رقاقة كبيبات الكلى متساوية المنشأ المصممة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان
Summary
يظهر هنا بروتوكول لهندسة نظام شخصي للأعضاء على رقاقة يلخص بنية ووظيفة حاجز الترشيح الكبيبي للكلى من خلال دمج الخلايا البطانية الظهارية والوعائية المتطابقة وراثيا المتمايزة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان. يمكن لهذا النظام المهندس بيولوجيا تطوير الطب الدقيق للكلى والتطبيقات ذات الصلة.
Abstract
يؤثر مرض الكلى المزمن (CKD) على 15٪ من السكان البالغين في الولايات المتحدة ، ولكن إنشاء العلاجات المستهدفة كان محدودا بسبب عدم وجود نماذج وظيفية يمكنها التنبؤ بدقة بالاستجابات البيولوجية البشرية والسمية الكلوية. يمكن أن تساعد التطورات في الطب الدقيق للكلى في التغلب على هذه القيود. ومع ذلك ، فإن النماذج المختبرية التي تم إنشاؤها سابقا لكبيبات الكلى البشرية – الموقع الرئيسي لترشيح الدم والهدف الرئيسي للعديد من الأمراض وسمية الأدوية – عادة ما تستخدم مجموعات خلايا غير متجانسة ذات خصائص وظيفية محدودة وخلفيات وراثية لا مثيل لها. هذه الخصائص تحد بشكل كبير من تطبيقها على نمذجة الأمراض الخاصة بالمريض والاكتشاف العلاجي.
تقدم هذه الورقة بروتوكولا يدمج الظهارة الكبيبية المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات (iPS) المستحثة بالإنسان (podocytes) والبطانة الوعائية من مريض واحد لهندسة رقاقة كبيبات الكلى المتحولة في الموائع الدقيقة والأوعية الدموية. تتكون رقاقة الكبيبات الناتجة من طبقات الخلايا البطانية والظهارية المشتقة من الخلايا الجذعية التي تعبر عن علامات خاصة بالسلالة ، وتنتج بروتينات الغشاء السفلي ، وتشكل واجهة نسيج الأنسجة تشبه حاجز الترشيح الكبيبي للكلية. تقوم رقاقة الكبيبات الهندسية بتصفية الجزيئات بشكل انتقائي وتلخص إصابة الكلى الناجمة عن الأدوية. القدرة على إعادة تشكيل هيكل ووظيفة كبيبات الكلى باستخدام أنواع الخلايا متساوية المنشأ يخلق الفرصة لنمذجة أمراض الكلى مع خصوصية المريض وتعزيز فائدة الأعضاء على رقائق للطب الدقيق الكلى والتطبيقات ذات الصلة.
Introduction
أجهزة Organ-on-a-chip هي نماذج ديناميكية 3D في المختبر تستخدم التحفيز الجزيئي والميكانيكي ، بالإضافة إلى الأوعية الدموية ، لتشكيل واجهات الأنسجة والأنسجة التي تنمذج بنية ووظيفة أعضاء معينة. تتكون الأجهزة التي تم إنشاؤها سابقا على رقاقة والتي تهدف إلى تلخيص كبيبات الكلى (رقائق الكبيبات) من خطوط الخلايا الحيوانية1 أو خطوط الخلايا الأولية والخالدة البشرية من مصادر غير متجانسة 2,3. يقدم استخدام مصادر الخلايا غير المتجانسة وراثيا اختلافات تحد بشكل كبير من دراسات الاستجابات الخاصة بالمريض وعلم الوراثة أو آليات المرض 4,5. تعتمد مواجهة هذا التحدي على توافر خطوط الخلايا متساوية المنشأ التي تنشأ من أفراد محددين لديهم ملامح جزيئية وجينية محفوظة لتوفير بيئة دقيقة أكثر دقة للهندسة في النماذج المختبرية 2،3،6. يمكن الآن توليد خطوط الخلايا المتساوية المنشأ من أصل بشري بسهولة بسبب التقدم في زراعة خلايا iPS البشرية. نظرا لأن خلايا iPS البشرية عادة ما تكون مصدرها غير الغازي ، ويمكن أن تجدد ذاتيا إلى أجل غير مسمى ، وتتمايز إلى أي نوع من الخلايا تقريبا ، فإنها تعمل كمصدر جذاب للخلايا لإنشاء نماذج في المختبر ، مثل رقاقة الكبيبات 7,8. حاجز الترشيح الكبيبي هو الموقع الرئيسي لترشيح الدم. يتم ترشيح الدم أولا من خلال بطانة الأوعية الدموية ، الغشاء السفلي الكبيبي ، وأخيرا من خلال ظهارة متخصصة تسمى podocytes. تساهم جميع المكونات الثلاثة لحاجز الترشيح في الترشيح الانتقائي للجزيئات. يظهر هنا بروتوكول لإنشاء جهاز عضو على رقاقة متصل بالبطانة الوعائية والظهارة الكبيبية من مصدر خلية iPS بشري واحد. في حين أن هذا البروتوكول مفيد بشكل خاص لهندسة شريحة متساوية المنشأ والأوعية الدموية لتلخيص حاجز الترشيح الكبيبي ، فإنه يوفر أيضا مخططا لتطوير أنواع أخرى من الأعضاء الشخصية على الرقائق والمنصات متعددة الأعضاء مثل نظام “الجسم على رقاقة” متساوي المنشأ.
