リン酸カルシウム誘発マウス腹部大動脈瘤モデル
Summary
このプロトコルは、AAAの病理学的特徴と分子メカニズムを研究するためのリン酸カルシウム誘発腹部大動脈瘤(AAA)マウスモデルについて説明しています。
Abstract
腹部大動脈瘤(AAA)は、世界中で発生する生命を脅かす心血管疾患であり、腹部大動脈の不可逆的な拡張を特徴としています。現在、いくつかの化学的に誘導されたマウスAAAモデルが使用されており、それぞれがAAAの病因の異なる側面をシミュレートしている。リン酸カルシウム誘導性AAAモデルは、アンジオテンシンIIおよびエラスターゼ誘導性AAAモデルと比較して、迅速かつ費用効果の高いモデルです。CaPO4 結晶をマウス大動脈に適用すると、弾性線維の分解、平滑筋細胞の喪失、炎症、および大動脈拡張に関連するカルシウム沈着が起こります。この記事では、CaPO4誘発AAAモデルの標準プロトコルを紹介します。プロトコルには、材料の準備、腎下腹部大動脈の外膜へのCaPO4の外科的適用、大動脈瘤を視覚化するための大動脈の採取、およびマウスの組織学的分析が含まれます。
Introduction
腹部大動脈瘤(AAA)は、腹部大動脈の永久的な拡張を特徴とする致命的な心血管疾患であり、破裂が発生すると死亡率が高くなります。AAAは、加齢、喫煙、男性の性別、高血圧、および高脂血症に関連しています1。細胞外マトリックス線維タンパク質分解、免疫細胞浸潤、血管平滑筋細胞の喪失など、いくつかの病理学的プロセスがAAA形成に寄与することが示されています。現在、AAAの病理学的メカニズムはとらえどころのないままであり、AAA1の治療のための証明された薬物はない。ヒトAAAの研究は、ヒト大動脈サンプルがほとんど存在しないために限られています。したがって、皮下アンジオテンシンII(AngII)注入、血管周囲または管腔内エラスターゼインキュベーション、および血管周囲リン酸カルシウムの適用を含む、いくつかの化学修飾誘発動物AAAモデルが確立され、広く採用されています2。一般的に使用されるマウスモデルは、リン酸カルシウム(CaPO4)を腎下腹部大動脈の外膜に適用することであり、これは費用効果が高く、遺伝子改変を必要としない。
動脈瘤変化を誘導するためのウサギの頸動脈へのCaCl2の直接大動脈周囲適用は、Gertzらによって最初に報告され3、後にマウスの腹部大動脈に適用された。このモデルは、マウス4のCaPO4結晶を使用して大動脈拡張を促進するために山之内らによって開発されました4。CaPO4のマウス大動脈への浸潤は、深いマクロファージ浸潤、細胞外マトリックスの分解、カルシウム沈着など、ヒトAAAで観察される多くの病理学的特徴を再現します。高脂血症などのヒトAAAの危険因子も、マウス5においてCaPO4誘導性AAAを増強する。ApoE-/-またはLDLR-/-マウスにおけるAngII灌流誘発AAAとは対照的に、CaPO4誘導性AAAは、ヒトAAAを模倣する腎下大動脈領域で生じる。現在、この方法は、遺伝子改変マウスにおけるAAA発生に対する感受性を評価し、薬物の抗AAA効果を評価するために広く適用されている6,7。
Protocol
Representative Results
Discussion
CaPO4の周囲への適用は、マウスにおいてAAAを誘導するための堅牢なアプローチである。いくつかの研究はCaPO4モデルを使用しており、これがマウス7,9でAAAを研究するための迅速かつ再現性のある方法であることを一貫して報告しています。このモデルは、ヒト大動脈瘤の特徴の一部を要約し、炎症や細胞外マトリックスの分解を含む…
Acknowledgements
この研究は、中国国家自然科学財団(NSFC、81730010、91839302、81921001、31930056、91529203)および中国国家重点研究開発プログラム(2019YFA 0801600)からの資金提供によって支援されました。
Materials
| CaCl2 | MECKLIN | C805225 | |
| NaCl | Biomed | SH5001-01 | |
| PBS | HARVEYBIO | MB5051 | |
| Small animal ventilator | RWD | H1550501-012 |
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