O artigo descreve um protocolo de resgate embrionário para a regeneração de embriões imaturos derivados da hibridização interespecífica de Cucurbita pepo e Cucurbita moschata. O protocolo pode ser facilmente replicado e será um recurso importante para os programas de melhoramento de abóbora.
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Artigo de método
Protocolo de Resgate de Embriões para Hibridização Interespecífica em Abóbora
Neste artigo
Resumo
Resumo
A hibridação interespecífica em culturas de Cucurbita (abóbora) é desejável para ampliar a variação genética e para a introgressão de alelos úteis. Os embriões imaturos gerados a partir desses cruzamentos largos devem ser regenerados usando técnicas apropriadas de resgate embrionário. Embora esta técnica esteja bem estabelecida para muitas culturas, falta uma descrição detalhada da metodologia apropriada para a abóbora que permita sua aplicação de rotina. Aqui, descrevemos um protocolo de resgate embrionário útil para hibridização interespecífica de C. pepo e C . moschata. Para identificar combinações viáveis para o resgate embrionário, foram realizados 24 cruzamentos interespecíficos. A frutificação foi obtida a partir de vinte e dois cruzamentos, indicando uma taxa de sucesso de 92%. No entanto, a maioria dos frutos obtidos foi partenocárpica, com sementes desprovidas de embriões (sementes vazias). Apenas uma combinação cruzada continha embriões imaturos que poderiam ser regenerados usando meios basais de crescimento de plantas. Um total de 10 embriões foram resgatados do fruto interespecífico F1 , e a taxa de sucesso do resgate embrionário foi de 80%. O protocolo de resgate de embriões aqui desenvolvido será útil para hibridização interespecífica em programas de melhoramento de abóbora.
Introdução
Cucurbita (2n = 40) é um género botânico pertencente à família Cucurbitaceae, que contém 27 espécies diferentes, das quais cinco são domesticadas1. Entre estes, Cucurbita moschata, C. pepo e C. maxima são os mais importantes economicamente em todo o mundo. Nos EUA, C. moschata e C. pepo são as duas espécies mais importantes na produção agrícola. C. pepo consiste em quatro subespécies (ovifera, pepo, fraternal e gumala) que contêm grupos de cultivares de abóbora de verão e inverno de crookneck, straightneck, bolota, vieira, cocozelle, medula vegetal, abobri....
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Protocolo
1. Plantio e polinização
NOTA: É importante identificar genótipos compatíveis cuja hibridização resultaria em frutificação e produção de embriões viáveis.
- Condições de plantio e manutenção
- Obter sementes de genótipos de abóbora (cultivares/acessos) para hibridização (Tabela 1).
- Encher 50 planos de partida de células (25 cm de largura x 50 cm de comprimento) com meio de envasamento alterado com fertilizante NPK completo contendo 1,38 g/kg de N, 1,38 g/kg de P e 1,38 g/kg de K.
- Semeie as sementes a uma profundidade igual ao seu comprimento e cubra com meio de envasamento....
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Resultados
Frutificação e viabilidade das sementes
Um teste inicial foi realizado para determinar o conjunto de frutos e a viabilidade das sementes em uma variedade de combinações cruzadas. Foram escolhidos 15 genótipos de abóbora, quatro de C. pepo e 11 de C. moschata (Tabela 1). Das 24 combinações cruzadas interespecíficas tentadas, obteve-se um conjunto de frutos para 22 (Tabela 2), representando um sucesso global de >92% no fruto. Nenhum fruto maduro foi.......
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Discussão
Existem dois gargalos principais para uma hibridização interespecífica bem-sucedida entre C. moschata e C. pepo: a barreira de compatibilidade cruzada, que é determinada pela capacidade de resposta do genótipo para produzir embriões híbridos, e as barreiras pós-fertilização, que dificultam o desenvolvimento de embriões híbridos para sementes normais. Conforme relatado anteriormente para a abóbora, o teste de compatibilidade cruzada no presente estudo revelou que a maioria dos frutos se desenvolveu parte.......
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Divulgações
Os autores declaram não haver conflitos de interesse.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo USDA National Institute of Food and Agriculture, NRS Project No. FLA-TRC-006176 e o Instituto de Ciências Alimentares e Agrárias da Universidade da Flórida.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| ampicilina | Fisher Scientific | BP1760-5 | |
| autoclave | Steris | AMSCO LAB 250 | |
| equilíbrio | |||
| cefotaxima | Sigma Alfrich | C 7039 | |
| tubos de centrífuga (1,5 ml) | Sigma Alfrich | T9661 | |
| detergente | |||
| etanol, 95% | Pinça Decon Labs | 2805HC | |
| VWR | 82027-408 | ||
| goma gelana | Caisson Laboratories | G024 | |
| ou prateleira | |||
| capuz laminar / armário de biossegurança | The Baker Company, Inc | Fita adesiva Edgegard | |
| Uline | S-11735 | ||
| mídia garrafa | |||
| Murashige & Skoog Medium | Research Products International | M10200 | |
| NPK fertilizante (20-20-20) | BWI Companies, Inc | PR200 | |
| Osmocote Plus fertilizante | BWI Companie,s Inc | OS90590 | |
| Parafilm M | Sigma Alfrich | P7793 | |
| Placa de Petri (60 x 15 mm) | USA Scientific, Inc | 8609-0160 | |
| vasos de plantas | BWI Companies, Inc | NP4000BXL | |
| recipientes de plástico para alimentos, reutilizados | Oscar Mayer | 4470003330 | |
| etiquetas de pendurar de plástico | Amazon | B07QTZRY6T | |
| mistura de envasamento Bandejas | C/B | Pro-Line da Jolly | |
| Gardener BWI Companies Inc | GPPF128S4 | ||
| seringa (0,22 um) | Suporte | ExtraGene B25CA022-S | |
| The Home Depot | 2A060006 | ||
| banho-maria |
Referências
- Paris, H. S. Genetic Resources of Pumpkins and Squash, Cucurbita spp. Genetics and Genomics of Cucurbitaceae. Plant Genetics and Genomics: Crops and Models. Grumet, R., Katzir, N., Garcia-Mas, J. 20, (2016).
- Gong, L., Stift, G., Kofler, R., Pachner, M., Lelley, T.
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Reimpressões e permissões