يبدأ البروتوكول الموصوف هنا بالتمايز المتباعد لخلايا iPS البشرية إلى سلالتين منفصلتين – خلايا الأديم المتوسط الجانبية والأديم المتوسط ، والتي يتم تمييزها لاحقا إلى بطانة وعائية وظهارة كبيبية ، على التوالي. لتوليد خلايا الأديم المتوسط الجانبية ، تم زرع خلايا iPS البشرية على ألواح مصفوفة الغشاء السفلي 1 المغلفة وزرعها لمدة 3 أيام (بدون تبادل الوسائط) في وسط N2B27 المكمل بمنشط Wnt ، CHIR 99021 ، ومحفز الأديم المتوسط القوي ، العظام المورفوجينية 4 (BMP4). تميزت خلايا الأديم المتوسط الجانبية الناتجة سابقا بالتعبير عن brachyury (T) ، و Homeobox الشبيه بالمزيج (MIXL) ، و eomesodermin (EOMES) 9. في وقت لاحق ، تم استزراع خلايا الأديم المتوسط الجانبية لمدة 4 أيام في وسط مكمل ب VEGF165 و Forskolin لحث الخلايا البطانية الوعائية التي تم فرزها بناء على تعبير VE-Cadherin و / أو PECAM-1 باستخدام فرز الخلايا المنشطة مغناطيسيا (MACS). تم توسيع الخلايا البطانية الوعائية الناتجة (viEC) عن طريق زراعتها على مصفوفة الغشاء السفلي 3 قوارير مغلفة حتى تصبح جاهزة للبذر في جهاز الموائع الدقيقة.
لتوليد خلايا الأديم المتوسط ، تم زرع خلايا iPS البشرية على ألواح مصفوفة الغشاء السفلي 2-المغلفة وزرعت لمدة يومين في وسط يحتوي على Activin A و CHIR99021. تميزت خلايا الأديم المتوسط الناتجة بالتعبير عن HAND1 و goosecoid و brachury (T) كما هو موضح سابقا2،10،11. للحث على تمايز خلايا الأديم المتوسط (IM) ، تم استزراع خلايا الأديم المتوسط لمدة 14 يوما في وسط مكمل ب BMP-7 و CHIR99021. تعبر خلايا IM الناتجة عن ورم Wilm’s Tumor 1 (WT1) ، والجين المربع المقترن 2 (PAX2) ، والبروتين المرتبط الغريب الذي تم تخطيه (OSR-1) 2,10,11.
