त हो जाता है। यह स्पष्ट नहीं है कि क्या इस परिमाणीकरण विधि को कम तीव्र धुंधला करने के लिए सफलतापूर्वक लागू किया जा सकता है, और इस प्रश्न का उत्तर देने के लिए भविष्य के काम की आवश्यकता होगी। यहां प्रस्तुत इम्यूनोफ्लोरोसेंट और छवि परिमाणीकरण विधि अग्रदूत रूप13 सहित एβ के सभी रूपों का पता लगाती है। नतीजतन, यदि किसी विशिष्ट एβ स्पेकी (जैसे, Aβ1-40 या Aβ1-42) का पता लगाने में रुचि है, तो इन Aβ आइसोफॉर्म के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का उपयोग किया जा सकता है। इसलिए, हालांकि 6 ई 10 इम्यूनोफ्लोरोसेंट धुंधला और पता लगाने की विधि एलिसा (चित्रा 5 एफ, जी) का उपयोग करके पूरे मस्तिष्क होमोजेनेट्स में एβ1-42 माप के माप के साथ सहसंबद्ध है, सहसंबंध केवल मामूली था। इसे एलिसा का उपयोग करके केवल Aβ1-42 के माप और 6E10 इम्यूनोस्टेनिंग का उपयोग करके सभी Aβ प्रजातियों का पता लगाने के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है। वर्तमान अध्ययन पूर्ण और उप-क्षेत्रीय विश्लेषणों के बीच समझौते और सहसंबंध का आकलन करने के लिए तीन पाठकों का उपयोग करता है। अतिरिक्त पाठक होने से अध्ययन की मजबूती में सुधार हो सकता है और यहां प्रस्तुत दो तरीकों के बीच समझौतों को और मान्य किया जा सकता है। इसके अलावा, हम समझौते के उपाय के रूप में पियर्सन सहसंबंध का उपयोग करते हैं, जिसका व्यापक रूप से निरंतर चर19 के बीच समझौते का वर्णन करने के लिए अन्य तरीकों के बीच उपयोग किया जाता है। हालांकि, समझौते को निर्धारित करने के लिए पियर्सन सहसंबंध का उपयोग करने की एक सीमा यह है कि यहां उपयोग की जाने वाली दो विधियां संबंधित परिणाम प्रदान कर सकती हैं, लेकिन एक विधि के परिणामस्वरूप व्यवस्थित पूर्वाग्रह के कारण दूसरे की तुलना में समग्र उच्च मूल्य हो सकते हैं। इसलिए, पियर्सन सहसंबंध सापेक्ष समझौते19 का एक अच्छा उपाय है। प्रोटोकॉल की मजबूती को बढ़ाने के लिए, पूर्ण समझौते की पुष्टि करने के लिए अतिरिक्त तरीके, जैसे कि दो तरीकों (चित्रा 5 ई) द्वारा औसत 6 ई 10-सकारात्मक क्षेत्र की तुलना करना,19 का उपयोग किया जा सकता है। एक साथ लिया गया, वर्तमान प्रोटोकॉल इम्यूनोफ्लोरोसेंट धुंधला द्वारा पता लगाए गए एβ लोड की तुलना करता है और मस्तिष्क के ऊतक वर्गों में रुचि के पूर्ण और उप-क्षेत्रों का विश्लेषण करता है। परिणाम 13 महीने पुराने एपीपी / पीएस 1 नर चूहों से प्राप्त मस्तिष्क के ऊतक वर्गों के लिए इन दो तरीकों के बीच एक मजबूत सहसंबंध दिखाते हैं जो प्रचुर मात्रा में एβ जमा दिखाते हैं।
The authors have nothing to disclose.
