कोविड-19 से जुड़े मध्य कान पैथोलॉजी के आकलन के लिए हाई-स्पीड ह्यूमन टेम्पोरल बोन सेक्शनिंग
Summary
यह लेख तेजी से मानव अस्थायी हड्डी सेक्शनिंग के लिए एक तकनीक का वर्णन करता है जो तेजी से डिकैल्सीफिकेशन और लौकिक हड्डी इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के विश्लेषण के लिए पतले स्लाइस उत्पन्न करने के लिए जुड़वां हीरे के ब्लेड के साथ एक माइक्रोसॉ का उपयोग करता है।
Abstract
मानव लौकिक हड्डी वर्गों का हिस्टोपैथोलॉजिकल विश्लेषण आंतरिक और मध्य कान विकृति का अध्ययन करने के लिए एक मौलिक तकनीक है। अस्थायी हड्डी वर्गों को पोस्टमॉर्टम अस्थायी हड्डी फसल, निर्धारण, डिकैल्सीफिकेशन, एम्बेडिंग और धुंधला द्वारा तैयार किया जाता है। अस्थायी हड्डी के घनत्व के कारण, डिकैल्सीफिकेशन एक समय लेने वाली और संसाधन-गहन प्रक्रिया है; पूर्ण ऊतक तैयारी में औसतन 9-10 महीने लग सकते हैं। यह ओटोपैथोलॉजी अनुसंधान को धीमा कर देता है और समय-संवेदनशील अध्ययनों में बाधा डालता है, जैसे कि कोविड-19 महामारी के लिए प्रासंगिक। यह पत्र ऊतक प्रसंस्करण को गति देने के लिए अस्थायी हड्डी वर्गों की तेजी से तैयारी और विघटन के लिए एक तकनीक का वर्णन करता है।
टेम्पोरल हड्डियों को मानक तकनीकों का उपयोग करके पोस्टमॉर्टम काटा गया और 10% फॉर्मलिन में तय किया गया। जुड़वां हीरे के ब्लेड के साथ एक सटीक माइक्रोसॉ का उपयोग प्रत्येक खंड को तीन मोटे वर्गों में काटने के लिए किया गया था। मोटी अस्थायी हड्डी वर्गों को पैराफिन में एम्बेडेड होने से पहले 7-10 दिनों के लिए डिकैल्सीफाइंग समाधान में डिकैल्सीफाइड किया गया था, क्रायोटोम का उपयोग करके पतले (10 μm) वर्गों में विभाजित किया गया था, और अनचार्ज स्लाइड पर घुड़सवार किया गया था। ऊतक के नमूनों को तब एंटीबॉडी धुंधला (एसीई 2, टीएमपीआरएसएस 2, फ्यूरिन) के लिए डिपैराफिनाइज्ड और पुनर्जलीकृत किया गया था और इमेज किया गया था। इस तकनीक ने फसल से ऊतक विश्लेषण तक के समय को 9-10 महीने से घटाकर 10-14 दिन कर दिया। हाई-स्पीड टेम्पोरल बोन सेक्शनिंग ओटोपैथोलॉजी अनुसंधान की गति को बढ़ा सकती है और ऊतक तैयार करने के लिए आवश्यक संसाधनों को कम कर सकती है, जबकि कोविड-19 से संबंधित समय-संवेदनशील अध्ययनों की सुविधा भी प्रदान कर सकती है।
Introduction
मानव अस्थायी हड्डी अनुसंधान आंतरिक और मध्य कान के विकृति विज्ञान और पैथोफिजियोलॉजी का अध्ययन करने के लिए एक अमूल्य संसाधन प्रदान करता है। 19 वीं शताब्दी से पहले, ओटोलॉजिकल बीमारी 1,2,3 के बारे में बहुत कम जानकारी थी। ओटोलॉजिक बीमारी को बेहतर ढंग से समझने और “नीम हकीमों के हाथों से कर्ण सर्जरी को बचाने के लिए,” जोसेफ टॉयनबी (1815-1866) ने मानव लौकिक हड्डी के हिस्टोलॉजिकल वर्गों का अध्ययन करने के तरीके विकसितकिए 3. इस काम को आगे बढ़ाया गया था एडम पोलिट्जर (1835-1920) में वियना और 19 वीं शताब्दी के शेष के दौरान यूरोप भर में अन्य, जिन्होंने कान 2,3,4 को प्रभावित करने वाली कई सामान्य स्थितियों के हिस्टोपैथोलॉजी का वर्णन करने के लिए अस्थायी हड्डी वर्गों का उपयोग किया।
संयुक्त राज्य अमेरिका में पहली मानव लौकिक हड्डी प्रयोगशाला 1927 में जॉन्स हॉपकिन्स अस्पताल में खोली गई थी, जहां स्टेसी गिल्ड (1890-1966) ने अस्थायी हड्डी सेक्शनिंग 5,6 के लिए तरीके विकसितकिए थे। गिल्ड द्वारा विकसित विधियों में 9-10 महीने की प्रक्रिया शामिल थी जिसमें पोस्टमॉर्टम फसल, निर्धारण, नाइट्रिक एसिड में डिकैल्सीफिकेशन, इथेनॉल में निर्जलीकरण, सेलोइडिन एम्बेडिंग, सेक्शनिंग, धुंधला और बढ़ते शामिल थे। इस तकनीक में संशोधन बाद में हेरोल्ड शुकनेक्ट (1917-1996)7 द्वारा किए गए थे; हालाँकि, इस प्रक्रिया के मूल घटक अनिवार्य रूप से अपरिवर्तित रहते हैं।