تم تصميم رقاقة متعددة الميثيل سيلوكسان (PDMS) ثنائية القناة قائمة على الموائع الدقيقة لتلخيص بنية حاجز الترشيح الكبيبي في المختبر. القناة البولية هي 1000 ميكرومتر × 1000 ميكرومتر (عرض × ارتفاع) وبعد القناة الشعرية هو 1000 ميكرومتر × 200 ميكرومتر (عرض × ارتفاع). تم تسهيل دورات التمدد والاسترخاء الدورية من خلال الغرف المجوفة الموجودة على كل جانب من جوانب القنوات السائلة. تم زرع الخلايا على غشاء PDMS مرن (بسماكة 50 ميكرومتر) يفصل بين القنوات البولية والشعيرات الدموية. تم تجهيز الغشاء بمسام سداسية (قطرها 7 ميكرومتر ، على بعد 40 ميكرومتر) للمساعدة في تعزيز الإشارات بين الخلايا (الشكل 1A)2,12. قبل يومين من اكتمال تحريض IM ، تم طلاء رقائق الموائع الدقيقة بمصفوفة غشاء الطابق السفلي 2. تم زرع viECs في القناة الشعرية لرقاقة الموائع الدقيقة باستخدام وسيط الصيانة البطانية قبل 1 يوم من اكتمال تحريض IM ، وتم قلب الشريحة رأسا على عقب لتمكين التصاق الخلايا على الجانب القاعدي من غشاء PDMS المطلي ب ECM. في اليوم الذي تم فيه الانتهاء من تحريض IM ، تم زرع الخلايا في القناة البولية لرقاقة الموائع الدقيقة باستخدام وسط مكمل ب BMP7 و Activin A و CHIR99021 و VEGF165 وجميع حمض الريتينويك العابر للحث على تمايز الخلايا البودوسية داخل الشريحة. في اليوم التالي ، تم ملء خزانات الوسائط بوسط تحريض Podocyte ووسط الصيانة البطانية ، وتم تطبيق إجهاد ميكانيكي بنسبة 10٪ عند 0.4 هرتز وتدفق السوائل (60 ميكرولتر / ساعة) على الرقائق.
تم استزراع رقائق الموائع الدقيقة الخلوية لمدة 5 أيام إضافية باستخدام وسيط تحريض Podocyte (في القناة البولية) ووسط الصيانة البطانية (في القناة الوعائية). تم استزراع رقائق كبيبات الكلى الناتجة لمدة تصل إلى 7 أيام إضافية في وسائط الصيانة لكل من الخلايا الكبدية والخلايا البطانية. عبرت الخلايا البدوية المتباينة بشكل إيجابي عن البروتينات الخاصة بالسلالة ، بما في ذلك البودوسين والنيفرين13,14 ، في حين عبرت viECs بشكل إيجابي عن بروتينات تحديد النسب PECAM-1 و VE-Cadherin ، وكلها جزيئات أساسية للحفاظ على سلامة حاجز الترشيح الكبيبي15,16 . تم العثور على كل من podocytes و viECs لإفراز بروتين الغشاء السفلي الكبيبي الأكثر وفرة ، الكولاجين الرابع ، وهو أمر مهم أيضا لنضج الأنسجة ووظيفتها.
تم العثور على النظام المكون من ثلاثة مكونات لحاجز الترشيح – البطانة ، الغشاء السفلي ، والظهارة – في رقائق الكبيبات لتصفية الجزيئات بشكل انتقائي والاستجابة لعلاج دوائي كيميائي سام للكلى. أشارت نتائج العلاج الدوائي إلى أنه يمكن استخدام رقاقة الكبيبات لدراسات السمية الكلوية ونمذجة الأمراض. يوفر هذا البروتوكول المبدأ التوجيهي العام لهندسة رقاقة كبيبات الكلى الموائع الدقيقة الوظيفية من مشتقات خلايا iPS متساوية المنشأ. يمكن إجراء التحليلات النهائية للرقاقة الهندسية حسب رغبة الباحث. لمزيد من المعلومات حول استخدام رقاقة الكبيبات لنمذجة الإصابة الكبيبية الناجمة عن المخدرات ، راجع المنشورات السابقة 2,12.