इस प्रकाशन में रिपोर्ट किए गए शोध को पुरस्कार संख्या आर 01 एजी 062840 (आरकेएस के लिए) और आर 01 एजी 072896 (आरकेएस के लिए) के तहत नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ के नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ एजिंग द्वारा समर्थित किया गया था। सामग्री पूरी तरह से लेखकों की ज़िम्मेदारी है और जरूरी नहीं कि राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के आधिकारिक विचारों का प्रतिनिधित्व करती है। संघीय धन के लगभग $ 200k (100%) ने इस परियोजना का समर्थन किया। हम पांडुलिपि संपादन के साथ उनकी सहायता के लिए डॉ जोशुआ यांग को भी धन्यवाद देना चाहते हैं।
15 mL conical tubes | ThermoFisher Scientific, MA, USA | 339650 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/339650 |
24-well plates | Fisher Scientific, NH, USA | FB012929 | https://www.fishersci.com/shop/products/jet-biofil-surface-treated-steriletissue-culture-plates-3/FB012929 |
Amyloid beta 42 human ELISA kit | ThermoFisher Scientific, MA, USA | KHB3441 | https://www.thermofisher.com/elisa/product/Amyloid-beta-42-Human-ELISA-Kit/KHB3441 |
Aqueous mounting media | Vector laboratories, CA, USA | H-5501-60 | https://vectorlabs.com/products/mounting/vectamount-aq-aqueous-mounting-medium |
Bovine serum albumin | Sigmaaldrich, MO, USA | A2153-50G | https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/sigma/a2153?gclid=CjwKCAjw9aiIBhA1EiwAJ_G TSiZ9B3YGz3RvSpWqCH4CPW78 Dj4WlgxmzPs631z5IHmy5XLV TdC_jBoC9zQQAvD_BwE |
BZ-X710 Keyence all-in-one fluorescence microscope | Keyence, IL, USA | BZ-X710 | https://www.keyence.com/products/microscope/fluorescence-microscope/bz-x700/models/bz-x710/ |
Clear nail poilsh | User preference | NA | None |
Cryostat | Leica Biosystems, IL, USA | Leica CM1860 Cryostat | https://www.leicabiosystems.com/us/histology-equipment/cryostats/leica-cm1860/ |
Formic acid | Sigmaaldrich, MO, USA | F0507-500ML | https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/sigald/f0507?gclid=CjwKCAjw9aiIBhA1EiwAJ_G TSheH6JMGnla50C3Ag0cLzXE8 BObxvDApl0udjYAPZmBGe7a 8PRUv1RoCt34QAvD_BwE |
Glass coverslips | VWR, PA, USA | 48393-081 | https://us.vwr.com/store/product/4645817/vwr-micro-cover-glasses-rectangular |
GraphPad Prism | GraphPad Software, CA, USA | Version 8 | https://www.graphpad.com/scientific-software/prism/ |
ImageJ 1.51k | National Institutes of Health, MD, USA | Version 1.53e | https://imagej.nih.gov/ij/download.html |
Mice | Jackson Laboratories, ME, USA | 034829-JAX | https://www.mmrrc.org/catalog/sds.php?mmrrc_id=34829 |
Paraformaldehyde | Sigmaaldrich, MO, USA | P6148-500G | https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/sial/p6148?gclid=CjwKCAjw9aiIBhA1EiwAJ_G TShtLb9Ax9MmRyrFn6Rfmmg 1l52_5XZFXOeXT24ik8Lkw GH7fvlDoHBoChzYQAvD_BwE |
Phenytoin/pentobarbital based anesthetic (Euthasol) | Patterson Veterinary, MA, USA | 07-805-9296 | https://www.pattersonvet.com/Supplies/ProductFamilyDetails/PIF_32818 |
Phosphate-buffered saline | Fisher Scientific, NH, USA | BP661-50 | https://www.fishersci.com/shop/products/pbs-1x-powder-concentrate-white-granular-powder-fisher-bioreagents-2/BP66150 |
Plus (+) microscope slides | Ted Pella, Inc., CA, USA | 260100 | https://www.tedpella.com/histo_html/slides.htm#260384 |
Primary antibody (6E10) | Biolegend, CA, USA | 803013 | https://www.biolegend.com/en-us/products/alexa-fluor-488-anti-beta-amyloid-1-16-antibody-10833 |
Sucrose | Sigmaaldrich, MO, USA | 47289 | https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/supelco/47289?gclid=CjwKCAjw9aiIBhA1EiwAJ_ GTSuwlymWL_PUl2KIMHymi GLOWluZdPjf3pRcjMEjQD siItfWiG-C2-RoCxyoQAvD_BwE |
Triton X 100 | Sigmaaldrich, MO, USA | T8787-100ML | https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/sigma/t8787?context=product |