एक अस्थायी हड्डी प्रयोगशाला को बनाए रखने के लिए आवश्यक महत्वपूर्ण संसाधनों ने अस्थायी हड्डी अनुसंधान के लिए एक चुनौती प्रस्तुत की है और संभवतः पिछले 30 वर्षों में इसकी घटती लोकप्रियता में योगदान दियाहै 4,8। अस्थायी हड्डी प्रयोगशाला संसाधनों का एक महत्वपूर्ण हिस्सा अस्थायी हड्डी की तैयारी की 9-10 महीने की प्रक्रिया के लिए समर्पित होना चाहिए। तैयारी में सबसे अधिक समय लेने वाले चरणों में से एक अस्थायी हड्डी का विघटन है, जो मानव शरीर में सबसे घनी हड्डी है। डिकैल्सीफिकेशन आमतौर पर नाइट्रिक एसिड या एथिलीनडियामाइनटेट्राएसेटिक एसिड (ईडीटीए) में किया जाता है और समाधान 7,9 के लगातार बदलने की आवश्यकता के दौरान हफ्तों से महीनों तक लगते हैं। इसके अलावा, मानव कान के समय-संवेदनशील अध्ययन, जैसे कि कोविड-19 महामारी से संबंधित, इस धीमी तैयारी प्रक्रिया से बाधित हो सकते हैं। यह पेपर उच्च गति वाले अस्थायी हड्डी सेक्शनिंग के लिए एक तकनीक का वर्णन करता है जो मोटे वर्गों को उत्पन्न करने के लिए एक हीरे के माइक्रोसॉ का उपयोग करता है जो अस्थायी हड्डी की कटाई के 10-14 दिनों के भीतर तेजी से विघटन और ऊतक विश्लेषण की अनुमति देता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
मानव अस्थायी हड्डी अनुसंधान आंतरिक और मध्य कान विकृति विज्ञान का अध्ययन करने के लिए महत्वपूर्ण है, लेकिन एक समय और संसाधन-गहन प्रयास बना हुआ है। यह पत्र एक ऐसी तकनीक का वर्णन करता है जो मोटी अस्थायी हड्…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम इस परियोजना में उनकी सहायता के लिए मोहम्मद लहर को धन्यवाद देते हैं। यह काम आंशिक रूप से राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (टी 32डीसी000027, एनएसए) द्वारा समर्थित था।
Materials
| Anti-ACE-2 Antibody (1:50 applied dilution) | Novus Biologicals | SN0754 | |
| Anti-Furin Antibody (1:250 dilution) | Abcam | EPR 14674 | |
| Anti-TMPRSS2 Antibody (1:1,000 dilution) | Novus Biologicals | NBP1-20984 | |
| BX43 Manual System Microscope | Olympus Life Science Solutions | ||
| CBN/Diamond Hybrid Wafering Blade | Pace Technologies | WB-007GP | |
| Collin Mallet – 8'' | Surgical Mart | SM1517 | |
| DS-Fi3 Microscope Camera | Nikon | ||
| Dual Endogenous Enzyme Block (commercial blocking solution) | Dako | S2003 | |
| Eaosin Stain | Sigma-Aldrich | 548-24-3 | |
| Formalin solution, neutral buffered 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 | |
| Formical-4 Decalcifier (formic acid decalcifying solution) | StatLab | 1214-1 GAL | |
| Hematoxylin Stain | Sigma-Aldrich | H9627 | |
| HRP-Conjugated Anti-Rabbit Secondary Antibody (1:100 dilution) | Leica Biosystems | PV6119 | |
| ImmPRESS HRP Horse Anti-Goat igG Detection Kit, Peroxidase (1:100 dilution) | Vector Laboratories | MP-7405 | |
| Lambotte Osteotome | Surgical Mart | SM1553 | |
| Metallographic PICO 155P Precision Saw | Pace Technologies | PICO 155P | microsaw |
| NIS Elements Software Version 4.6 | Nikon | ||
| Paraplast Plus | Sigma-Aldrich | P3683 | paraffin |
| Positive Charged Microscope Slides with White Frosted End | Walter Products | 1140B15 | |
| Thermo Shandon Crytome FSE Cryostat Microtome | New Life Scientific Inc. | A78900104 | cryotome |
| Triology Pretreatment Solution (commercial pretreatment solution) | Sigma-Aldrich | 920P-05 | |
| Xylene | Sigma-Aldrich | 920P-05 |
Referências
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