Protocol
Representative Results
Discussion
في هذا التقرير ، نوجز بروتوكولا لاشتقاق بطانة الأوعية الدموية والظهارة الكبيبية (podocytes) من خط خلايا iPS بشري متساوي المنشأ واستخدام هذه الخلايا لهندسة نظام 3D organ-on-a-chip الذي يحاكي البنية ، وواجهة الأنسجة والأنسجة ، ووظيفة الترشيح الجزيئي لكبيبات الكلى. تم تجهيز رقاقة الكبيبات هذه بالظهارة ال…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
تم دعم هذا العمل من قبل كلية برات للهندسة في جامعة ديوك ، وقسم أمراض الكلى في قسم الطب في ديوك ، ومنحة وايتهيد في البحوث الطبية الحيوية ، وجائزة أبحاث Genentech ل S. Musah. حصل Y. Roye على منحة جامعة ديوك – مؤسسة ألفريد بي سلون وزمالة ويليام إم “مونتي” رايشرت للدراسات العليا من قسم الهندسة الطبية الحيوية بجامعة ديوك. تم إنشاء خط خلايا iPS DU11 (استنساخ جامعة ديوك # 11) في منشأة Duke iPSC الأساسية وتم توفيره لنا من قبل مختبر Bursac في جامعة ديوك. ويشكر المؤلفون ن. أبوتالب وج. هولمز ور. بهاتاشاريا وي. تشو على المساعدة التقنية والمناقشات المفيدة. كما يود المؤلفون أن يشكروا أعضاء مختبر موسى على تعليقاتهم المفيدة على المخطوطة. يشكر المؤلفون مختبر Segura Lab على هدية مقياس التدفق الخلوي Acuri C6.
Materials
| Antibodies | |||
| Alexa Fluor 488- and Alexa Fluor 594-conjugated secondary antibodies | Thermo/Life Technologies | A32744; A32754; A-11076; A32790; A21203; A11015 | |
| Collagen IV | Thermo/Life Technologies | 14-9871-82 | |
| Nephrin | Progen | GP-N2 | |
| PECAM-1 | R&D Systems | AF806 | |
| Podocin | Abcam | ab50339 | |
| VE-Cadherin | Santa Cruz | sc-9989 | |
| Basement membrane matrices | |||
| Corning Fibronectin, Human | Corning | 356008 | Basement membrane (3) |
| iMatrix-511 Laminin-E8 (LM-E8) fragment | Iwai North America | N8922012 | Basement membrane matrix (2) |
| Matrigel hESC-qualified matrix, 5-mL vial | BD Biosciences | 354277 | Basement membrane matrix (1); may show lot-to-lot variation |
| Cells | |||
| DU11 human iPS cells | The DU11 (Duke University clone #11) iPS cell line was generated at the Duke iPSC Core Facility and provided to us by the Bursac Lab at Duke University. The line has been tested and found to be free of mycoplasma (last test in November 2021) and karyotype abnormalities (July 2019) | ||
| Culture medium growth factors and media supplements | |||
| 0.5M EDTA, pH 8.0 | Invitrogen | 15575020 | |
| 2-Mercaptoethanol | Thermo/Life Technologies | 21985023 | |
| Albumin from Bovine serum, Texas Red conjugate | Thermo/Life Technologies | A23017 | |
| All-trans retinoic acid (500 mg) | Stem Cell Technologies | 72262 | |
| B27 serum-free supplement | Thermo/Life Technologies | 17504044 | |
| B-27 supplement (50x) without Vitamin A | Thermo/Life Technologies | 12587010 | |
| Bovine serum albumin | Sigma-Aldrich | A9418 | |
| CHIR99021 | Stemgent | 04-0004 | May show lot-to-lot variation |
| Complete medium kit with CultureBoost-R | Cell Systems | 4Z0-500-R | Podocyte maintenance media |
| DMEM/F12 | Thermo/Life Technologies | 12634028 | |
| DMEM/F12 with GlutaMAX supplement | Thermo/Life Technologies | 10565042 | DMEM/F12 with glutamine |
| Forskolin (Adenylyl cyclase activator) | Abcam | ab120058 | |
| GlutaMAX supplement | Thermo/Life Technologies | 35050061 | glutamine supplement |
| Heat-inactivated FBS | Thermo/Life Technologies | 10082147 | |
| Heparin solution | Stem Cell Technologies | 7980 | |
| Human Activin A | Thermo/Life Technologies | PHC9544 | |
| Human BMP4 | Preprotech | 120-05ET | |
| Human BMP7 | Thermo/Life Technologies | PHC9544 | |
| Human VEGF | Thermo/Life Technologies | PHC9394 | |
| Inulin-FITC | Sigma-Aldrich | F3272 | |
| mTeSR1 medium | Stem Cell Technologies | 05850 | Human iPS cell culture media (CCM). Add 5x supplement according to the manufacturer. Human iPS CCM can be stored for up to 6 months at -20 °C. |
| N-2 Supplement (100x) | Thermo/Life Technologies | 17502048 | |
| Neurobasal media | Thermo/Life Technologies | 21103049 | Lateral mesoderm basal media |
