표준화 된 쥐 관상 동맥 링 준비 및 용기 직경에 따른 동적 장력 변화의 실시간 기록
Summary
본 프로토콜은 래트 관상동맥의 혈관 반응성을 측정하기 위한 와이어 근그래프 기술을 기술한다.
Abstract
심혈관 시스템 질환의 주요 사건으로 관상 동맥 질환 (CAD)은 전 세계 사람들의 생명과 건강을 심각하게 위협하는 죽상 동맥 경화증, 심근 경색 및 협심증의 주요 원인으로 널리 알려져 있습니다. 그러나 고립 된 혈관의 역동적 인 생체 역학적 특성을 기록하는 방법은 오랫동안 사람들을 당황하게했습니다. 한편, 관상동맥의 정확한 위치 결정 및 분리는 체외 동적 혈관 긴장 변화를 측정하기 위해 CAD 약물 개발의 추세가 되고 있다. 본 프로토콜은 래트 관상동맥의 거시적 동정 및 현미경적 분리를 기술한다. 혈관 직경을 따라 관상동맥 고리의 수축 및 팽창 기능을 확립된 다중 근전도 시스템을 사용하여 모니터링하였다. 샘플링에서 데이터 수집에 이르기까지 관상 동맥 고리 긴장 측정의 표준화되고 프로그래밍 된 프로토콜은 실험 데이터의 반복성을 크게 향상시켜 생리적, 병리학 적 및 약물 개입 후 혈관 긴장 기록의 신뢰성을 보장합니다.
Introduction
관상동맥 질환(CAD)은 전형적이고 대표적인 심혈관 질환으로 널리 인식되고 우려되고 있으며, 선진국과 개발도상국 모두에서 사망의 주요 원인이 되고 있다 1,2. 정상적인 심장 생리 기능을위한 혈액 및 산소 공급 경로로서, 순환 혈액은 심근 3,4의 표면에 두 가지 주요 관상 동맥과 혈액 혈관 네트워크를 통해 심장에 들어가고 영양을 공급합니다. 관상 동맥의 콜레스테롤과 지방 침착은 심장의 혈액 공급과 혈관 시스템의 폭력적인 염증 반응을 차단하여 죽상 동맥 경화증, 안정 협심증, 불안정 협심증, 심근 경색 또는 갑작스런 심장 사망을 유발합니다 5,6. 관상동맥의 병리학적 협착에 반응하여, 보상적 가속 생리적 심장 박동은 좌심실의 출력을 증가시킴으로써 심장 자체 또는 신체의 중요한 기관의 혈액 공급을 만족시킨다(7). 장기간의 관상 동맥 협착증이 제 시간에 완화되지 않으면 심장의 특정 영역에서 광범위한 새로운 혈관이 발생할 수 있습니다8. 현재, CAD의 임상 치료는 종종 약물 혈전 용해 또는 외과 적 기계적 혈전 용해 및 빈번한 약물 치료와 큰 외과 적 장애가있는 외인성 생체 공학 혈관 우회를 채택합니다 9. 따라서, 관상동맥 생리활성의 기능적 조사는 심혈관 질환(10)에 대한 여전히 시급한 돌파구이다.
생체 내 관상 동맥 압력, 혈관 긴장, 혈중 산소 포화도 및 pH 값11을 동적으로 기록 할 수있는 무선 원격 측정 시스템을 제외하고는 관상 동맥 생리 활성을 검출 할 수있는 기술적 수단이 없습니다. 따라서 관상 동맥의 텍스트 기밀성과 복잡성을 고려할 때 관상 동맥의 정확한 식별 및 분리는 의심 할 여지없이 시험관 내CAD의 여러 메커니즘을 탐구하기위한 최선의 선택입니다.
시리즈 다중 근그래프 시스템, 특히 와이어 현미경 사진 미세혈관 장력 검출기 ( 재료 표 참조)는 고정밀 및 연속 동적 기록의 특성을 갖는 작은 혈관, 림프관 및 기관지 관의 시험관내 조직 장력 변화를 기록하기 위한 매우 성숙한 시장성 장치이다(12). 상기 시스템은 직경이 60 μm 내지 10 mm인 공동구조체의 시험관내 조직 장력 특성을 기록하기 위해 광범위하게 이용되었다. 와이어 현미경 사진의 플랫폼의 연속 가열 특징은 불리한 외부 환경의 자극을 크게 상쇄합니다. 한편, 가스 혼합물 및 pH 값의 일정한 입력은 유사한 생리학적 상태(13)에서 보다 정확한 혈관 긴장 데이터를 얻을 수 있게 한다. 그러나 쥐 관상 동맥의 해부학 적 국소화의 복잡성을 고려할 때 (그림 1), 그 분리는 다양한 심혈관 질환 및 약물 개발에 대한 메커니즘의 탐구를 혼란스럽게하고 제한하고 있습니다. 따라서, 본 프로토콜은 래트 관상동맥의 해부학적 위치 및 분리 과정을 상세히 소개하고, 이어서 와이어 현미경 사진(14)의 플랫폼 상에서 장력 측정을 한다.
Protocol
Representative Results
Discussion
CAD를 앓고있는 광범위한 환자를 포함하는 관상 동맥 미세 순환의 교란은 점차적으로 인식되어 적절한 심근 관류의 기초를 염려하고 있습니다. 갑작스런 관상 동맥 심장 질환 및 심혈관 질환의 심각한 합병증을 고려할 때시기 적절한 약물 예방 및 치료는 CAD17을 가진 임상 개인에게 매우 중요합니다. 필연적으로, 관상 동맥 해부학의 비밀과 생리 구조의 복잡성은 CAD <sup cl…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작업은 쓰촨성 과학 기술 계획 (2022YFS0438), 중국 국립 자연 과학 재단 (82104533), 중국 박사 후 과학 재단 (2020M683273) 및 쓰촨성 과학 기술부 (2021YJ0175)의 핵심 R & D 프로젝트가 지원했습니다.
Materials
| Apigenin | Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China | 150731 | |
| CaCl2 | Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China | A501330 | |
| D-glucose | Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China | A610219 | |
| HEPES | Xiya Reagent Co., Ltd., Shandong, China | S3872 | |
| KCl | Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China | A100395 | |
| KH2PO4 | Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China | A100781 | |
| LabChart Professional version 8.3 | ADInstruments, Australia | — | |
| MgCl2·6H2O | Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China | A100288 | |
| Multi myograph system | Danish Myo Technology, Aarhus, Denmark | 620M | |
| NaCl | Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China | A100241 | |
| NaHCO3 | Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China | A100865 | |
| Steel wires | Danish Myo Technology, Aarhus, Denmark | 400447 | |
| U46619 | Sigma, USA | D8174 |
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