| PBS (Phosphate-buffered saline) | Thermo/Life Technologies | 14190-250 | |
| Penicillin-streptomycin, liquid (100x) | Thermo/Life Technologies | 15140-163 | |
| ROCK inhibitor (Y27632) | Tocris | 1254 | |
| StemPro-34 SFM | Thermo/Life Technologies | 10639011 | Endothelial cell culture medium (CCM). Add supplement according to manufacturer. Endothelial CCM can be stored for up to two weeks at 4 °C or -20 °C for up to 6 months. |
| TGF-Beta inhibitor (SB431542) | Stem Cell Technologies | 72234 | |
| Enzymes and other reagents | |||
| Accutase | Thermo/Life Technologies | A1110501 | Cell detachment buffer |
| Dimethyl Suloxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D2438 | |
| Ethanol solution, 70% (vol/vol), biotechnology grade | VWR | 97065-058 | |
| Paraformaldehyde (PFA) | Thermo/Life Technologies | 28906 | |
| Sterile distilled water | Thermo/Life Technologies | 15230162 | |
| Triton X-100 | VWR | 97062-208 | |
| Equipment | |||
| Trypsin EDTA, 0.05% | Thermo/Life Technologies | 25300-120 | |
| (Orb) Hub module | Emulate | ORB-HM1 | |
| 100mm x 15 mm round petri dish | Fisherbrand | FB087579B | |
| 120 x 120 mm square cell culture dish | VWR | 688161 | |
| Accuri C6 | BD Biosciences | ||
| Aspirating pipettes, individually wrapped | Corning | 29442-462 | |
| Aspirating Unit | SP Bel-Art | F19917-0150 | |
| Avanti J-15R Centrifuge | Beckman Coulter | B99516 | |
| Conical centrifuge tube, 15 mL | Corning | 352097 | |
| Conical centrifuge tube, 50 mL | Corning | 352098 | |
| EVOS M7000 | Thermo/Life Technologies | AMF7000 | Fluorescent microscope to take images of fixed and stained cells. |
| Hemocytometer | VWR | 100503-092 | |
| Heracell VIOS 160i CO2 incubator | Thermo/Life Technologies | 51030403 | |
| Inverted Zeiss Axio Observer equipeed with AxioCam 503 camera | Carl Zeiss Micrscopy | 491916-0001-000(microscope) ; 426558-0000-000(camera) | |
| Kimberly-Clark nitrile gloves | VWR | 40101-346 | |
| Kimwipes, large | VWR | 21905-049 | |
| Leoca SP8 Upright Confocal Microscope | |||
| Media reservoir (POD Portable Module) | Emulate | POD-1 | |
| Microplate shaker | VWR | 12620-926 | |
| Organ-chip | Emulate | S-1 Chip | |
| Organ-chip holder | Emulate | AK-CCR | |
| P10 precision barrier pipette tips | Denville Scientific | P1096-FR | |
| P100 barrier pipette tips | Denville Scientific | P1125 | |
| P1000 barrier pipette tips | Denville Scientific | P1121 | |
| P20 barrier pipette tips | Denville Scientific | P1122 | |
| P200 barrier pipette tips | Denville Scientific | P1122 | |
| Plasma Asher | Quorum tech | K1050X RF | This Plasma Etcher/Asher/Cleaner was used as a part of Duke University's Shared Materials Instrumentation Facility (SMiF). |
| Round bottom polystyrene test tube with cell strainer snap cap | Corning | 352235 | |
| Serological pipette, 10 mL, indivdually wrapped | Corning | 356551 | |
| Serological pipette, 25 mL, indivdually wrapped | Corning | 356525 | |
| Serological pipette, 5 mL, indivdually wrapped | Corning | 356543 | |
| Steriflip, 0.22 µm, PES | EMD Millipore | SCGP00525 | |
| Sterile Microcentrifuge tubes | Thomas Scientific | 1138W14 | |
| T75cm2 cell culture flask with vent cap | Corning | 430641U | |
| Tissue culture-treated 12 well plates | Corning | 353043 | |
| Tissue culture-treated 6 well plates | Corning | 353046 | |
| Vacuum modulator and perstaltic pump (Zoe Culture Module) | Emulate | ZOE-CM1 | Organ Chip Bioreactor |
| VE-Cadherin CD144 anti-human antibody – APC conjugated | Miltenyi Biotec | 130-126-010 | |
| Wide-beveled cell lifter | Corning | 3008 | |
| MACS | |||
| CD144 MicroBeads, human | Miltenyi Biotec | 130-097-857 | |
| CD31 MicroBead Kit, human | Miltenyi Biotec | 130-091-935 | |
| LS columns | Miltenyi Biotec | 130-042-401 |
Referências
- Wang, L., et al. A disease model of diabetic nephropathy in a glomerulus-on-a-chip microdevice. Lab on a Chip. 17 (10), 1749-1760 (2017).
- Musah, S., et al. Mature induced-pluripotent-stem-cell-derived human podocytes reconstitute kidney glomerular-capillary-wall function on a chip. Nature Biomedical Engineering. 1 (5), 1-12 (2017).
- Petrosyan, A., et al. A glomerulus-on-a-chip to recapitulate the human glomerular filtration barrier. Nature Communications. 10 (1), 3656 (2019).
- Hass, R., Kasper, C., Böhm, S., Jacobs, R. Different populations and sources of human mesenchymal stem cells (MSC): A comparison of adult and neonatal tissue-derived MSC. Cell Communication and Signaling. 9, 12 (2011).
- Altschuler, S. J., Wu, L. F. Cellular heterogeneity: when do differences make a difference. Cell. 141 (4), 559-563 (2010).
- Da Sacco, S., et al. A novel source of cultured podocytes. PloS One. 8 (12), 81812 (2013).
- Singh, V. K., Kalsan, M., Kumar, N., Saini, A., Chandra, R. Induced pluripotent stem cells: applications in regenerative medicine, disease modeling, and drug discovery. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 3, 2 (2015).
- Ebert, A. D., Liang, P., Wu, J. C. Induced pluripotent stem cells as a disease modeling and drug screening platform. Journal of cardiovascular pharmacology. 60 (4), 408-416 (2012).
- Patsch, C., et al. Generation of vascular endothelial and smooth muscle cells from human pluripotent stem cells. Nature Cell Biology. 17 (8), 994-1003 (2015).
- Musah, S., Dimitrakakis, N., Camacho, D. M., Church, G. M., Ingber, D. E. Directed differentiation of human induced pluripotent stem cells into mature kidney podocytes and establishment of a Glomerulus Chip. Nature Protocols. 13 (7), 1662-1685 (2018).
- Burt, M., Bhattachaya, R., Okafor, A. E., Musah, S. Guided differentiation of mature kidney podocytes from human induced pluripotent stem cells under chemically defined conditions. Journal of Visualized Experiments. (161), e61299 (2020).
- Roye, Y. A personalized glomerulus chip engineered from stem cell-derived epithelium and vascular endothelium. Micromachines. 12 (8), 967 (2021).
- Roselli, S., et al. Podocin localizes in the kidney to the slit diaphragm area. The American Journal of Pathology. 160 (1), 131-139 (2002).
- Ruotsalainen, V., et al. Nephrin is specifically located at the slit diaphragm of glomerular podocytes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (14), 7962-7967 (1999).
- Privratsky, J. R., Newman, P. J. PECAM-1: regulator of endothelial junctional integrity. Cell and Tissue Research. 355 (3), 607-619 (2014).
- Menon, M. C., Chuang, P. Y., He, C. J. The glomerular filtration barrier: components and crosstalk. International Journal of Nephrology. 2012, 749010 (2012).
- Abutaleb, N. O., Truskey, G. A. Differentiation and characterization of human iPSC-derived vascular endothelial cells under physiological shear stress. STAR Protocols. 2 (2), 100394 (2021).
- Pammolli, F., Magazzini, L., Riccaboni, M. The productivity crisis in pharmaceutical R&D. Nature Reviews. Drug Discovery. 10 (6), 428-438 (2011).
- Atchison, L., et al. iPSC-derived endothelial cells affect vascular function in a tissue-engineered blood vessel model of Hutchinson-Gilford progeria syndrome. Stem Cell Reports. 14 (2), 325-337 (2020).
